Основные группы микроорганизмов, встречающиеся в мелассе
КОГПОАУ Кировский технологический колледж пищевой промышленности
Реферат на тему:
Методы контроля производства дрожжей
Студентки группы П-11
Яковлевой Веры
Преподаватель:
Копосова Мария Александровна
2020
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ
АНАЛИЗ МЕЛАССЫ
Мелассу для микробиологического анализа отбирают в стерильную посуду в количестве около 100 г из средней пробы, доставленной в лабораторию завода (см. "Отбор проб").
Степень обсемененности мелассы микроорганизмами определяют по двум показателям: общему количеству микроорганизмов в 1 г мелассы; видовому составу (процентное соотношение) микрофлоры, в частности групп микроорганизмов, являющихся вредными для дрожжевого производства.
Посев мелассы производят одновременно как в глубь агаровых питательных сред, так и на поверхность. Для посева используют следующие питательные среды: агар-дрожжевая вода с содержанием 4% сахарозы для учета общего количества микроорганизмов в 1 г; агар-сусло с мелом для выявления кислотообразующих и спорообразующих бактерий; молочный агар для выявления гнилостных бактерий.
Анализ производят по следующей схеме: подготовка питательных сред, разбавление материала, посев, учет количества микроорганизмов, определение состава микрофлоры.
Все необходимые питательные среды должны быть приготовлены заранее и простерилизованы (см. приложение II).
|
|
|
Для анализа одного образца мелассы используют следующие среды: четыре пробирки агар-дрожжевой воды с содержанием 4% сахарозы (количество среды в каждой пробирке должно быть не менее 15 мл), две - с агар-суслом, две - с водяным агаром. Все отобранные пробирки помещают в водяную баню, нагревают до кипения. Когда агар расплавится и станет жидким, без комков, баню снимают с нагревательного прибора и оставляют для охлаждения. Как только температура воды в бане снизится до 65-70 °С, вынимают пробирку с агаром-суслом и всыпают в нее 0,3-0,4 г стерилизованного измельченного мела при соблюдении всех правил асептики. Смесь тщательно перемешивают и выливают в стерильную чашку Петри. Среду равномерно распределяют по дну, следя за тем, чтобы мел не осел на дно.
Подготовка молочного агара заключается в следующем. В расплавленный водяной агар добавляют стерильное обезжиренное молоко (30-40%), перемешивают и оставляют в водяной бане вместе с остальными пробирками. Пробирки охлаждают в водяной бане до температуры 48-50 °С.
Подготовка исследуемого образца для анализа - разведение. Мелассу в количестве 20 г отвешивают на технохимических весах в стерильном химическом стакане (вместимостью 250 мл) и смешивают ее с 180 мл стерильной водопроводной воды - первое разведение (в 10 раз). После тщательного размешивания из первого разведения стерильной градуированной пипеткой отбирают 1 мл и добавляют 9 мл стерильной водопроводной воды - второе разведение (в 100 раз).
|
|
|
Определение общего количества микроорганизмов в 1 г
По 1 мл мелассового раствора из второго разведения вносят в две стерильные чашки Петри (на дно) и заливают расплавленным агаром с дрожжевой водой и сахарозой (4%). Температура агаровой среды должна быть не выше 48-50 °С. Внесенный материал осторожно, круговым движением, перемешивают с питательной средой и дают агару застыть - посев внутрь среды.
Чашки с посевами ставят в термостат при температуре 30 °С. Через 48-72 ч подсчитывают все выросшие колонии и определяют количество микроорганизмов в 1 г мелассы.
Пример. При посеве из второго разведения (в 100 раз) в чашке выросло 45 колоний, следовательно, в 1 г мелассы содержится 45·100=4500 микроорганизмов.
Определение состава микрофлоры мелассы
Поверхностный посев на агар-сусло с мелом для выявления кислотообразующих и агглютинирующих бактерий. Две капли раствора мелассы из первого разведения (в 10 раз) наносят стерильной пипеткой на поверхность приготовленной ранее среды агар-сусло с мелом (способ подготовки см. выше) и распределяют их равномерно стерильным шпателем Дригальского. Чашку с посевом ставят в термостат при температуре 30 °С на 48-72 ч. По истечении этого времени на поверхности среды вырастают колонии, образующие зону просветления мела вокруг себя (кислотообразующие и агглютинирующие бактерии), а также колонии без зоны (спорообразующие аэробные бактерии, кокки и др.).
|
|
|
Посев внутрь среды в молочный агар для выявления гнилостной микрофлоры. 1 мл из второго разведения (1x100) вносят на дно стерильной чашки Петри, вливают заготовленную вышеописанным способом молочную среду, перемешивают, дают застыть и помещают в термостат на 48-72 ч. Гнилостные бактерии, как спороносные, так и не образующие споры, в результате протеолиза молочного белка образуют вокруг своих колоний зону просветления.
Основные группы микроорганизмов, встречающиеся в мелассе
Гнилостные бактерии. Это бактерии, образующие и не образующие споры, вырастают при посевах мелассы как на агар-дрожжевой воде с содержанием 4% сахарозы, так и на агаре-сусле с мелом и на молочном агаре.
|
|
|
Колонии этих бактерий разные - сухие, морщинистые или слизистые, иногда с пузырьками газа. На среде агар-сусло с мелом зон просветления не образуют, на молочном агаре образуют - вокруг колоний.
Под микроскопом палочки подвижные или неподвижные, при окрашивании или ясно видны споры, или не обнаруживаются вовсе.
Спорообразующие нитритообразующие бактерии. В группе спорообразующих бактерий часто встречаются бактерии, восстанавливающие нитраты в нитриты. Для установления этой способности материал из колонии спороносных бактерий петлей переносят в пробирку со специальной средой (дрожжевая вода с содержанием 4% сахарозы и 0,1% KNO 
).
Пробирку с посевом ставят в термостат при температуре 30-32 °С. Через 18-24 ч производят качественную пробу на нитриты, для чего 0,5 мл бактериальной культуры смешивают с 0,5 мл реактива Грисса, предварительно нагретого до 90 °С.
Красное окрашивание покажет наличие нитритов в культуральной жидкости, интенсивность же окраски укажет на большую или меньшую способность бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
Дрожжи. Их выявляют в посевах на агар-дрожжевую воду с содержанием 4% сахарозы и на агар-сусло с мелом. Колонии дрожжей на поверхности среды белые или сероватые, чаще с ровным краем, блестящие, многие матовые, морщинистые; в глубине среды - чечевицеобразные, часто с крестообразными выростами, разрывающими агар. Под микроскопом - крупные, овальные или продолговатые клетки с почками или цепочки клеток.
В мелассе встречаются дрожжи различных родов и видов.
Кислотообразующие бактерии. При посеве на агар-сусло с мелом вырастают колонии разной величины (диаметром 0,5-1,5 мм), слегка опалесцирующие, иногда полупрозрачные, с ровными краями, иногда с гладкой поверхностью. Вокруг каждой колонии образуется зона просветления мела диаметром 0,5-2 мм
АВТОМАТИЗИРОВАННЫЙ МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ ДРОЖЖЕВОГО ПРОИЗВОДСТВА
Дрожжевое производство в целлюлозно-бумажной промышленности используется для утилизации предгидролизатов и сульфитных щелоков. Оно имеет ряд особенностей, зависящих от вида микроорганизмов, которые используются в качестве продуцентов кормового белка [4]. Культура дрожжей-продуцентов должна обладать целым комплексом полезных свойств: активно размножаться на различных средах, полностью используя источники углерода, входящие в их состав; давать высокий выход биомассы, содержащей большое количество полноценного белка и витаминов; обладать большой удельной скоростью роста; быть достаточно устойчивой к вытеснению посторонними микроорганизмами; не обладать патогенными свойствами и т.д. [1].
Микробиологический контроль дрожжевого производства обеспечивается выполнением следующих работ:
проведение систематического ежедневного контроля за физиологическим состоянием дрожжей во всех дрожжерастильных аппаратах и своевременным вмешательством в процесс при ухудшении состояния дрожжевых клеток или появлении нежелательных примесей;
изучение видового состава микрофлоры, развивающейся в дрожжерастиль-ных аппаратах данного завода, и определение процентного соотношения разных культур;
выполнение технологических параметров, обеспечивающих оптимальные условия роста рекомендованной или отобранной продуктивной культуры [6].
Проводя повседневный микробиологический контроль за состоянием и активностью производственной культуры, корректируя технологический режим выращивания дрожжей, можно активно участвовать в повышении производительности дрожжевых предприятий. Необходимо оценивать состояние микрофлоры: физиологическое состояние дрожжей, количество мертвых и почкующихся клеток, наличие ветвистых и одиночных форм, вытянутых или видоизмененных клеток, присутствие посторонних примесей (дрожжей, отличающихся от основной культуры, мицели-альных грибов, бактерий) [3]. При оценке физиологического состояния дрожжей учитывают размер клеток, их возраст, активность почкования. Размер клеток меняется от возраста, условий культивирования. Уменьшение размеров дрожжевых клеток, а также появление раздутых, гигантских экземпляров указывает на неблагоприятные условия культивирования - замедленную скорость процесса, недостаток питания и т. д.
Для того, чтобы установить процентное содержание почкующихся клеток в той или иной дрожжевой взвеси, необходимо знать их количество. С этой целью в препарате в нескольких полях зрения микроскопа (обычно в десяти) подсчитывают общее количество клеток и число почкующихся клеток.
Для определения процентного содержания мертвых клеток в дрожжевой взвеси считают также в нескольких полях зрения препарата (обычно в десяти) число мертвых клеток и общее количество клеток, вычисляют процентное отношение мертвых клеток к их общему количеству. При определении количества мертвых клеток дрожжей, культивируемых на неокрашенных средах, часто пользуются одним из методов окрашивания [2].
При микроскопировании дрожжевой суспензии необходимо также подсчитать процентное соотношение клеток основного, наиболее продуктивного, заводского штамма и клеток дрожжей-примесей [5]. При этом дают оценку чистоты производственной культуры в зависимости от содержания посторонних микробов.
Как правило, все перечисленные операции, которые проводят с помощью микроскопа, очень трудоемкие. Оперативная и точная количественная оценка процентного содержания почкующихся клеток, мертвых клеток, других параметров дрожжевой культуры таким способом затруднена.
В настоящее время, благодаря высокопроизводительной компьютерной технике, возможна количественная интерпретация изображений, полученных с помощью микроскопа. При автоматическом подсчете в тысячи раз возрастает скорость интерпретации изображений производственной дрожжевой культуры, что позволит сократить продолжительность анализа и повысить его точность. Кроме контроля количества клеток, можно также контролировать другие характеристики дрожжей: скорость (активность) почкования, отклонение размеров клеток в сторону увеличения или уменьшения размеров и т.п.
Дата добавления: 2021-06-02; просмотров: 99; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!