Методы экспресс-диагностики определения Х и Y хроматина.

Дидактический материал к практическому занятию № 5

Тема: «Методы изучения наследственности: генеалогический, близнецовый, биохимический, цитогенетический, дерматоглифический, популяционно-статистический, имунногенетический».

Качественные тесты, позволяющие определять нарушения обмена веществ.

А. Массовое обследование новорожденных

В первые несколько суток жизни проводят обследования на наследственные нарушения обмена веществ:

врожденный гипотиреоз
фенилкетонурию
галактоземию
дефицит галактокиназы
болезнь кленового сиропа
гомоцистинурию
дефицит биотинидазы.

Для исследования используют кровь, собранную на фильтровальную бумагу.

Массовое обследование новорожденных позволяет рано, на бессимптомной стадии, начать лечение, предупредить необратимое поражение нервной системы и другие тяжелые последствия. Лечение состоит в исключении из рациона определенных продуктов. Ранее начало терапии важно. Например, при галактоземии и болезни кленового сиропа на 1—2-й неделе жизни может наступить смерть: в первом случае — от сепсиса, вызванного грамотрицательными бактериями, во втором случае — от острого метаболического ацидоза.

Б. Анализы крови

1 . Определение уровней аминокислот в сыворотке или плазме методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (наряду с анализами мочи) помогает исключить нарушения обмена аминокислот и органических кислот, нарушения цикла мочевины и митохондриальные болезни.

2 . Карнитин (выполняет функцию переносчика остатков жирных кислот через мембраны митохондрий) определяют при подозрении на нарушение окисления жирных кислот и дефицит карнитина.

3. Определение ацилкарнитина — метод диагностики нарушений окисления жирных кислот и нарушений метаболизма органических кислот. Для исследования используют пробу крови на фильтровальной бумаге, плазму или сыворотку.

4. Уровни лактата и пирувата определяют при подозрении на митохондриальные болезни (группа наследственных заболеваний, связанных с дефектами в функционировании митохондрий, приводящими к нарушениям энергетических функций в клетках эукариотов).

В. Анализы мочи

1. Экспресс-тесты (капельные тесты и цветные реакции мочи) позволяют быстро выявить ряд веществ.

Тест на кетоновые тела (ацетоацетат) положителен при острых нарушениях метаболизма органических кислот, болезни кленового сиропа и митохондриальных болезнях. Отсутствие или низкий уровень кетоновых тел в ответ на гипогликемию свидетельствует о нарушении бета-окисления жирных кислот или гликогенозе I типа.
Тест на восстановители положителен при галактоземии, непереносимости фруктозы и других нарушениях, проявляющихся синдромом Фанкони.
Глюкозооксидазный тест при галактоземии отрицательный.
Тест с хлоридом железа (FeCl₃) положителен при фенилкетонурии и болезни кленового сиропа. При фенилкетонурии моча окрашивается в темно-зеленый цвет (из-за фенилкетонов), а при болезни кленового сиропа — в цвет хаки (из-за альфа-кетокислот).
Тест Берри положителен при некоторых мукополисахаридозах, но нередко дает ложноотрицательный результат.
Динитрофенилгидразиновый тест на альфа-кетокислоты положителен при болезни кленового сиропа.
Нитрозонафтоловый тест позволяет выявить метаболиты тирозина при различных формах тирозинемии.

Г. Исследование СМЖ (спинно-мозговой жидкости)

Содержание белка в СМЖ повышается при некоторых болезнях накопления (болезнь Краббе), митохондриальных болезнях (синдром Кирнса—Сейра) и др.
Определение аминокислот важно для диагностики гипергликемии без кетоацидоза у грудных детей (тяжелая мышечная гипотония, эпилептические припадки, задержка развития). Диагностическим признаком служит увеличенное отношение уровня глицина в СМЖ к уровню глицина в крови. При митохондриальных болезнях увеличение уровней лактата и пирувата приводит к повышению уровня аланина.
Определение лактата и пирувата полезно для диагностики митохондриальных болезней.

Методы экспресс-диагностики определения Х и Y хроматина.

· Определение Х- и Y-хроматина часто называют методом экспресс-диагностики пола. Исследуют клетки слизистой оболочки ротовой полости, вагинального эпителия или волосяной луковицы. В ядрах клеток женщин в диплоидном наборе присутствуют две хромосомы Х, одна из которых полностью инактивирована (спирализована, плотно упакована) уже на ранних этапах эмбрионального развития и видна в виде глыбки гетерохроматина, прикреплённого к оболочке ядра. Инактивированная хромосома Х называется половым хроматином или тельцем Барра. Для выявления полового Х-хроматина (тельца Барра) в ядрах клеток мазки окрашивают ацетарсеином и препараты просматривают с помощью обычного светового микроскопа. В норме у женщин обнаруживают одну глыбку Х-хроматина, а у мужчин её нет.

· Для выявления мужского Y-полового хроматина (F-тельце) мазки окрашивают акрихином и просматривают с помощью люминисцентного микроскопа. Y-хроматин выявляют в виде сильно светящейся точки, по величине и интенсивности свечения отличающейся от остальных хромоцентров. Он обнаруживается в ядрах клеток мужского организма.

· Отсутствие тельца Барра у женщин свидетельствует о хромосомном заболевании — синдроме Шерешевского-Тернера (кариотип 45, Х0). Присутствие у мужчин тельца Барра свидетельствует о синдроме Клайнфелтера (кариотип 47, ХХY).

· Определение Х- и Y-хроматина — скрининговый метод, окончательный диагноз хромосомной болезни ставят только после исследования кариотипа.

Дата добавления: 2021-12-10; просмотров: 82; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

12 3 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!