Техника посевов микроорганизмов
Методы выделения чистой культуры возбудителя. Техника посева исследуемого материала на питательные среды
Для того, чтобы выделить чистую культуру микроорганизмов, следует отделить многочисленные бактерии, которые находятся в материале. Это можно достичь с помощью методов, которые основаны на двух принципах – механическом и биологическом разобщении бактерий.
| Механический принцип | Биологический принцип |
| МЕТОДЫ 1. Фракционных разведений Л. Пастера 2. Пластинчастых разведений Р. Коха 3. Поверхностных посевов Дригальського 4. Поверхностных штрихов | МЕТОДЫ Принимают во внимание: а - тип дыхания (метод Фортнера); б - подвижность (метод Шукевича); в - кислотоустойчивость; г - спорообразование; д - температурный оптимум; е - избирательную чувствительность лабораторных животных к бактериям |
Метод последовательных разведений, предложен Л. Пастером, был одним из самых первых, который применялся для механического разъединения микроорганизмов. Он заключается в проведении последовательных серийных разведений материала, который содержит микробов, в стерильной жидкой питательной среде. Этот прием достаточно кропотлив и несовершенный в работе, поскольку не позволяет контролировать количество микробных клеток, которые попадают в пробирки при разведениях.
Метод Дригальского является более совершенным методом, который широко распространен в повседневной микробиологической практике. Сначала на поверхность среды в чашке Петри пипеткой или петлей наносят исследуемый материал. С помощью металлического или стеклянного шпателя его тщательным образом втирают в среду. Чашку во время посева держат приоткрытой и осторожно вращают, чтобы равномерно распределить материал. Не стерилизуя шпателя, засевают материал в другой чашке Петри, при необходимости – в третьей. Только после этого шпатель окунают в дезинфикуючий раствор или прожаривают в пламени горелки. На поверхности среды в первой чашке наблюдаем, как правило, сплошной рост бактерий, во второй – густой рост, а в третьей – рост в виде изолированных колоний.
|
|
|
Колонии по методу Дригальского
Методы выделения чистых культур, основанные на биологическом принципе
Биологический принцип разъединения бактерий предусматривает целеустремленный поиск методов, которые учитывают многочисленные особенности микробных клеток. Среди самых распространенных методов можно выделить следующие:
1. По типу дыхания. Все микроорганизмы по типу дыхания разделяются на две основных группы: аеробни ( Corynebacterium diphtheriae , Vibrio сholerae и тому подобное) и анаэробные ( Clostridium tetani , Clostridium botulinum , Clostridium perfringens и др.). Если материал, из которого следует выделить анаэробные возбудители, предварительно прогреть, а затем культивировать в анаэробных условиях, то вырастут именно эти бактерии.
|
|
|
2. По спорообразованию . Известно, что некоторые микробы (бациллы и клостридии) способны к спороутворення. Среди них Clostridium tetani , Clostridium botulinum , Clostridium perfringens , Bacillus subtilis , Bacillus cereus. Споры стойкие к действию факторов внешней среды. Следовательно, исследуемый материал может быть подданный действию термического фактора, а затем инокулятивно перенесен в питательную среду. Спустя некоторое время на нем вырастут именно те бактерии, которые способны к спороутворення.
3. Стойкость микробов к действию кислот и щелочей. Некоторые микробы ( Mycobacterium tuberculosis , Mycobacterium bovis ) в результате особенностей их химического строения стойкие к действию кислот. Вот почему материал, который их содержит, например, мокрота при туберкулезе предварительно обрабатывают равным объемом 10 % раствора серной кислоты, а затем высевают на питательные среды. Посторонняя флора погибает, а микобактерии в результате их резистентности к кислотам, вырастают.
Холерный вибрион ( Vibrio сholerae ), напротив, является галофильною бактерией, потому для создания оптимальных условий роста его высевают на среды, которые содержат щелочь (1 % щелочная пептонная вода). Уже через 4-6 часов на поверхности среды появляются характерные признаки роста в виде нежной голубоватой пленки.
|
|
|
4. Чувствительность микробов к действию химических веществ, антибиотиков и других противомикробных средств. В результате особенностей метаболизма бактерий они могут иметь разную чувствительность к некоторым химическим факторам. Известно, что стафилококки устойчивы к действию 7,5–10 % хлориду натрия. Вот почему для выделения этих возбудителей используют элективные питательные среды (желточно-солевой агар, маннит-солевой агар), которые содержат именно это вещество. Другие бактерии при такой концентрации хлорида натрия практически не растут.
5. Введение некоторых антибиотиков (нистатин) используется для торможения роста грибов в материале, который сильно контаминированн ими. И, напротив, добавление антибиотика пеницилина к среде способствует ингибированию роста бактериальной флоры, если нужно выделить грибы. Добавление фуразолидона в определенных концентрациях к питательной среде создает селективные условия для роста коринебактерий и микрококков.
|
|
|
6. Способность микроорганизмов проникать через неповрежденные кожные покровы. Некоторые патогенные бактерии ( Yersinia pestis ) в результате наличия большого количества ферментов агрессии способны проникать через неповрежденную кожу. Для этого шерсть на теле лабораторного животного бреют и в этот участок втирают исследуемый материал, который содержит возбудителя и большое количество стороньои микрофлоры. Через некоторое время животное забивают, а из крови или внутренних органов выделяют микробов.
7. Чувствительность лабораторных животных к возбудителям инфекционных заболеваний. Отдельные животные проявляют высокую чувствительность к разным микроорганизмам.
Например, при любом способе введения Streptococcus pneumoniae белым мышам у них развивается генерализованная пневмококковая инфекция. Аналогичная картина наблюдается при заражении гвинейских свинок возбудителями туберкулеза ( Mycobacterium tuberculosis ).
В повседневной практике бактериологи пользуются такими понятиями как штамм и чистая культура микроорганизмов. Под штаммом понимают микробов одного вида, которые выделены из разных источников, или из одного и того же источника, но в разное время. Чистая культура бактерий – это микроорганизмы одного вида, потомки одной микробной клетки, которые выросли на (в) питательной среде.
Техника посевов микроорганизмов
Дата добавления: 2021-06-02; просмотров: 57; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!