Методы распознавания нуклеиновых кислот
ЛЕГОЧНАЯ АДЕНОКАРЦИНОМА ОВЕЦ
(аденоматоз)
РЕЗЮМЕ
Легочная аденокарцинома овец (ОРА), известная также как легочный аденоматоз и jaagsiekte, является контагиозной опухолью у овец и, реже, у коз. Это прогрессирующая респираторная болезнь, поражающая, в основном, взрослых животных. Данное заболевание встречается во многих регионах мира. Было установлено, что бетаретровирус (jaagsiekte sheep retrovisus: JSRV), отличающийся от неонкогенных лентивирусов овец, является возбудителем заболевания.
Выявление возбудителя: на настоящий момент репродуцирование вируса JSRV в условиях in vitro невозможно, поэтому, стандартные диагностические методы, такие как выделение вирусов, для диагностики недоступны. В настоящее время диагностика основывается на истории болезни и обследовании, а также на результатах вскрытия и заключениях гистопатологического и иммуногистохимического исследований. Вирусные ДНК или РНК могут быть выявлены в опухоли, дренирующих лимфатических узлах и мононуклеарных клетках периферической крови с помощью полимеразной цепной реакции. Ягнята в раннем возрасте постоянно подвергаются заражению JSRV, а в стадах, зараженных ОРА, инфицировано большинство овец.
Серологические тесты: У инфицированных овец антитела к ретровирусу обнаружены не были; поэтому, серологические тесты не могут быть использованы для диагностики.
Требования для вакцин: Вакцин не существует.
|
|
|
А. ВВЕДЕНИЕ
Легочная аденокарцинома овец (ОРА), известная также как легочный аденоматоз, jaagsiekte (на африкаанс – отставание при движении) и легочная карцинома овец (ОРС), является контагиозной опухолью легкого у овец и, реже, у коз. Это наиболее распространенная опухоль легкого у овец, которая встречается во многих странах по всему миру. Данное заболевание отсутствует в Австралии и Новой Зеландии, а также было устранено в Исландии.
В этиологии ОРА участвует множество различных вирусов, включая герпесвирусы и лентивирусы, распространившиеся из опухолевой ткани. Однако, первый не является причиной ОРА, а последний обнаруживает характеристики неонкогенных лентивирусов. Были получены очевидные доказательства того, что причиной возникновения ОРА является бетаретровирус, который на настоящий момент не может быть культивирован in vitro, но он был клонирован и секвенирован. Для обозначения данного вируса применяется термин jaagsiekte retrovirus (JSRV).
В. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В настоящее время диагностика ОРА основывается на клинических испытаниях и исследованиях методами патологии, хотя метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет надеяться на возможность прижизненной диагностики ОРА и использование его в качестве диагностики стада. В стадах с подозрением на данное заболевание возможно, по крайней мере, один раз подтвердить его наличие с помощью
|
|
|
патогистологического исследования пораженной легочной ткани. Для такого исследования необходимо брать образцы из нескольких пораженных областей и, при возможности, от более чем одного животного, поскольку вторичная бактериальная пневмония, которая может явиться непосредственной причиной смерти, часто маскирует очаги поражения (как макроскопические, так и микроскопические) первичного заболевания. При отсутствии специфических серологических тестов, которые могут быть использованы для диагностики ОРА у живых животных, санитарно-эпидемиологический контроль основан на неукоснительном соблюдении правил биобезопасности с целью предотвращения распространения данного заболевания в странах и стадах, свободных от ОРА; там, где заболевание уже существует, контроль предполагает регулярный осмотр стада и немедленную выбраковку подозрительных особей и, в случае с овцами-самками, их потомства. Тем не менее, клинические исследования были признаны недостоверными для выявления случаев заболевания ОРА на начальных стадиях (Cousens et al., 2008). О рисках заражения человека эпизоотическим легочным аденоматозом овец не известно. Меры по биобезопасности определяются в соответствии с анализом степени риска, согласно Главе 1.1.4 Биобезопасность и биозащита: Стандарты для управления биологическими рисками в ветеринарных лабораториях и вивариях.
|
|
|
Таблица 1. Тестовые методы для диагностики легочной аденокарциномы овец и их назначение
1 Для анализа клинического образца рекомендуется использовать сочетание методов идентификации возбудителя.
Обозначения: +++ = рекомендованный метод; ++ = подходящий метод; + = применение данного метода возможно в определенных обстоятельствах, хотя стоимость, надежность и другие факторы существенно ограничивают возможность его применение; - = не подходит для данной цели; н/п = неприменим.
Хотя не все тесты, относящиеся к категории +++ или ++, формально валидированы, они признаны приемлемыми по причине применения их в установившейся практике и широкого использования без неоднозначных результатов.
* Включает определение возбудителя методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) как в образцах крови, так и образцах опухоли.
|
|
|
Идентификация возбудителя
Несмотря на то, что овечий герпесвирус типа 1 (OvHV-1) был выделен исключительно из опухолей ОРА, данные эпидемиологических исследований и экспериментальных заражений не подтвердили его роль в этиологии ОРА. Овечий герпесвирус типа 2 (OvHV-2) связан со злокачественной катаральной лихорадкой овец и не имеет отношения к ОРА.
Наличие связи ретровирусов с ОРА было обнаружено несколько лет назад. Овечьи лентивирусы выделялись неоднократно, но они не играют никакой роли в этиологии ОРА.
JSRV был отнесен к бетаретровирусам из-за своей генетической структуры и наличия структурных белков. Хотя овечий геном содержит около 20 копий эндогенных бетаретровирусов, которые имеют высокую степень родства с JSRV (Spencer & Palmarini,
2012), JSRV явно относится к экзогенному типу и связан исключительно с ОРА (Palmarini et al., 1996). JSRV постоянно выявляется в бронхоальвеолярном секрете, опухоли, мононуклеарных клетках периферической крови и в лимфоидной ткани овец, пораженных ОРА, а также неинфицированных контактных особей стада, но никогда не выявляется у овец из непораженного стада, не имеющих опухолей в анамнезе. Полноразмерные провирусные клоны JSRV были получены из ДНК и клеток опухоли ОРА. Вирусные частицы JSRV, полученные из этих клонов с помощью транзиентной трансфекции клеточной линии, были использованы для интратрахеального заражения новорожденных ягнят. Таким образом, у ягнят была спровоцирована опухоль ОРА, что явилось доказательством того, что вирус JSRV является возбудителем ОРА (DeMartini et al., 2001; Palmarini et al., 1999).
Несмотря на то, что эндогенные бетаретровирусы, имеющие высокую степень родства с JSRV, не участвуют в этиологии ОРА, их экспрессия в маточно-плацентарных тканях имеет практическую значимость (Dunlap et al., 2006), а экспрессия в плоде может, с помощью индукции толерантности, объяснить выраженную иммунологическую толерантность взрослых животных к экзогенному JSRV (Palmarini et al., 2004).
Для репродукции JSRV не существует систем чувствительных клеточных культур. Некоторые клеточные культуры, выращенные из опухолевой ткани молодых ягнят, могут поддерживать репликацию вируса в течение непродолжительного времени (Jassim, 1988; Sharp et al., 1985).
Методы распознавания нуклеиновых кислот
Были разработаны одноступенчатые и полугнездовые модификации ПЦР специально для JSRV, которые основаны на праймерах, полученных из области U3 LTR вируса JSRV (Таблица 2) (Palmarini et al., 1997). С их помощью можно выявить JSRV в нескольких тканях, включая мононуклеарные клетки периферической крови как неинфицированных контактных овец из стада с ОРА, так и экспериментально зараженных ягнят (De las Heras et al., 2005; Gonzalez et al., 2001; Holland et al., 1999; Lewis et al., 2011), а также в образцах бронхоальвеолярныхе выделений неинфицированных контактных овец (Voigt et al., 2007). Данные модификации ПЦР имеют высокую диагностическую специфичность, но низкую чувствительность при применении на отдельных животных из-за низкой концентрации ДНК-мишени в крови клинически здоровых животных (De las Heras et al., 2005; Lewis et al., 2011). Лонгитюдные исследования стад, зараженных ОРА, показали, что заражение ягнят происходит в очень раннем возрасте. Большая часть животных в таких стадах заражена, при этом заболевают ОРА только некоторые животные (Caporale et al., 2005; Salvatori, 2005). JSRV был обнаружен в молозиве и молоке, полученных от овец из стад, зараженных ОРА. В течение нескольких месяцев в крови ягнят, искусственно вскармливаемых молозивом и молоком, был выявлен JSRV (Grego et al., 2008).
Таблица 2. Праймеры, используемые для ПЦР-диагностики вируса JSRV
Дата добавления: 2022-11-11; просмотров: 29; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!