Среда Мурансиге-Скуга, приготовление.
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ДЕПАРТАМЕНТ НАУКИ И ОБРАЗОВАНИЯ
ФГБОУ ВО «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия»
Кафедра «Лесные культуры»
Реферат
На тему: « Среды в микроклональном размножении. Среда Мурансиге-Скуга, приготовление.»
Наименование магистерской программы
Лесные культуры, селекция, семеноводство
Направление подготовки
35.04.01 Лесное дело
Квалификация (степень) выпускника
Магистр
Составил:
Магистрант II курса
Группы 11-МЗ
Замятина Анастасия Романовна
Нижний Новгород, 2020
Содержание
1. Введение
2. Среды в микроклональном размножении.
3. Среда Мурансиге-Скуга, приготовление.
4. Заключение
Введение
Микроклональное размножение является одним из подходов по изучению особенностей ответа растительного организма на факторы окружающей среды, а также позволяет быстро и эффективно увеличивать количество экспериментально материала .
Размноженные в условиях in vitro растения позволяют более быстро и эффективно проводить эксперименты по оценке влияния негативных стрессовых воздействий по сравнению с натурными экспериментами, требующими как больших площадей, так и времени, затрачиваемого на выращивание растений в грунте.
Микроклональное размножение растений позволяет проводить эксперименты круглогодично, что особенно важно в климатических условиях Восточной Сибири, где вегетационный период длится от 30 дней на севере до 140 дней на юге.
|
|
|
При сопоставлении с классическим способом размножения микроклональное размножение содержит ряд достоинств.
К данным достоинствам относятся:
- получение освобожденных от вирусов клонов, которые считаются совершенной генетической копией начального родительского растения-донора;
- получение большого числа потомков от 1-го растения; более быстрый рост, развитие и переход к репродуктивной фазе;
- отсутствие зависимости от времени года и погодных условий;
- наименьшие издержки на посадочную площадь;
- возможность размножать растения, сложно размножаемых классическими методами.
Среды в микроклональном размножении
Среда Андерсона для рододендронов ANDERSON’s RHODODENDRON
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами.
Среда Чи и Пул (C2D) витис CHÉE AND POOL (C2D) VITIS
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами.
Среда Чу № 6 CHU (N6)
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура CHU VITAMIN содержит 0,4 г или 1,0 г витаминов.
Среда CLC/ипомея базовая CLC/IPOMOEA BASAL
|
|
|
- для роста эмбриогенного каллуса с витаминами;
- для развития с витаминами.
Среда Де Грифа и Якобса DE GREEF & JACOBS
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура DE GREEF & JACOBS VITAMIN содержит 11,20 г или 28,00 г витаминов.
Среда DKW/JUGLANS DKW/JUGLANS
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура DKW/JUGLANS VITAMIN содержит 10,50 г или 26,25 г витаминов.
Среда Эриксона ERIKSSON (ER)
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура ERIKSSON (ER) VITAMIN содержит 0,35 г для приготовления 100 мл исходного раствора витамина X 1000.
Среда Гамборга B5 GAMBORG B5
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура GAMBORG B5 VITAMIN содержит 11,20 г или 28,00 г витаминов.
Среда Грессхоффа и Дойя (DBM2) GRESSHOFF & DOY (DBM2)
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура GRESSHOF & DOY (DBM2) VITAMIN содержит 11,6 г или 29,0 г витаминов.
Среда Хеллера HELLER
- макро- и микроэлементы.
Среда Као и Мичайлук KAO & MICHAYLUK
- микро- и макроэлементы.
Среда Кнудсона для орхидей, модификация морель KNUDSON C ORCHID, MOREL MODIFICATION
- микро- и макроэлементы.
Среда Линдеманна для орхидей LINDEMANN ORCHID
- микро- и макроэлементы.
Среда Линсмайера и Скуга LINSMAIER & SKOOG
|
|
|
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура LINSMAIER & SKOOG VITAMIN содержит 10,04 г или 25,10 г витаминов.
Среда Литвея LITVAY
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура LITVAY VITAMIN содержит 10,07 г или 25,18 г витаминов.
Среда МакКауна McCOWN WOODY PLANT
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN / McCOWN WOODY PLANT VITAMIN содержит 10,4 г или 26,0 г витаминов.
Среда Мурасиге-Скуга MURASHIGE & SKOOG
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура MURASHIGE & SKOOG VITAMIN содержит 10,31 г или 25,80 г витаминов;
- микро- и макроэлементы с модифицированными витаминами;
- микстура MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN/McCOWN WOODY PLANT VITAMIN содержит 10,4 г или 26,0 г витаминов;
- микро- и макроэлементы с витаминами Гамборга;
- микро- и макроэлементы с витаминами Nitsch;
- микро- и макроэлементы с MES буфером;
- микро- и макроэлементы с витаминами и MES буфером;
- микро и 1/2 макроэлементы;
- микро и 1/2 макроэлементы с витаминами;
- микро и 3/4 макроэлементы;
- микро и 3/4 макроэлементы с витаминами;
- микро- и макроэлементы, 1/2 NH4NO3 и KNO3;
- микро- и макроэлементы, 1/2 NH4NO3 и KNO3 с витаминами;
- микро- и макроэлементы, без NH4NO3 M 0238 микро- и макроэлементы, NH4NO3 замещен на NaNO3;
|
|
|
- микро- и макроэлементы, модификация Финер и Нагасава ;
- микро- и макроэлементы, модификация ван дер СAЛМ;
- микро- и макроэлементы, модификация ван дер СAЛМ с витаминами;
- Среда Мурасиге-Миллера Сингониум MURASHIGE & MILLER SYNGONIUM STAGE I & II.
Среда Мурасиге - Миллера MURASHIGE & MILLER SHOOT MULTIPLICATION MEDIUM B
Среда Нитч NITSCH
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- микстура NITSCH VITAMIN содержит 10,85 или 27,13 г витаминов.
Среда NLN
- микро- и макроэлементы;
- NLN VITAMIN МИКСТУРА.
Среда ORCHIMAX
- без активированного угля;
- с активированным углем.
Среда Кворина-Лепуавра QUOIRIN & LEPOIVRE
- микро- и макроэлементы;
- микро- и макроэлементы с витаминами;
- Среда RUGINI OLIVE.
Среда Шенка Хилдебранта SCHENK & HILDEBRANDT
- микро- и макроэлементы;
- микстура SCHENK & HILDEBRANDT VITAMIN 10,1 г или 25,3 г витаминов.
S-Среда Милии де Боутураге S - MEDIUM Milieu S Milieu de Bouturage
- микро- и макроэлементы с витаминами, буфером и органикой.
Среда WESTVACO WV5
- микро- и макроэлементы с витаминами.
Среда Вацин и Вент VACIN & WENT
- микро- и макроэлементы.
Среда Вайт WHITE
- микро- и макроэлементы.
МИКРО- и МАКРОСМЕСИ
Микстура Гамборга B5
MICRO-MACRO GAMBORG’S B5
- MICRO-SALT микстура B5
- MACRO-SALT микстура B5
Микстура Мурасиге - Скуга
MICRO-MACRO MURASHIGE & SKOOG
- MICRO-SALT микстура MS
Микстура Нитч
MICRO-MACRO NITSCH
- MICRO-SALT микстура NITSCH
- MACRO-SALT микстура NITSCH
Компоненты сред
Каждая среда независимо от назначения имеет 6 компонентов:
1. Микроэлементы
2. Макроэлементы
3. Источник железа
4. Источник углерода
5. Витамины
6. Стимуляторы роста, которые подбираются к каждому виду.
Ауксины:
- ИУК(индолилуксусная кислота)
- ИМК(индолилмасляная кислота)
- НУК(нафтилуксусная кислота)
- НОУК(хлорфинилоксиуксусная кислота)
Цитокинины:
- 6-БАП-(6-бензиламинопурин)
- 2-ИП(изопентиламинопурин)
- Кинетин (фурфуриламинопурин)
- Зеатин.
Гиббереллины:
ГК (гибберелловая кислота)
ИУК окисляется продуктами метаболизма тканей, его нельзя использовать как единственный ауксин.
Зеатин и ГК- термолобильны и их нельзя автоклавировать.
Одним из компонентов среды, дающие ей желирующие свойства являются, напр. (из водорослей) его кладу 6 гр на 1 л среды.
Среда Мурансиге-Скуга, приготовление.
Эффективность микроразмножения в значительной степени зависит от правильного выбора питательной среды. Для культивирования органов и тканей чаще применяют твердую агаросодержащую среду. Любая питательная среда включает следующие группы веществ: макро- и микроэлементы, углеводы, витамины, аминокислоты, регуляторы роста гормональной природы. При клональном микроразмножении растений наиболее часто используют специально разработанную питательную среду Мурасиге-Скуга (табл. 1)
Обязательным условием является присутствие в питательной среде кроме элементов питания гормональных факторов, которые способствуют дифференциации каллусных клеток. Для приготовления питательной среды Мурасиге-Скуга изначально готовят маточные (концентрированные) растворы макросолей, микросолей и витаминов (табл. 2), которые впоследствии используют многократно. Маточные растворы фитогормонов готовят непосредственно перед использованием питательной среды.
Приготовление и хранение маточных растворов.
1. Приготовление маточного раствора макросолей. Каждую соль из состава маточного раствора макросоли (KNO3, NH4NО3, KH2PO4, MgSO4 × 7H2O и CaCl2 × 2H2O) по прописи Мурасиге-Скуга растворить в отдельном стаканчике при нагревании, затем слить в стеклянную колбу и добавить дистиллированную воду до необходимого объема (для предотвращения выпадения осадка в охлажденную смесь маточного раствора макросоли последним компонентом добавляют раствор солей магния). Для приготовления 1 л питательной среды Мурасиге-Скуга необходимо взять 50 мл маточного раствора макросоли.
2. Приготовление маточного раствора микросолей. Каждую соль из состава маточного раствора микросоли (Na2MoО4 × 2H2O, CuSO4 × 5H2O, H3BO3, MnSO4 × 4H2O, ZnSO4 × 7H2O, KJ и CoCl2 × 6H2O) по прописи Мурасиге-Скуга (табл. 2) растворить в отдельном стаканчике при нагревании, затем слить в стеклянную колбу и добавить дистиллированную воду до необходимого объема (для предотвращения выпадения осадка в охлажденную смесь маточного раствора микросоли последним компонентом добавляют раствор солей молибдена). Для приготовления 1 л питательной среды Мурасиге-Скуга необходимо взять 1 мл маточного раствора микросоли.
3. Приготовление маточного раствора хелата железа. Для приготовления хелата железа необходимо растворить отдельно FeSO4 × 7H2O и Na2 × ЭДТА в 450 мл дистиллированной воды, подогревая и постоянно 8 помешивая раствор, затем их смешать, установить кислотность среды на уровне pH = 5,5 и добавить дистилированной воды до объема 1 л. Для приготовления 1 л питательной среды Мурасиге-Скуга необходимо взять отдельно по 5 мл маточных растворов FeSO4 × 7H2O и Na2 × ЭДТА.
4. Приготовление маточных растворов витаминов. Взять десятикратные навески каждого витамина по прописи Мурасиге-Скуга (тиамин, пиридоксин, глицин, иноситол и никотиновая кислота) и растворить отдельно в 10 мл дистиллированной воды. В 1 мл каждого из приготовленных растворов будет содержаться порция витамина, необходимая для приготовления 1 л питательной среды Мурасиге-Скуга.
5. Приготовление маточного раствора фитогормона ауксина ИУК (индолилуксусной кислоты). Взвесить 100 мг ИУК и растворить в небольшом количестве спирта (1,0–2,0 мл). Затем полученную смесь подогреть до полного растворения и довести до объема 100 мл (1 мл раствора содержит 1 мг ИУК).
6. Приготовление маточного раствора фитогормона цитокинина 6-БАП (6-бензиламинопурин). Взвесить 100 мг гормона 6-БАП и растворить в небольшом количестве 1 н. раствора HCl (1,0–2,0 мл). Затем полученную смесь подогреть до полного растворения и довести до объема 100 мл (1 мл раствора содержит 1 мг 6-БАП).
7. Приготовленные маточные растворы макросоли, микросоли и хелата железа хранят в холодильнике в сосудах с притертыми пробками при температуре 0–4°С, маточные растворы витаминов хранят в холодильнике при температуре t = – 20°С в небольших (5–10 мл) сосудах с пробками, приготовленные растворы ИУК и 6-БАП не хранят, а используют непосредственно перед приготовлением среды Мурасиге-Скуга.
Приготовление питательной среды Мурасиге-Скуга.
1. В химический стакан емкостью 2 л поместить 30 г сахарозы, долить дистиллированной водой до объема 400 мл и растворить.
2. Добавить к раствору сахарозы 50 мл маточного раствора макросоли, 1 мл микросоли, 5 мл хелата железа, 5 мл хлористого кальция, 1 мл каждого в отдельности витамина.
3. Для приготовления агара нужно навеску массой 7 г поместить в стакан и залить водой до 200 мл, растворить, нагревая на плитке при постоянном помешивании.
4. Приготовленный агар (концентрация агара – 0,7%) долить к раствору солей и питательную среду довести дистиллированной водой до объема 1 л. 9
5. Установить кислотность среды на уровне pH = 5,5–6,0. Регулирование величины pH осуществляется добавлением 2–3 капель 0,1 н. раствора HCl (снижение pH) или 2–3 капель 0,1 н. раствора КОН (повышение pH).
6. Питательную среду разлить в пробирки на 1/3 объема, закрыть их ватными пробками и поместить в металлические штативы.
7. Штативы с пробирками завернуть в целлофановую бумагу, поместить в автоклав и проавтоклавировать в течение 20 мин. при давлении 1,0 атм.
8. Приготовленную питательную среду Мурасиге-Скуга охладить при комнатной температуре и хранить в холодильнике при 4°С.
Заключение
Для эффективного микроклонального размножения важен подбор оптимального состава питательных сред, концентраций фитогормонов и типа растительного экспланта, используемого для получения регенерантов. Известно, что образование регенерантов из различных типов эксплантов проходит с разной эффективностью. Подбор же оптимальных концентраций фитогормонов позволяет повышать эффективность микроклонального размножения, а также получать максимальное количество регенерантов из всех типов эксплантов.
Дата добавления: 2023-01-08; просмотров: 783; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!