Реакции с участием комплемента
Лекция № 5 Понятие об иммунодиагностике и серодиагностике. Характеристика иммунологических реакций ( агглютинации, преципитации, иммунного лизиса, связывания комплемента) применение в медицинской практике. Представление об организации работы в иммунологической лаборатории. Иммуноферментный анализ. Применение в диагностике инфекционных болезней.
Иммунные реакции используют при диагностических и иммунологических исследованиях у больных, а также у здоровых людей.
Диагностические серологические реакции – это различные варианты взаимодействия антитела и антигена, при которых один из ингредиентов неизвестен. Серологический ( serum –сывортоска) метод позволяет определить уровень АТ в сыворотке больного с помощью известных АГ, что помогает установить диагноз заболевания.
При выделении из организма больного какого-либо микроба проводят идентификацию возбудителя путем изучения его АГ свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, содержащих специфические АТ.. Это – серологическая идентификация микроорганизмов.. Аналогичный принцип применяется для определения различных БАВ, групп крови, тканевых и опухолевых АГ, иммунных комплексов, рецепторов клеток.
В микробиологии и иммунологии используются следующие реакции:
*реакция агглютинации
*реакция преципитации
*реакция нейтрализации
*реакции с участием комплемента
* реакции с использованием меченных АТ и АГ ( радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный) методы).
|
|
|
Все вышеперечисленные реакции основаны на реакции взаимодействия АГ и АТ и применяются для выявления как АТ , так и АГ,
Реакция между АТ и АГ в пробирке (in vitro) проходит в 2 фазы :
1 – специфическую- быстрое специфическое связывание активного центра АТ с соответствующей антигенной детерминантой в присутствии электролитов и оптимального рН среды.
2 – неспецифическая – более медленная фаза. При ней наблюдаются видимые эффекты – образование хлопьев ( феномен агглютинации) или помутнения ( преципитации).
Реакция агглютинации (РА): простая по постановке реакция, при которой происходит связывание АТ с АГ в присутствии электролита. ( физраствор). Проявляется образованием хлопьев или мелкозернистого осадка.
Используется для определения АТ в сыворотке крови больных при бруцеллезе, ( реакции Райта и Хеддельсона) и др., а также для идентификации возбудителя, выделенного отбольного ( например, при кишечных инфекциях). Также используют для определения групп крови и антирезусных АТ.
Варианты РА:
· развернутая – к раститрованной в электролите сыворотке крови добавляется антигенный диагностикум и черезнеск часов инкубации при 37 0С отмечают наибольшее разведение сыворотки, при которой произошла агглютинация ( образовался хлопьевидный осадок) на ++. Контроль в 2 последние лунки – вместо сыворотки больного – физраствор.
|
|
|
· Ориентировочная –реакция агглютинации на стекле – для идентификации выделенного возбудителя. На чистое обезжиренное стекло наносят петлей каплю диагностической иммунной сыворотки и культуру возбудителя. Растворяют петлей и смотря образование хлопьев. Контроль – вместо сыворотки – физраствор.
· Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА): используется эритроцитарный антигенный диагностикум для обнаружения АТ в сыворотке крови. РПГА всегда развернутая. В случае положительной реакции –«зонтик», в случае отрицательной «пуговица».
· Реакция преципитации – это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного АГ (преципитиногена) со специфическими АТ ( преципитинами) в присутствии электролита. Осадок комплекса АГ-АТ называется преципитат. Реакция проводится в пробирках, наслаивая растворенный в электролите АГ на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении Аги АТ на границе образуется непрозразрачное кольцо преципитата ( реакция кольцепреципитации). Если в качестве АГ используют прокипяченные и профильтрованные экстракты органов и тканей, то такая реакция называется реакцией термопреципитации ( реакция Асколи при сибирской язве).
|
|
|
· Разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы : двойная иммунодиффуция по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия по Манчини, иммуноэлектрофорез.
· Реакция нейтрализации – основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные органы и ткани. Реакцию нейтрализации проводят (РН) проводят путем введения смеси АТ+АГ животным или в культуру клеток или эмбрионов. При отсутствии у животных или культур клеток повреждающего действия говорят о специфичности взаимодействия комплекса АТ+АГ.. РН токсина антитоксином проводят также в пробирке. Реакция проявляется феноменом флоккуляции. Феномен флоккуляции – это специфическая реакция, и используется для титрования антитоксических сывороток или анатоксинов при определении степени их активности и силы действия.
Реакции с участием комплемента
Основаны на связывании комплемента с комплексом АГ-АТ, в результате чего происходит лизис используемого в реакции АГ. К ним относятся : реакция лизиса, реакция связывания комплемента (РСК), радиального гемолиза.
|
|
|
· реакция (феномен) лизиса – растворение бактерий, эритроцитов и др. клеток под действием АТ (лизинов) в присутствии комплемента. Лизины. растворяющие бактерии называют бактериолизинами, лизины, растворяющие эритроциты крови в реакции иммунного гемолиза – гемолизины. В реакциях лизиса используют консервированный комплемент – сыворотку крови морской свинки.
· Реакция связывания комплемента (РСК) основана на том, что при образовании комплекса АГ-АТ к нему присоединяется комплемент. Если комплекс АТ-АГ не образуется. То комплемент остается свободным и тогда связывается с «индикаторной» гемолитической системой, добавляемой на 2 этапе реакции. РСК проводят в 2 фазы:
1 фаза инкубация смеси, содержащей АГ, АТ и комплемент
2 фаза – индикаторная – выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы. Состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей гемолизины. Гемолитическую сыворотку для этой реакции получают иммунизацией кроликов эритроцитами барана.
В первой фазе реакции в случае образования комплекса АГ-АТ происходит присоединение к нему комплемента, тогда во 2 фазе гемолиз сенсибилизированных гемолизином эритроцитов не происходит ( реакция положительная) В случае, если комплекса АГ-АТ не образовалось, свободный комплемент связывается с комплексо «Эритроцит-гемолизин» и вызывает лизис эритроцитов ( феномен «лаковой крови») реакция отрицательная. РСК применяют при диагностике заболеваний вызванных спирохетами ( сифилис), риккетсиями, вирусами с целью идентификации антигенов микроба.
* реакция радиального гемолиза – используются для определении активности комплемента, гемолитической сыворотки и АТ в сыворотке больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом
* реакция иммунного прилипания – активация системы комплемента копрускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой.
Дата добавления: 2022-01-22; просмотров: 40; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!