Качественное определение гемоглобина
Количественное определение гемоглобина
Определение количества гемоглобина в крови производится колориметрическим путем. Простейший тип – гемометр.
Принцип действия.
Гемоглобин крови под действием децинормального раствора соляной кислоты превращается в солянокислый гематин. Полученный раствор бурого цвета разбавляется в градуированной пробирке водой до совпадения его цвета с цветом стандартов гемометра. Количество гемоглобина отсчитывается по уровню разбавленного раствора в градуированной пробирке согласно делению шкалы прибора.
|
|
Конструкция гемометра.
Гемометр состоит из корпуса стойки с тремя смотровыми окошками. Снизу корпус закрывается крышкой, привинчивающейся двумя винтами. В два гнезда снизу вставляются одинаковые запаянные пробирки со стандартной жидкостью и закрываются крышкой. В среднее гнездо вставляется градуированная пробирка. Цвет жидкости заполненных пробирок-стандартов установлен соответственно цвету раствора солянокислого гематина, полученного из крови с концентрацией гемоглобина в 17,3г%. В задней стенке корпуса смонтировано прозрачно-матовое или молочного цвета стекло. Состав стандартных жидкостей гемометра: 200мм3 децинормальной соляной кислоты смешивают с 20мм3 крови, а затем объем раствора доводится добавлением дистиллированной воды до 2мл. Гемоглобин крови при этом распадается на белок глобин и гем: последний, соединяясь с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, имеющий коричневую окраску. В таком стандартном растворе содержится 17,3г% гемоглобина.
|
|
|
Измерительная пробирка и единицы измерения гемоглобина
Градуированная пробирка гемометра может иметь шкалу: с делением от 2 до 23. которая показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, т.е. концентрация гемоглобина в гр%, по СИ - г/л.
Ход работы.
В градуированную пробирку наливают децинормальный раствор соляной кислоты до метки с цифрой 2 г%. Капиллярной пипеткой набирают 20 мм крови, путем осторожного насасывания через резиновую трубку в мундштук. Обычно кровь насасывают на несколько миллиметров выше круговой метки, вынимают мундштук и обтирают ватой кровь, прилипшую снаружи на кончик пипетки. Столбик крови обычно доводится до метки посредством дотрагивания до кончика пипетки ватой. При этом пипетку необходимо держать горизонтально. Затем пипетку с кровью опускают в градуированную пробирку так, чтобы кончик ее прогрузился в соляную кислоту, и кровь осторожно, не взмучивания жидкости, выдавливается из пипетки. После этого пипетка промывается путем насасывания 2 или 3 раза соляной кислоты из верхнего слоя ее в пробирке. Затем пипетка приподнимается, окончательно освобождается от жидкости выдуванием при прикосновении к стенкам пробирки и осторожно удаляется из пробирки. Полученная смесь крови с соляной кислотой тщательно перемешивается посредством легкого постукивания по дну пробирки. Полученную смесь красновато-бурого цвета оставляют в спокойном состоянии в течение 5 минут, поместив пробирку в корпус гемометра. За это время произойдет образование солянокислого гематина (или гемина). По истечении этого времени жидкость осторожно разбавляют дистиллированной водой (пипеткой) до тех пор, пока не будет одинакового цвета со стандартами. Во время разбавления жидкость в пробирке тщательно перемешивается стеклянной палочкой. Сравнение цветов проводится путем сличения при рассмотрении их при дневном свете на вытянутой руке против окна. Количество гемоглобина отсчитывается после совпадения цвета жидкости с цветом стандартов, причем отсчет производится нижнему мениску жидкости в пробирке.
|
|
|
Количество гемоглобина у животных
| Вид животного | г/100мл, г% | г/л |
| КРС | 9-12 | 90-120 |
| Лошади | 8-14 | 80-140 |
| Овцы, козы | 0-14 | 100-140 |
| Свиньи | 9-11 | 90-110 |
| Кролики | 10,5-12,5 | 105-125 |
| Собаки | 13-16 | 130-160 |
| Человек: женщины | 12-14 | 120-140 |
| мужчины | 13-16 | 130-160 |
|
|
|
Качественное определение гемоглобина
Гемоглобин обладает характерным спектром поглощения, отличающим его от других химических соединений. Спектральный анализ позволяет выяснить наличие в каком-либо растворе гемоглобина или его производных.
Ход работы.
К 10 мл дистиллированной воды в пробирке прибавьте 1-2 капли крови, происходит гемолиз крови (т.е. разрушение эритроцитов, которое сопровождается выходом из них красящего пигмента). Гемолизированная кровь исследуется с помощью карманного спектроскопа на проходящем свете. Если между целью спектроскопа и источником света поместить окрашенную среду (гемолизированная кровь), то окрашенный раствор пропускает не все лучи белого цвета, задерживая некоторые из них. Та часть спектра, лучи которой не пропускаются, представляются наблюдателю в виде темных полос.
В нашем опыте в поле зрения спектра обнаруживаются две полоски поглощения в желто-зеленой части спектра, между фраунгоферовыми Д и Е слева более узкая и справа более широкая, характерные для оксигемоглобина.
Спектр восстановленного гемоглобина имеет одну широкую диффузную полосу поглощения между линиями Д и Е, ближе к линии Д.
|
|
|
Спектр метгемоглобина имеет 4 полосы поглощения. Наиболее характерной для метгемоглобина является полоса поглощения в красной части спектра, между линиями С и Д, ближе к С. Две другие полосы между линиями Д и Е, четвертая полоса широкая, расположена в сине-зеленой части спектра.
Спектр поглощения карбоксигемоглобина имеет две полосы поглощения, сходные с полосами поглощения оксигемоглобина, но полосы несколько сдвинуты к фиолетовой части спектра.
Дата добавления: 2018-02-18; просмотров: 1440; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!