Основные требования предьявляемых к криопротекторам
Криопроте́кторы — вещества, защищающие живые объекты от
повреждающего действия замораживания. Криопротекторы используют
при криоконсервации — низкотемпературном хранении живых объектов
(другими словами, при замораживании клеточных культур, крови, спермы,
эмбрионов, изолированных органов и биологических объектов целиком ).
При замораживании на живые объекты воздействуют два повреждающих
фактора: формирование внутриклеточного льда и обезвоживание.
Помещение живых объектов в растворы криопротекторов и замораживание в
этих растворах снижает или исключает полностью формирование
внутриклеточного льда и обезвоживание.
Методы замораживания гамет и эмбрионов.
Криоконсервация
Процесс, в котором половые клетки и эмбрионы подвергаются воздействию
криопротекторов, охлаждению до температуры жидкого азота (-196°С),
хранению при этой температуре с последующим размораживанием,
удалением криопротекторов и возвращением ооцитов и эмбрионов в
физиологическую среду для дальнейшего роста и развития. Около 90% воды
в клетке - это свободная вода, которую нужно безопасно удалить в процессе
криоконсервации и предотвратить повреждение клеток формирующимися
кристаллами льда. Именно в этом и состоит основная роль криопротекторов
– защитить клетки от повреждения льдом. Криопротекторы не только
уменьшают скорость формирования кристаллов, но и модифицируют
|
|
|
(сглаживают) их форму.
Процедура криоконсервации предполагает подавление всех внутриклеточных
химических реакций при низкотемпературном хранении в жидком азоте. По
произведенным расчетам потребуются сотни лет прежде, чем фоновая
ионизирующая радиация на планете Земля приведет к серьезным
повреждениям хранящихся эмбрионов.
Методы криоконсервации можно разделить на две основных
группы: медленное замораживание и витрификация. По способу хранения
и размораживания эти две процедуры мало различаются между собой,
главное отличие состоит в концентрациях используемых криопротекторов и
скорости охлаждения. При медленном замораживании используют низкие
концентрации криопротекторов, эмбрионы и ооциты помещают в
пластиковые мини-соломинки и охлаждают в программируемом
замораживателе. Контролируемое медленное охлаждение со скоростью
0,3°С/мин продолжается до -30º...-37ºC, после чего соломинки переносят
непосредственно в жидкий азот для хранения.
Метод лапаротомии (собственный метод).
Лапаротомия —вскрытие брюшной полости для доступа к расположенным
в ней органам.
Операция требует строгой асептики, тщательного выполнения всех деталей
|
|
|
оперативной техники и внимательного ухода за больным в
послеоперационном периоде. Если позволяют обстоятельства, животное
выдерживают 12…24 ч на голодной диете. Если кишечник вздут, собакам
полезно давать адсорбирующие вещества вместе с фенилсалицилатом (кошки
фенилсалицилат плохо переносят, им назначают активированный уголь,
фестал, панзинорм форте и др.). За 5…6 ч до операции ставят
опорожняющую клизму с водой комнатной температуры и мылом.
Накануне дня операции животное должно быть вымыто, а операционное поле
тщательно выбрито и до операции закрыто повязкой. До операции
необходимо опорожнить мочевой пузырь (катетеризацией, надавливанием на
брюшную стенку); следует помнить, что собаки опорожняют мочевой пузырь
самостоятельно, если их вывести из помещения.
Техника операции. Зависит от топографии оперируемого органа, характера
вмешательства. В связи с этим наметились два основных метода
лапаротомии: на вентральной брюшной стенке (нижняя лапаротомия) и на
одной из боковых (подвздошная лапаротомия).
Главное требование, предъявляемое к рациональным разрезам нижней
брюшной стенки (нижняя лапоротомия), — сохранить целостность нервов
|
|
|
(иначе могут развиться атрофические изменения в мышцах) и мышц,
особенно прямой и косой внутренней.
Витальный метод изучения репродуктивных клеток животных.
Этот метод исследований дает возможность получить информацию каким
образом в клетках, тканях, органах происходят процессы
жизнедеятельности, проследить движение, деление, рост, взаимодействие
клеток, их реакцию на действие различных факторов.
При исследовании живых клеток используют методы витального и
суправитального окрашивания, используя специальные не токсические для
живых тканей красители.
При витальном окрашивании краситель вводят в организм живого
организма и он избирательно окрашивает определенные клетки. Таким
образом проводят исследования макрофагической системы, введением
трипанового синего, или литиевого кармина.
Суправитальное окрашивание - это окрашивание живых клеток
изолированных от организма.
Таким образом определяют:
~лизосомы - краситель нейтральный красный;
~митохондрии - янус зеленый;
~ретикулоциты - диамант-крезиловый синий.
При витальном, суправитальном, а также поствитальном исследовании
неокрашенных гистологических структур, используют ряд специальных
|
|
|
методов световой микроскопии:
1) Фазовоконтрастную;
2) Темнополевую;
3) Флуоресцентную.
Трансплантация эмбрионов животных.
Под трансплантацией эмбрионов понимают технологию, которая состоит
из искусственного осеменения донора, последующего извлечения эмбриона
из половых органов самки-донора и его пересадку в половые органы второй
самки (суррогатной матери).
Основная задача, которую ставят перед собой селекционеры, прибегая к
трансплантации эмбрионов, заключается в дальнейшем совершенствовании
породы, популяции или стада. Технология позволяет от одной пары
выдающихся производителей получить несколько десятков потомков за год.
При селекции крупного рогатого скота это очень эффективный метод. У
этого вида животных продолжительная беременность (9 месяцев), низкая
плодовитость (обычно корова приносит одного теленка за год), поздно
наступает половая и физиологическая зрелость. Поэтому процесс создания
породы в прошлые годы занимал десятилетия. Трансплантация эмбрионов
сокращает время на создание и совершенствование пород скота радикальным
образом.
ехнология трансплантации эмбрионов применяется еще с одной целью. Для
повышения прибыльности скотоводства в организм суррогатной матери
помещаются сразу два эмбриона, т. е. программируется рождение двойни от
коровы. В данном случае благополучие суррогатной матери ставится под
угрозу с самого начала. Во-первых, двойня повышает нагрузку на организм
матери во время беременности, изнашивает ее организм, снижает адаптивные
возможности. Во-вторых, рождение двойни, как правило, сопровождается
нарушением родового процесса и приводит к развитию послеродовых
осложнений у коровы.
Дата добавления: 2018-02-18; просмотров: 835; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!