Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Методические рекомендации к оформлению протоколов занятий.

Тема 8. Возбудители туберкулеза, менингококковой инфекции.

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1. Возбудитель туберкулеза. Морфологические, культуральные, биохимические свойства. Особенности химического состава и резистентность. Факторы патогенности. Патогенез туберкулеза, особенности иммунитета. Лабораторная диагностика. Специфическое лечение и профилактика.

2. Менингококи.Биологическиесвойства. Патогенез менингококковой инфекции. Микробиологическая диагностика. Препараты для специфической профилактики.

Микробиологическая диагностика туберкулеза

1. Микроскопическое исследование мокроты больного туберкулезом:

М. tuberculosis - Грам-положительны(Гр+), однако по методуГрамаокрашиваются с трудом. Устойчивы к кислотам, спиртам, щелочам, поэтому их называют кислотоустойчивыми.Кислотоустойчивость связана с высоким содержанием липидов (до 46% жиров - воски и жирные кислоты, в том числе миколовая и туберкулостеариновая). М. tuberculosis окрашивается методом Циля-Нильсенав красный цвет.

Рис. 1. М.tuberculosis – рубиново-красные, окраска поЦилю-Нильсену

В настоящее времяосновным бактериоскопическим методом выявления микобактерий является люминесцентная микроскопия препарата из мокроты больного, окрашенного аурамином. Микобактерии обладают ярким желтым свечением на темном фоне.

2. Бактериологический метод-основной метод диагностики туберкулеза,обладающийвысокой чувствительностью и специфичностью. Для культивирования микобактерий применяют среду Левенштейна- Йенсена (среда состоит из суспензии свежих яиц, крахмала, глицерина, аспарагин, КН₃РО₄, сульфата и цитрата магния, красителя малахитового зеленого).Рост микобактерий на питательных средах медленный – не менее 1 – 1,5 месяца.Колонии М. tuberculosisкремового цвета,морщинистые (R-форма).

Для культивирования микобактерий применяют такжеускоренный метод микрокультур Прайса(выращивание на предметном стекле в гемолизированной цитратной крови; через 5-7дней на стекле вырастают микроколонии в виде ‘кос” или “жгутов”, что указывает на наличие фактора вирулентности - корд- фактора)

Идентификацию выделенной культуры микобактерий до вида осуществляют по совокупности морфологических, культуральных свойств, биохимической активности (наличие каталазы, уреазы, продукции никотиновой кислоты - ниациновая проба, восстановления нитратов и т.д.)

3.Биологическийметод в настоящее время не применяется.

4.Высокочувствительным и специфичным методом микробиологической диагностики является метод ПЦР.Онпозволяет обнаружить видоспецифические нуклеиновые кислоты микобактерий. Метод ПЦР сопоставим с бактериологическим исследованием, однако выполняется быстро - в течение 24 часов.

5.Серодиагностика.РСК, ИФА для определения антител в сыворотке крови больных туберкулезом к антигенам микобактерий туберкулеза, однако диагностического значения эти реакции не имеют.

6.Аллергодиагностика -внутрикожная аллергическая проба (реакция Манту) с туберкулином - очищенной белковой фракцией, полученной из фильтрата убитой нагреванием бульонной культуры микобактерий бычьего и человеческого типа.Проба используется для оценки течения туберкулезного процесса, определения эффективности вакцинации и отбора лиц для ревакцинации против туберкулеза. Учет реакции производится через 24-48 часов.

Отрицательная – уколочная реакция.

Сомнительная – инфильтрат 2-4 мм

Положительная – 5 мм и более

Гиперэргическая – инфильтрат 21 мм и более.

Диаскинтест - аллерген (генно-инженерный белок Mycobacteriumtuberculosis). Действие Диаскинтеста основано на выявлении клеточного иммунного ответа на специфические для Mycobacteriumtuberculosis антигены. При внутрикожном введении Диаскинтест вызывает у людей с туберкулезной инфекцией специфическую кожную реакцию, являющуюся проявлением гиперчувствительности замедленного типа.

Отрицательная – уколочная реакция.

Сомнительная – инфильтрат 2-4 мм

Положительная – 5 мм и более

7. Определение лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза к химиотерапевтическим средствам на среде Левенштейна-Йенсена.

Лекарственную устойчивость МБТопределяют методом абсолютных концентраций на питательной среде Левенштейна-Йенсена, основанной на добавлении определенных стандартных концентраций противотуберкулезных препаратов, которые принято называть критическими при расчете на мкг/мл.В большинстве случаев метод абсолютных концентраций применяют для непрямого определения лекарственной устойчивости МВТ. Вначале высевают мокроту на твердые питательные среды (Левенштейна-Йенсена) и получают чистую культуру МВТ, которую пересевают на питательные среды, содержащие определенные концентрации противотуберкулезных препаратов. Поскольку сроки выделения МВТ на питательных средах составляют не менее 1,5 мес, результаты определения устойчивости указанным методом обычно получают не ранее чем через 2—2,5 мес. после посева материала.

Для метода абсолютных концентраций появление более 20 колоний на питательной среде, содержащей противотуберкулезный препарат в критической концентрации, свидетельствует о том, что данный штамм МБТ обладает лекарственной устойчивостью.

Критические концентрации противотуберкулезных препаратов при определении лекарственной устойчивости методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна—Йенсена составляют: для стрептомицина 5 мкг/мл, ПАСК – 10 мкг/мл, тубазида – 1 мкг/мл, циклосерина и этионамида – 30 мкг/мл.

Современные методыкультивирования МВТ и определения лекарственной устойчивости

8. Система ВАСТЕС MGIT 960— индикаторные пробирки MGIT с жидкой средой Middlebrook 7Н9; содержат в придонной части флюоресцирующий индикатор, «погашенный» высокими концентрациями О₂. В процессе роста МВТ поглощают О₂, что сопровождается усилением свечения индикатора, интенсивность которого оценивают при помощи трансиллюминатора.

Наличие роста МВТ в системе ВАСТЕС регистрируют на 4-5-й недели от момента посева. В системе ВАСТЕС возможно более быстрое определение лекарственной устойчивости. Для этого в индикаторные пробирки добавляют те же абсолютные концентрации противотуберкулезных препаратов, что и при методе посева. Учет лекарственной устойчивости идет в течение 6-8 нед.

9.Биологический метод определение лекарственной устойчивости М.tuberculosis - (LRP –Luciferase-ReporterPhage – свечение резистентных микобактерий в присутствии генетически измененных бактериофагов, несущих ген люциферазы).

10. Препарат, применяемый для профилактики туберкулеза:

Вакцина БЦЖ (BCG – BacteriumCalmett – Geren); живая вакцина из авирулентного штамма M . bovis, разработанная французскими учеными Кальметтом и Гереном. Применяется внутрикожно для активной специфической профилактики туберкулеза.

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Возбудителемменингококковойинфекцииявляютсяменингококки (Neisseriameningitidis ).Менингококк во внешней среде быстро теряет свою жизнеспособность, поэтому исследование выполняют как можно быстрее.

1.Микроскопический метод.Мазок из спинномозговой жидкости - окраска по Граму с целью выявлениягноя и грамотрицательных диплококков внутри лейкоцитов в виде «бобов» или «кофейных зерен», обращенных вогнутой стороной друг к другу.

Менингококк ( Neisseriameningitides ) в спинно-мозговой жидкости больного цереброспинальным менингитом и в чистой культуре (окраска по Граму)

2. Бактериологический метод. Материал для исследования: спинномозговая жидкость, кровь, мазки со слизистой оболочки верхних отделов носоглотки, содержимое элементов сыпи.

1-й день. Исследуемый материал засевают петлей на чашки с сывороточным МПА, содержащим антибиотики (ристомицин) для подавления роста сопутствующей микрофлоры.

3-й день Учет характера роста на сывороточном МПА (мелкие, прозрачные, с голубоватым оттенком и ровными краями колонии; в мазках - грамотрицательные диплококки). Типичные для менингококка колонии пересевают на скошенный сывороточный МПА для выделения чистой культуры.

4-5 день. Идентификация выделенной чистой культуры менингококка и ее дифференциация от сапрофитных нейссерий на основании комплекса биологических свойств (рост на МПА, потребность в СО₂, пигментообразование, ферментация углеводов, нитратредуктаза, антигенная структура - РА с менингококковыми сыворотками сероваров А, В, С).

Свойства	N . miningitidis
Рост на МПА	-
Потребность в СО₂	+
Желтый пигмент	-
Ферментация: глюкозы мальтозы сахарозы фруктозы лактозы	К+ К+ - - -
Образование полисахарида из сахарозы	-
Нитратредуктаза	-
РА с менингококковыми сыворотками сероваров А, В, С	+

3. Генодиагностика - обнаружение специфических фрагментов ДНК менингококка с помощью ПЦР

4. Метод встречного иммуноэлектрофореза в геле. Можно выявить специфический полисахаридный менингококковый антиген. Метод основан на образовании видимого преципитата в агаровом геле в месте встречи антигена и антител, диффундирующих навстречу друг другу под действием электрического поля

5. Серодиагностика. Для подтверждения диагноза используют РНГА с парными сыворотками. с больного (7 и 14 дни болезни).

6. Экспресс-методы диагностики . Для выявления антигенов менингококков в мазках из исследуемого материала используют РИФ, а также непрямую латекс-агглютинацию и РНГА с антительнымидиагностикумами.

7. Биопрепараты для диагностики и профилактики менингококковой инфекции:

1) Химическая вакцина полисахаридная менингококковая вакцина

2) Агглютинирующие и преципитирующие сыворотки против менингококка для постановки РА и встречного иммуноэлектрофореза для обнаружения менингококкового антигена в спинномозговой жидкости.

3) Эритроцитарныеантительные менингококковые диагностикумы для обнаружения антигенов менингококка в спинномозговой жидкости с помощью РНГА.

Дата добавления: 2022-12-03; просмотров: 21; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

Мы поможем в написании ваших работ!