Эталон ответа к задаче №22.

Задача №1

Вы микроскопируете препарат больного с повреждением атипической мускулатуры предсердно-желудочковой области сердца.

1. Из каких кардиомиоцитов построена проводящая система сердца? Как соединены друг с другом кардиомиоциты?

2. Какую роль играет синусный узел проводящей системы сердца?

3. По какому пути распространяется импульс к сократительным кардиомиоцитам желудочков?

4. Как изменится характер сердечных сокращений при повреждении атипической мускулатуры?

Эталоны ответов

1. Проводящая система сердца построена из проводящих кардиомиоцитов, обеспечивающих ритмичное сокращение различных отделов сердца. Кардиомиоциты соединены друг с другом в области вставочных дисков и связаны в единую трехмерную сеть благодаря наличию анастомозов.

2. В синусном узле в клетках водителя ритма возникает генерация импульсов к сокращению. Они определяют ритм работы сердца.

3. Импульс из синусно-предсердного и предсердно-желудочкового узлов проходит по пучку Гиса, его ножкам и их разветвлениям к сократительным кардиомиоцитам. Желудочки задают ритм сердца.

4. Единый ритм сокращений желудочков будет нарушен.

Задача №2

При вдыхании воздуха, загрязненного пылью, в воздухоносные пути и альвеолы попадают инородные частицы, которые должны быть удалены с помощью естественных механизмов защиты бронхо-легочной системы.

1. Какие структуры слизистой выполняют функцию естественной защиты?

2. К какому типу эпителиев относится эпителий дыхательных путей?

3. Какую роль в защитных механизмах выполняют неинкапсулированные лимфатические фолликулы подслизистой оболочки бронхов?

4. К чему приводит нарушение естественных механизмов защиты бронхо-легочной системы?

Эталоны ответов:

1. В очищении воздуха принимают участие реснитчатый эпителий и бокаловидные клетки. Последние вырабатывают слизь, покрывающую поверхность эпителия. Она задерживает инородные пылевые частицы, которые удаляются направленным движением ресничек эпителия в сторону глотки.

2. Эпителий воздухоносных путей относится к типу многорядных эпителиев. Это однослойный многорядный призматический реснитчатый (мерцательный) эпителий.

3. Неинкапсулированные лимфатические фолликулы подслизистой оболочки состоят из В- лимфоцитов вырабатывающих антитела (Ig A), которые включаются в состав слизи и нейтрализуют антигенные компоненты.

4. При нарушении любого из естественных механизмов защиты создаются условия для задержки патогенных частиц, повреждающих слизистую, что приводит к частым воспалительным процессам в дыхательной системе.

Задача №3

В двух препаратах срезов легкого вы обнаружили две структуры, имеющие сходное строение. Обе выстланы мерцательным эпителием, имеют стенку, состоящую из слизистой, подслизистой, фиброзно-хрящевой и адвентициальной оболочек. Однако, одна из структур отличается более крупными размерами, в собственной пластинке слизистой мышечная пластинка отсутствует; в подслизистой основе располагаются белково-слизистые железы, фиброзно-хрящевая оболочка представлена полукольцами. Другая структура содержит развитую мышечную пластинку, имеет в большом объеме рыхлую волокнистую неоформленную соединительную ткань, крупные хрящевые пластины в фиброзно-хрящевой оболочке.

1. Из каких оболочек состоит стенка воздухоносных путей? Какую функцию выполняет волокнисто-хрящевая оболочка, какими структурами она образована?

2. В каком отделе воздухоносного пути жесткость и гибкость обусловлены наличием в ее стенке хрящевых полуколец?

3. Какой бронх характеризуется содержанием мышечных пучков, образующих замкнутые кольца?

4. Какие уровни срезов воздухоносных путей вы микроскопируете?

Эталоны ответов:

1. Стенка воздухоносных путей включает три оболочки: слизистую, волокнисто-хрящевую, адвентициальную. Волокнисто-хрящевая оболочка, выполняющая опорную функцию, образована гиалиновыми и эластическими хрящами, объединенными связками.

2. Хрящевые полукольца, связанные друг с другом плотной соединительной тканью, входят в состав стенки трахеи.

3. Мышечные пучки, образующие замкнутые кольца входят в состав собственной пластинки слизистой оболочки крупного бронха.

4. На первом срезе препарата находится срез трахеи. На втором крупный бронх.

Задача №4

На двух микропрепаратах представлены лимфоидные органы. Высказано предположение: на одном срезе небная миндалина, на другом червеобразный отросток.

1. Какую роль в организме играют лимфоидные органы: миндалины и червеобразный отросток?

2. Где располагаются небные миндалины? Какое строение имеет слизистая оболочка небной миндалины?

3. Где располагается червеобразный отросток? Какие особенности строения присущи червеобразному отростку?

4. На основании каких гистологических признаков можно различать миндалину и червеобразный отросток?

Эталоны ответов:

1. Лимфоидные органы в организме выполняют защитную роль: небные миндалины обеспечивают выполнение этой функции лимфоцитами, макрофагами и иммуноглобулинами. Червеобразный отросток, как и миндалины являются органом периферической иммунной системы. Он обеспечивает поглощение антигенного материала из просвета толстой кишки, участвует в развитии иммунных реакций.

2. Небные миндалины располагаются между небными дужками. Слизистая оболочка миндалины включает: эпителий – многослойный плоский неороговевающий, вдается в собственную пластинку, образуя 10 – 20 глубоких ветвящихся крипт, резко инфильтрированных лимфоцитами, макрофагами и плазматическими клетками.

Собственная пластинка содержит: 1) лимфатические узелки с крупными герминативными центрами,

2) межузелковую диффузную лимфоидную ткань,

3) подэпителиальную (подузелковую) соединительную ткань, инфильтрированную лимфоцитами и плазматическими клетками. В просвете крипт – разрушенные клетки эпителия лимфоциты и макрофаги. В подслизистой основе узелков нет.

3. Слизистая оболочка червеобразного отростка содержит: эпителий, состоящий из призматических и бокаловидных клеток; собственная пластинка содержит короткие крипты, многочисленные лимфатические узелки (В – зависимая зона) и межфолликулярные скопления лимфоидной ткани (Т – зависимая зона). В подслизистой основе располагаются лимфатические узелки.

4. Одним из различий является глубина крипт: в миндалинах (глубокие) и червеобразном отростке (короткие). Следует также обратить внимание на подслизистый слой в изучаемых препаратах – в червеобразном отростке в этом слое лимфатические узелки выявляются, а в миндалине они отсутствуют.

Задача №5

Вы микроскопируете препарат мочевого пузыря, эпителий которого может меняться в зависимости от его функционального состояния.

1. Каковы морфо-функциональные особенности переходного эпителия мочевого пузыря?

2. Где расположен переходный эпителий?

3. Какое свойство клеток поверхностного слоя эпителия обеспечивает непроницаемость для воды?

4. Определите растянут или сокращен мочевой пузырь на препарате?

Эталоны ответов:

1. Переходный эпителий – особый вид многослойного эпителия. Форма клеток и толщина всего эпителиального пласта зависят от функционального состояния органа. Эпителий состоит из 3-х слоев клеток: базального, промежуточного и поверхностного. Базальный слой образован клетками треугольной формы, прилежащими к базальной мембране. Промежуточный слой состоит из удлиненных клеток черепицеобразно накладывающихся друг на друга. Поверхностный слой образован крупными одноядерными клетками, которые при растяжении эпителия изменяют свою форму. На апикальной поверхности этих клеток имеются участки – пластинки плазмолеммы расположенные в виде «булыжной мостовой».

2. Переходный эпителий выстилает большую часть мочевыводящих путей (чашечки, лоханки, мочеточники, мочевой пузырь, часть мочеиспускательного канала).

3. Пластинки плазмолеммы апикальной поверхности клеток содержат скопления внутримембранных белковых частиц, плотные соединения этих клеток обеспечивают непроницаемость переходного эпителия для воды. Это свойство имеет важное функциональное значение, благодаря ему гипертоническая моча (накапливающаяся в мочевом пузыре) не разводится изотонической жидкостью из кровеносных сосудов подлежащей соединительной ткани собственной пластинки слизистой оболочки.

4. Форма клеток изменяется в зависимости от степени растяжения органа. Толщина эпителиального пласта может уменьшаться при сильном растяжении органа и увеличиваться при уменьшении степени растяжения органа. На данном препарате мочевой пузырь расслаблен (сокращен).

Задача №6

На микрофотографии представлены 2 нефрона. У одного приносящие и выносящие артериолы сосудистого клубочка имеют одинаковый диаметр, у другого приносящая артерия заметно больше выносящей.

1. Какие процессы происходят в нефронах?

2. Где располагаются нефроны, у которых приносящие и выносящие артериолы сосудистого клубочка имеют одинаковый диаметр; у каких нефронов приносящая артерия заметно больше выносящей?

3. Какую роль играет величина просвета приносящего и выносящего сосудов?

4. Интенсивность какого процесса снизилась бы, если бы удалось уравнять диаметры приносящей и выносящей артериол почечного тельца?

Эталоны ответов:

1. Нефрон является структурно-функциональной единицей почки. В него входят отделы, различающиеся своими морфофункциональными характеристиками:

- почечное тельце

- проксимальный каналец

- тонкая часть петли

- дистальный каналец

В почечном тельце нефрона происходит процесс фильтрации крови с образованием первичной мочи.

2. Корковые нефроны, у которых диаметры приносящих артериол больше выносящих располагаются в корковом веществе почки, их петли (тонкий каналец и дистальный каналец) могут находиться в корковом веществе или спускаться в наружную зону мозгового вещества.

Нефроны околомозговые (юкстамедуллярные) располагаются так, что их почечные тельца, проксимальный и дистальные отделы лежат в корковом веществе на границе с мозговым веществом почки, а их петли глубоко уходят в мозговое вещество. У этих нефронов диаметры выносящих артериол шире или равны приносящим.

3. Эффективность фильтрации в почечном тельце корковых нефронов обеспечивается высоким давлением крови в капиллярах клубочка (50 – 70 мм рт. ст.). Это давление создается за счет меньшего диаметра выносящей артериолы по сравнению с приносящей, а также большим объемом проходящей через них крови. Сосудистые клубочки юкстамедуллярные (околомозговые) функционируют под малым давлением крови (диаметр выносящей артериолы шире или равен приносящей) и не играют важной роли в процессе фильтрации. Таким образом величины диаметров приносящих и выносящих артериол почечного тельца играют решающую роль в создании фильтрационного давления крови.

4. Если бы удалось уравнять во всех нефронах диаметры приносящей и выносящей артериол почечного тельца, резко снизился бы процесс фильтрации.

Задача №7

При микроскопии двух препаратов пищевода человека Вы обнаружили в одном из них в мышечной оболочке поперечно-полосатую, а в другом – гладкую мышечную ткань.

1. Какое строение имеет стенка пищевода?

2. Какова морфофункциональная характеристика гладкой и поперечно-полосатой мышечных тканей?

3. Какую роль играет мышечная оболочка стенки пищевода?

4. Что может служить ориентиром для определения уровня пищевода на гистологическом срезе?

Эталоны ответов:

1. Стенка пищевода образована тремя оболочками: слизистой, мышечной и адвентицией.

2. Гладкая мышечная ткань состоит из клеток – гладких миоцитов. Клетки веретеновидной формы, с одним ядром в центре, не обладающие поперечной исчерченностью, они образуют многочисленные соединения друг с другом в виде пластов пучков, слоев. Эта ткань входит в состав стенки внутренних органов.

Поперечно-полосатая мышечная ткань образована волокнами, которые обладают поперечной исчерченностью вследствие особого упорядочного расположения в них актиновых и миозиновых миофиламентов.

3. Сокращение мышечной оболочки пищевода способствует прохождению пищи по пищеводу в направлении желудка.

4. Мышечная оболочка состоит из внутреннего циркулярного и наружного продольного слоев, разделенных прослойкой рыхлой волокнистой соединительной ткани.

В верхней трети пищевода эти слои представлены поперечно-полосатой мышечной тканью.

В средней трети пищевода мышечная оболочка содержит как поперечно-полосатую так и гладкую мышечную ткани.

В нижней трети оба слоя образованы только гладкой мышечной тканью.

Это может служить ориентиром для определения уровня пищевода на гистологическом срезе.

1 - препарат из верхней трети пищевода, а 2 - из нижней.

Задача №8

На срезе придатка семенника просветы канальцев содержат зрелые сперматозоиды. При субмикроскопическом исследовании обнаружено, что большая часть клеток, выстилающих канальцы придатка, лишена ресничек. В придатке семенника избыточное количество сперматозоидов.

1. Какое строение имеет стенка канальца придатка семенника?

2. Какие роли играют клетки эпителия канальцев придатка семенника?

3. Какие структуры обеспечивают продвижение спермы по семявыводящим путям?

4. Что может быть причиной избыточного количества спермы в придатке семенника?

Эталоны ответов:

1. Стенка протока придатка семенника состоит из трех оболочек: слизистой, мышечной и адвентициальной.

2. Слизистая оболочка образована эпителием, под которым располагается тонкая собственная пластинка из рыхлой волокнистой ткани. Эпителий многорядный, содержит клетки двух типов: главные и базальные.

Главные – высокие призматические, покрыты длинными ресничками, биение которых способствует транспорту спермиев в проток придатка; в них вырабатываются вещества, способствующие дозреванию спермиев.

Базальные – принимают участие в выработки жидкости, разбавляющей сперму.

3. Структурами, обеспечивающими продвижение спермы по семявыносящим путям являются клетки эпителия реснитчатые, циркулярный и продольный слои мышечной оболочки.

4. Избыточное количество сперматозоидов в канальцах придатка семенника свидетельствует о нарушении эвакуаторной функции придатка, связанном с отсутствием ресничек.

Задача №9

Известно, что удаление поджелудочной железы смертельно для организма.

1. Какую роль играет смешанная поджелудочная железа?

2. Какие инсулоциты входят в состав панкреатических островков железы?

3. Какие гормоны вырабатывают А- и В- клетки; какова их роль в углеводном обмене?

4. Почему удаление железы для организма смертельно?

Эталоны ответов:

1. Смешанная поджелудочная железа состоит из экзокринной и эндокринной частей. Первая вырабатывает панкреатический сок, содержащий пищеварительные ферменты, вторая – ряд гормонов.

2. В состав панкреатических островков входят инсулоциты А, В, Д, Д1, РР.

А – клетки содержат – ГЛЮКАГОН – гормон повышающий уровень глюкозы в крови путем расщепления гликогена и липидов.

В – клетки содержат – ИНСУЛИН – гормон, стимулирующий синтез гликогена и поглощение глюкозы клетками различных тканей, вызывает снижение уровня глюкозы в крови.

Д – клетки содержат гормон – СОМАТОСТАТИН – обладающий многообразным действием, в том числе он угнетает секрецию А- и В- клеток островков.

3. Недостаточность В- клеток приводит к недостатку гормона ИНСУЛИНА, оказывающего гипогликемическое действие, так как он способствует усвоению глюкозы, необходимого источника клеточной энергии, клетками тканей. Поэтому при недостатке инсулина уровень глюкозы в тканях снижается, а содержание ее в крови резко возрастает, что приводит к сахарному мочеизнурению (сахарному диабету).

4. Удаление поджелудочной железы несовместимо с жизнью, т. к. отсутствие гормонов, синтезируемых эндокринной частью железы приводит к нарушениям регуляции углеводного и других видов обмена в тканях; удаление экзокринной части железы, вырабатывающей панкреатический сок богатый пищеварительными ферментами, участвующими в расщеплении белков, жиров и углеводов до конечных продуктов, делает невозможным процесс пищеварения.

Задача №10

Гормон околощитовидной железы регулирует состояние костной ткани, воздействуя на минеральный обмен. При избытке этого гормона наблюдается резкое повышение уровня кальция в крови.

1. Какие клетки костной ткани Вам известны?

2. Какую функцию выполняют остекласты?

3. Какую роль играет гормон околощитовидной железы?

4. Какие изменения в костной ткани происходят при повышении уровня кальция в крови?

Эталоны ответов:

1. Клетками костной ткани являются: остеобласты, остеоциты, остеокласты.

2. Остеокласты осуществляют разрушение или резорбцию костной ткани. Так как резорбция кости сопровождается освобождением связанного с ее матриксом кальция, эти клетки играют важнейшую роль в поддержании кальциевого гомеостаза.

3. Паратгормон участвует в регуляции кальциевого обмена: он увеличивает содержание и функциональную активность остеокластов в костной ткани, стимулирует реабсорбцию кальция в почечных канальцах.

4. При гиперпаратиреозе (повышенной продукции паратгормона) происходит быстрое разрушение костной ткани (резорбция) многочисленными остеокластами, что клинически проявляется патологическими переломами костей.

Задача №11

Медицинский лабораторный техник обнаружил в срезах, изготовленных из аутопсийного материала, фиксированного кислым формалином зерна и глыбки темно – коричневого пигмента.

Задания:

1. Что могло явиться причиной появления зерен пигмента в фиксированном препарате?

2. Можно ли исправить этот артефакт?

3. Цель и общие принципы фиксации.

4. Правила работы с фиксаторами.

Эталон ответа к задаче №11:

1. Зерна пигмента есть результат реакции формалина с гемоглобином ткани.

2. Пигмент можно удалить, помещая срезы на 15–20 мин в 1-5% раствор аммиака или 70% спирт, затем промыть водой. Можно удалить пигмент в 1% КОН в 80° спирте (10 мин) с последующее промывкой проточной водой.

3. Фиксация обеспечивает сохранение тканевых структур и их уплотнение вследствие коагуляции белка и стабилизации липидов. Степень изменения структур находится в прямой зависимости от концентрации фиксатора и времени пребывания в нём, pH фиксатора должен быть близок к таковой в тканях, т.е. близок к нейтральному. Фиксатор подбирают в зависимости от цели исследования.

4. Полноценная фиксация материала обеспечивается при соблюдении

следующих правил:

· кусочки ткани погружают в фиксатор немедленно после взятия;

· объём фиксатора в 10-20 раз должен превышать объём фиксируемой ткани;

· нельзя использовать фиксатор повторно;

· при изменении цвета фиксатора его заменяют свежей порцией;

· следует точно соблюдать время, предлагаемое для каждого конкретного фиксатора, а поскольку все фиксаторы токсичны или ядовиты необходимо соблюдать правила техники безопасности: работать в вытяжном шкафу, тщательно «отмывать» от фиксатора в рекомендуемой среде.

Задача №12

Медицинский лабораторный техник обратил внимание, что образцы ткани, извлекаемые из фиксатора, слишком уплотнены.

Задания:

1. Что явилось причиной переуплотнения образца ткани в фиксаторе?

2. Является ли уплотнение помехой для последующего исследования и можно ли эту погрешность устранить?

3. Какие фиксаторы вы знаете?

4. Как готовится нейтральный формалин?

Эталон ответа к задаче №12:

1. Причиной переуплотнения ткани, затрудняющей дальнейшую обработку, может быть существенное увеличение времени фиксации.

2. В случаях значительного уплотнения ткани, кусочки следует поместить на 1 – 2 часа в 10% раствор лимонной кислоты.

3. Фиксаторы бывают простые и сложные. Основной широко распространённый фиксатор – формалин, представляющий собой 40% раствор формальдегида. Из него готовят 10-12% нейтральный формалин (pH – 7.0). В качестве простых фиксаторов используют 80° - 100° этиловый спирт или ацетон. Эти фиксаторы приводят к осаждению белков. При использовании этих фиксаторов следует точно соблюдать время, т.к. может произойти переуплотнение и пересушивание.

4. Для приготовления нейтрального формалина в банку с формалином (40% формальдегидом) засыпают карбонат кальция или магния из расчёта 100 г на 1 л. Далее из надосадочной жидкости готовят водный раствор требуемой концентрации.

Задача №13

Резка парафинового блока на санном микротоме вызвала затруднение у медицинского лабораторного техника – гистолога: ткань плохо резалась, имела белёсоватый цвет, срезы плохо расправлялись, сморщивались.

Задания:

1. Назовите возможную причину затруднения при резке блока.

2. Возможно ли устранение этого дефекта?

3. Устройство санного микротома.

4. Роль обезвоживания в приготовлении парафиновых срезов.

Эталоны ответа к задаче №13:

1. Причиной плохой резки является недостаточное обезвоживание ткани.

2. Этот недостаток можно попытаться исправить путём расплавления парафина в термостате и последующего пропускания образца по батарее в обратном порядке до абсолютного спирта; выдерживают в спирте необходимое время и повторяют процедуру обезвоживания и заливки в парафин.

3. Санные микротомы характеризуются горизонтальным движением ножа и вертикальным подъёмом блокодержателя. Существует несколько вариантов подъёма парафинового блока к поверхности ножа. Принцип работы нашего санного микротома заключается в том, что при обратном ходе ножа ножевые салазки толкают стержень со шкалой регулятора подачи, перемещая его. Движение стержня передаётся на тягу, далее к микровинту, поднимающему блок вверх.

4. Цель обезвоживания – удаление воды из образцов ткани, что необходимо для качественной пропитки парафином.

Задача №14

У медицинского лабораторного техника возникли затруднения при резке на ротационном микротоме парафинового блока – парафин крошился, ткань плохо резалась.

Задания:

1. Почему при резке блоков может крошиться парафин?

2. Возможно ли устранение этого артефакта?

3. Особенности устройства ротационного микротома.

4. Опишите способы монтирования парафиновых срезов на предметные стёкла.

Эталоны ответа к задаче №14:

1. Причинами раскрашивания парафина могут быть:

· его излишняя твёрдость (высокая точка плавления);

· слишком большой угол наклона ножа;

· низкая температура окружающей среды.

2. Можно попытаться устранить артефакт следующим образом:

а) подышать на блок перед получением среза;

б) уменьшить угол наклона ножа;

в) перезалить образец заново.

3. Ротационный микротом предназначен для резки парафиновых блоков. С помощью этого типа микротомов можно получать серийные срезы. Микротом характеризуется вертикальным ходом ножа и горизонтальной подачей (приближением к ножу) парафинового блока.

4. Наиболее удобное устройство для монтирования срезов – современный гистобат с эбонитовой изоляцией от нагревательного элемента и регулируемым подогревом воды. Срез осторожно опускают на поверхность тёплой (40°-42°) воды, где он расправляется. Затем подводят под него предметное стекло и «вылавливают» его. После этого со среза удаляется лишняя вода, срез подсушивается на гистоплейте или в термостате при температуре 37°С. При отсутствии гистобата можно монтировать срезы, подогревая воду прямо на стекле с помощью спиртовки, срез в тёплой воде расправляется (нельзя допускать расплавления парафина).

Задача №15

При подготовке блока к резке медицинский лабораторный техник обратил внимание на то, что ткань отделяется от парафина.

Задания:

1. Назовите возможные причины плохого связывания ткани с парафином.

2. Возможно ли устранение этого дефекта?

3. Современное оборудование для заливки ткани в парафин.

4. Особенности заполнения документации в патогистологической лаборатории и маркировки стёкол.

Эталоны ответа к задаче №15:

1. К причинам раскрашивания парафина можно отнести:

· плохую пропитку парафином;

· заливку слишком холодным парафином;

· плохое удаление следов спирта.

2. Данный артефакт может быть устранён перезаливкой образца, после его расплавления и обработки в среде для удаления спирта.

3. В настоящее время привычный ручной способ заливки в парафин в бумажные коробочки заменяется на аппаратный, в котором автоматически регулируется подогрев ёмкости с парафином. Через специальный кран парафин заливают в одноразовую формочку с образцом, после чего он быстро охлаждается. Аппарат имеет плата «горячее» и «холодное». Заливка ведётся на «горячем» и затем переносится на «холодное» плато.

4. К документации, ведение которой обязательно, относятся:

· направление врача на патогистологическое исследование;

· алфавитный журнал для регистрации поступления биопсийного и операционного материала;

· журнал для регистрации аутопсийного материала;

· журнал регистрации выдачи биопсийного материала.

Особенностью маркировки является присвоение порядкового номера материалу, присланному на исследование. Этот номер сохраняется до окончания исследования и в архиве.

Задача №16

Медицинский лабораторный техник не сумел сделать срезы с парафинового блока. Нож как бы «подскакивал» на поверхности образца, образуя поперечные полосы, ткань крошилась, хотя парафин окружающий образец, резался нормально.

Задания:

1. Назовите возможные причины артефакта резки.

2. Возможно ли устранение подобного артефакта?

3. Ножи для изготовления парафиновых блоков и их подготовка к работе.

4. Особенности техники вырезки материала для исследования.

Эталоны ответа к задаче №16:

1. Предположительно артефакт связан с ошибкой фиксации (переуплотнение) или обезвоживания (пересушивание).

2. Если не удаётся резка блока при охлаждении кусочком льда, материал выбраковывается.

3. Для получения гистологических срезов используются ножи, различающиеся по форме, длине, углу сечения лезвия. По форме это стальной клин, имеющий дополнительную клиновидную заточку. Длина ножа до 50 см. Качество стали и поверхность ножей различна, т.к. они предназначены для резки различной плотности образцов. В настоящее время «опасные» ножи заменяют на сменные лезвия (одноразовые ножи) т.н. металлические магнитные лезвия, закрепляемые в держателе, имеющем форму обычного микротомного ножа. После резки 20 - 30 блоков лезвие меняют. Сменные лезвия менее опасны, не требуют ежедневной заточки, которая требует специальных навыков квалифицированного лаборанта.

4. При вырезании кусочка выбирают участок с патологическими изменениями и берут материал на границе с нормальной тканью. Недопустимо сдавливание ткани, подсушивание, промывание водой. Сразу после вырезания объект с этикеткой погружают в фиксатор. Полые органы и плёночные ткани растягивают с помощью препаровальных игл в фиксаторе в парафиновой ванночке.

Задача №17

При резке парафинового блока у медицинского лабораторного техника срезы сморщивались, прилипали к поверхности ножа, скручивались, плохо расправлялись в тёплой воде.

Задания:

1. Назовите возможные причины затруднения резки материала.

2. Возможно ли устранение этого артефакта?

3. Необходимое оборудование патогистологической лаборатории.

4. Особенности работы с биопсийным материалом.

Эталон ответа к задаче №17:

1. Причинами затруднения резки парафинового блока могут быть:

· недостаточный угол наклона ножа;

· высокая температура в помещении;

· слишком легкоплавкий парафин;

· электризация среза.

2. Исправить положение можно, попытавшись:

· изменить угол наклона ножа;

· охладить блок в холодильнике;

· перезалить образец в тугоплавкий парафин;

· подуть на блок.

3. В комнате, где проводятся гистологические работы, должен быть вытяжной шкаф, сейф для хранения спирта и реактивов. В перечень необходимого оборудования включаются:

· технические и торсионные весы;

· pH – метр;

· микротомы (санный или ротационный);

· криостат;

· гистобат;

· гистоплейты;

· термостаты на 37° С и 56° С;

· холодильник;

· микроскопы;

· лабораторная посуда, предметные и покровные стёкла.

4. Для срочных биопсий (операционный материал) необходим быстрый ответ. С этой целью используется либо быстрое замораживание образца без фиксации, либо быстрая фиксация материала:

· объект нагревают до кипения в 10% нейтральном парафине, затем 2-5 мин промывают проточной водой;

· можно фиксировать в ацетоне при 56° С 15 мин далее хлороформ, ксилол, парафин;

· В последнее время предлагается использование микроволновой техники.

Задача №18

Медицинский лабораторный техник испытывал затруднение при резке парафинового блока. Срезы покрывались полосами, разрывались.

Задания:

1. Назовите возможные причины затруднения в резке данного блока.

2. Возможно ли исправить этот артефакт?

3. Какие виды парафина используются в гистологической практике.

4. Техника обезвоживания образцов ткани.

Эталон ответа к задаче №18:

1. Причинами затруднения резки могут быть:

· тупые ножи, ножи с зазубринами;

· высокое содержание солей кальция в образце;

· грязный парафин.

2. Для устранения артефакта следует сменить (или хотя бы передвинуть нож). Если это не поможет дубль образца следует подвергнуть декальцификации.

3. В гистологической практике используют твёрдые тугоплавкие парафины, причём при пропитывании парафином добавляется воск или синтетический пластификатор. В последнее время выпускается готовый пластичный парафин, удовлетворяющий всем требования гистологов.

4. Обезвоживание проводиться в спиртах возрастающей концентрации, далее в жидкостях растворяющих парафин. Обезвоживание можно проводить вручную, в банках с притёртыми пробками или в специальных автоматах для проводки материала.

Задача №19

Приступив к окрашиванию парафинового среза, медицинский лабораторный техник забыл провести депарафинизацию.

Задания:

1. Может ли быть окрашен недепарафинизированный препарат? С какой целью проводиться депарафинизация?

2. Возможна ли коррекция подобной ошибки?

3. Виды наиболее часто используемых гистологических красителей.

4. Что такое оптически – прозрачные среды, когда они используются?

Эталон ответа к задаче №19:

1. Недепарафинизированный препарат не может быть окрашен. Депарафинизация используется для удаления парафина из среза. Депарафинизированный препарат можно высушить и сохранять. Растворитель парафина – ксилол следует менять после обработки 100-200 срезов.

2. Коррекция невозможна.

3. В гистологической практике применяют основные (щелочные), кислотные и нейтральные красители. Основные красители окрашивают структуры кислой природы. В первую очередь ядра клеток (ДНК, хроматин, ядрышковая РНК). Это окрашивание называют базофильным. Среди этих красителей самый распространённый ядерный краситель – гематоксилин. Структуры цитоплазмы с основными свойствами окрашиваются кислыми красителями. Самый распространённый кислый краситель – эозин. Среди нейтральных красителей наиболее употребим краситель – Судан (Судан III, IV), растворяющийся в жирах. Его используют при выявлении жировых включений в цитоплазме клеток.

4. Готовые окрашенные срезы заключают в оптически прозрачные среды. Для длительного хранения парафиновые срезы вновь обезвоживают в спиртах, заключают в канадский бальзам или синтетические смолы. Замороженные срезы, используемые для выявления жировых включений, следует заключать в водные – оптически прозрачные срезы, например, глицерин – желатину, т.к. использование спиртов недопустимо вследствие растворения жира.

Задача №20

Окрасив депарафинизированный срез гематоксилином, медицинский лабораторный техник остался недоволен результатом: фон препарата был тёмным, структура ядер не просматривалась.

Задания:

1. Какой этап метода окраски гематоксилином выполнен неудовлетворительно?

2. Можно ли исправить этот препарат?

3. Что такое регрессивный и прогрессивный метод окрашивания ядер гематоксилином?

4. Какие методы приготовления срезов ткани вы знаете?

Эталон ответа к задаче №20:

1. Неудовлетворительно выполнен этап дифференцировки.

2. Препарат можно исправить, если он ещё не заключён в оптически прозрачную среду (канадский бальзам). В этом случае его нужно дополнительно обрабатывать дифференцирующей жидкостью (соляно – кислый спирт), контролируя результаты под микроскопом.

3. Существует два подхода к окраске ядер гематоксилином. Можно подбирать время окраски, не допуская перекрашивания. Обычно этот подход используется при окраске замороженных срезов с целью выявления включений жира в цитоплазме клеток. Это прогрессивный метод окрашивания. При окрашивании парафиновых срезов чаще используется регрессивный метод – срез перекрашивается, а затем лишняя краса смывается дифференцирующей жидкостью.

4. Можно готовить срезы тканей, обезвоженных и залитых в парафин или делать в криостате срезы замороженных образцов фиксированных и нефиксированных тканей.

Задача №21.

Задания:

1. Что могло явиться причиной появления зерен пигмента в фиксированном препарате?

2. Можно ли исправить этот артефакт?

3. Цель и общие принципы фиксации.

4. Правила работы с фиксаторами.

Эталон ответа к задаче №21:

1. Зерна пигмента есть результат реакции формалина с гемоглобином ткани.

4. Полноценная фиксация материала обеспечивается при соблюдении

следующих правил:

· кусочки ткани погружают в фиксатор немедленно после взятия;

· объём фиксатора в 10-20 раз должен превышать объём фиксируемой ткани;

· нельзя использовать фиксатор повторно;

· при изменении цвета фиксатора его заменяют свежей порцией;

Задача №22.

Задания:

1. Что явилось причиной переуплотнения образца ткани в фиксаторе?

2. Является ли уплотнение помехой для последующего исследования и можно ли эту погрешность устранить?

3. Какие фиксаторы вы знаете?

4. Как готовится нейтральный формалин?

Эталон ответа к задаче №22.

Задача №23.

Задания:

1. Назовите возможную причину затруднения при резке блока.

2. Возможно ли устранение этого дефекта?

3. Устройство санного микротома.

4. Роль обезвоживания в приготовлении парафиновых срезов.

Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 13; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

12 3 4 5 6 7 8 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!