Дать классификацию микробов по типу дыхания.
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________
Подпись преподавателя_______________________________________________________
Теоретическая справка
К работе № 2 Методы создания анаэробных условий
1) Физические методы. Методы основаны на выращивании микроорганизмов в среде без воздуха
• Посев в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества
В качестве редуцирующих веществ обычно используют кусочки (около 0,5 г) животных или растительных тканей (печень, мозг, почки, селезенка, кровь, картофель, вата). Эти ткани связывают растворенный в среде кислород и адсорбируют бактерии. Чтобы уменьшить содержание кислорода в питательной среде, ее перед посевом кипятят 10-15 мин, а затем быстро охлаждают и заливают сверху небольшим количеством стерильного вазелинового масла. Высота слоя масла в пробирке около 1 см. В качестве легко окисляемых веществ используют глюкозу, лактозу и муравьино-кислый натрий.
Лучшей жидкой питательной средой с редуцирующим веществами является среда тиогликолевая, которая используется для накопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выращенной чистой культуры анаэробов.
• Посев микроорганизмов в глубину плотных питательных сред. Посев уколом
|
|
Техника посева. Посев уколом в столбик агара (сахарный агар) применяется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, так как рост по уколу типичен для ряда бактерий и длительного хранения культур. При посеве уколом пробирку со столбиком агара или желатины держат дном кверху, вынимают пробку и обжигают край пробирки. Материал, содержащий микробы, забирают простерилизованной на пламени длинной совершенно прямой платиновой иглой и прокалывают ею столбик питательной среды снизу вверх почти до самого дна пробирки. Вынимают иглу, обжигают край пробирки и пробки, закрывают пробирку, прожигают иглу, ставят ее в подставку, надписывают пробирку и помещают в штатив.
• Посев по способу Веньяль-Вейона
Техника посева. Берут стеклянную трубку длиной 30 см и диаметром 3-6 мм. Один конец трубки вытягивают в капилляр в виде пастеровской пипетки, а у другого конца делают перетяжку. В оставшийся широкий конец трубки вставляют ватную пробку. В пробирки с расплавленным и охлажденным до 50оС агаром засевают исследуемый материал. Затем помещают агар с посевом в стерильные трубки Веньяль-Вейона. Капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки и трубки помещают в термостат. Так создаются благоприятные условия для роста самых строгих анаэробов. Для выделения отдельной колонии трубку надрезают напильником, соблюдая правила асептики, на уровне колонии, ломают, а колонию захватывают стерильной петлей и переносят в пробирку с питательной средой для дальнейшего выращивания и изучения в чистом виде.
|
|
• Механическое удаление воздуха из сосудов, в которых выращиваются анаэробные микроорганизмы
Удаление воздуха производят путем его механического откачивания из специальных приборов - анаэростатов, в которые помещают чашку с посевом анаэробов. Переносной анаэростат представляет собой толстостенный металлический цилиндр с хорошо притертой крышкой (с резиновой прокладкой), снабженный отводящим краном и вакуумметром. После размещения засеянных чашек или пробирок воздух из анаэростата удаляют с помощью вакуумного насоса.
• Замена воздуха в сосуде каким-либо индифферентным газом
Замену воздуха индифферентным газом (азотом, водородом, аргоном) можно производить в тех же анаэростатах путем вытеснения его газом из баллона.
2) Химические методы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (анаэростате, эксикаторе) такими веществами, как пирогаллол или гидросульфит натрия.
|
|
3) Биологические методы основаны на совместном выращивании анаэробов со
строгими аэробами (метод Фортнера)
Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной около 1 см. Получается 2 агаровых полудиска в одной чашке. На одну сторону агаровой пластинки засевают аэроб, например, часто используют Staphylococcus aureus или Serratia marcescens. На другую сторону засевают анаэроб. Края чашки заливают расплавленным парафином и помещают в термостат. При наличии подходящих условий в чашке начнут размножаться аэробы. После того как весь кислород в пространстве чашки будет ими использован, начнется рост анаэробов (через 3-4 суток). В целях сокращения воздушного пространства в чашке питательную среду наливают возможно более толстым слоем.
4) Комбинированные методы основаны на сочетании физических, химических и биологических методов создания анаэробиоза
К работе № 3
Культивирование вирусов
Для культивирования вирусов используют:
1) Куриные эмбрионы. Куриный эмбрион - удобная модель для культивирования вирусов с целью их накопления и для приготовления диагностических, профилактических и лечебных препаратов - диагностикумов и вакцин. Куриные зародыши используют в возрасте от 8 до 12 дней, перед заражением инфекционным материалом скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают, смазывают йодом (2% настойка), вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал, обработанный для удаления бактериальной флоры, в асептичных условиях наносят на хорион-аллантоисную оболочку или вводят в желточный мешок, аллантоисную полость, либо в амнион (ткань эмбриона). После заражения в аллантоисную полость отверстие заливают парафином; если материалом заражают хорионаллантоис, отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином. После инфицирования эмбрионы помещают в термостат при 37°С. Признаки репродукции вируса проявляются особенно четко в месте заражения на хорионаллантоисной оболочке в виде очагов поражения и геморрагий.
|
|
2) Культуру клеток (тканей). Клетки получают из тканей животных и человека. Их делят:
- на первичные, которые используют в течение одной генерации. Первичные клетки получают из эпителиальной или соединительной ткани. Они растут в суспензии, при оседании прочно прикрепляются к стенке флакона или пробирки в виде монослоя.
- полуперевиваемые сохраняются в течение 50 пассажей или года. Они относятся к соматическим диплоидным клеткам человека, которые не претерпевают злокачественного перерождения.
- перевиваемые, которые длительное время могут размножаться in vitro. Однослойные культуры клеток готовят из нормальных, чаще эмбриональных линий (клетки амниона человека, почек обезьяны) и злокачественных линий (злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Hep - 3 из лимфоидной карциномы).
Репродукция вирусов в культуре клеток сопровождается цитопатогенным действием (ЦПД); которое проявляется в изменении морфологии клеток и их гибели. Характер и время проявления ЦПД зависит от вида вируса.
3) Лабораторных животных (белых мышей, хомяков, крыс, кроликов и т.д.). Их используют для создания моделей вирусных инфекционных болезней и выделения вирусов. Чувствительность животных к вирусам зависит от вида животного и его возраста. Репродукция вируса сопровождается клиническими проявлениями болезни или гибелью животного.
Дата добавления: 2022-11-11; просмотров: 21; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!