УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
ИНСТРУКЦИЯ
По применению изделия
«Питательная среда для определения лизиндекарбоксилазы сухая (Среда с лизином)»
НАЗНАЧЕНИЕ
«Питательная среда для определения лизиндекарбоксилазы сухая (Среда с лизином)», далее по тексту - среда с лизином, предназначена для идентификации энтеробактерий по наличию у них фермента лизиндекарбоксилазы. Не является медицинским изделием.
Характеристика ИЗДЕЛИЯ
Среда с лизином выпускается в полиэтиленовых банках по 100 и 250 г.
Среда с лизином представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперсного, гигроскопичного, светочувствительного порошка светло-желтого цвета.
Принцип действия
Среду для определения лизиндекарбоксилазы используют при обнаружении и дифференциации энтеробактерий от других микроорганизмов по декарбоксилированию лизина.
Принцип метода – визуальное обнаружение изменения цвета питательной среды за счет наличия фермента лизиндекарбоксилазы у культур, выделенных из исследуемых образцов.
Бактерии, декарбоксилирующие лизин с образованием кадаверина, обнаруживаются по наличию зеленого или сине-зеленого цвета среды. При отсутствии декарбоксилазной активности выделенных культур, цвет среды меняется на желтый (ферментация глюкозы).
Состав
Состав среды с лизином, г/л:
| Дрожжевой экстракт ……..……….. | 3,0 |
| L-лизин гидрохлорид …………….. | 6,0 |
| D-глюкоза ………………………… | 1,0 |
| Бромтимоловый синий …………… | 0,04 |
рН от 6,5 до 6,8
|
|
|
Определение pH проводят потенциометрическим методом с применением стеклянного электрода в соответствии с МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» в растворе, приготовленном путем добавления к 2,00 г сухой среды с лизином
100 мл дистиллированной воды. Величина рН, определенная по МУК 4.2.2316-08, является условной величиной, которая соответствует значению рН готовой среды и может незначительно меняться после стерилизации. Пределы значения рН, указанные выше, учитывают отклонения рН после стерилизации среды.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Специфическая активность. Питательная среда обеспечивает во всех засеянных пробирках при посеве по одной бактериологической петле диаметром 2 мм в течение 24-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С рост каждого тест-штамма S higella sonnei «S form», Klebsiella pneumoniae 418, Proteus vulgaris HX 19 222, Escherichia coli АТСС 25922, Salmonella enterica subsp . enterica serovar Typhi 65, Salmonella enterica subsp. enterica serovar Рaratyphi A-225со следующими биохимическими характеристиками:
- рост S . sonnei « S form », P . vulgaris HX 19 222, Salmonella enterica subsp. enterica serovar Рaratyphi A-225в виде диффузного помутнения среды с изменением цвета среды с зеленого на желтый;
|
|
|
- рост K . pneumoniae 418, Escherichia coli АТСС 25922, Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi 65 в виде диффузного помутнения среды с изменением цвета среды с зеленого на синий или сине-зеленый (утилизация лизина).
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
При анализе исследуемого материала – соблюдение СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ
· Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
· Весы лабораторные 2 класса точности
· Автоклав
· Пробирки стеклянные вместимостью – 10 мл
· Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
· Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
· Вода дистиллированная
· Колбы
· Воронки стеклянные
АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
6.1 Объекты исследований - микробные изоляты энтеробактерий, выделенные при проведении санитарно-бактериологических исследований.
6.2 Взятие, посев исследуемого материала проводят в соответствии с ГОСТ 32010-2013 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Shigella», МУ 04-723/3 «Методические указания по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями»,
МУК 4.2.762-99 «Методы микробиологического контроля готовых изделий с кремом»,
МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред» и других нормативных документов.
|
|
|
Проведение АНАЛИЗа
Исследование проводят в условиях санитарно-бактериологической лаборатории специалистами, изучившими настоящую Инструкцию.
7.1 Приготовление среды с лизином
10,0 г среды тщательно размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят в течение
2 мин, стерилизуют автоклавированием при температуре 115 °С в течение 15 мин, разливают в асептических условиях по 5 мл в стерильные стеклянные пробирки по ГОСТ 25336-82.
Готовая питательная среда прозрачная зеленого цвета.
Готовую среду можно использовать в течение 7 сут. после её приготовления при условии хранения при температуре 2-8 °С.
7.2 Выделенный материал, подготовленный согласно действующим документам, вносят по полной бактериологической петле культуры каждого штамма в каждую из двух пробирок, содержащих по 5 мл среды с лизином. Через 24-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С визуально определяют наличиероста тест-штаммов.
УЧЕТ И РЕГИСТРАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов проводят визуально после инкубации посевов по изменению цвета среды. Дальнейшую идентификацию выделенных культур микроорганизмов проводят в соответствии с нормативной документацией.
Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее чем в двух повторностях.
Дата добавления: 2022-01-22; просмотров: 50; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!