Микробиологическое исследование
Группа МПД 19
Лабораторная работа по микробиологии №20
Тема: Возбудитель сифилиса. Освоение методик окраски по Романовскому-Гимзе. Постановка реакции Вассермана
Актуальность.
В следствие роста скрытых форм сифилиса (за счёт позднего выявления, ухудшения социально-экономических условий жизни населения, широкого приёма антибиотиков), поздних форм сифилиса отмечается увеличение частоты встречаемости врождённого сифилиса.
Сифилитические поражения внутренних органов, особенно ранние висцеропатии, клинически не специфичные и могут имитировать клинику поражений внутренних органов несифилитической природы (миокардита, пневмонии, гепатита), что необходимо учитывать при диагностике данной патологии. Особую важность данной темы доказывает тот факт, что всё чаще отмечаются поражения нервной системы сифилитической природы, которая наблюдается уже в конце первичного периода и, в ряде случаев, особенно при поздних формах сифилиса, могут привести к инвалидизации и, даже, летальному исходу.
2.Цели занятия:
- Изучить со студентами свойства возбудителей сифилиса, факторы патогенности, патогенез, методы диагностики, профилактики и лечения сифилиса.
3.Задачи занятия:
3.1.Изучение свойств возбудителейсифилиса.
3.2.Изучение патогенеза сифилиса.
3.3.Изучение методов диагностики, профилактики и лечения сифилиса..
|
|
|
Возбудитель сифилиса
Теоретическая справка
Treponema pallidum - возбудитель сифилиса включен в род Treponema (от лат. trepo - поворачивать, nemo - нить).
Т. pallidum открыта Ф. Шаудином в 1905 г. Большой вклад в изучение сифилиса внесли И. И. Мечников, П. Эрлих, Д. К. Заболотный и др.
Морфология. Т. pallidum - спиралевидная нить размером 8-18 × 0,08-0,2 мкм с мелкими, равномерными завитками. Число завитков 12-14. Концы трепонемы заострены или закруглены. Трепонемы подвижны. Обладают четырьмя видами движения. По Романовскому - Гимзе окрашиваются в бледно-розовый цвет, поэтому они называются Т. pallidum - бледная трепонема. Плохое окрашивание объясняется малым содержанием нуклеопротеидов. Спирохеты можно выявлять в препаратах, окрашенных по Бурри, серебрением. Кроме того, их изучают в живом состоянии - в темном поле.
Возбудители сифилиса спор и капсул не имеют (см. рис. 4).
Культивирование. Бледные трепонемы очень требовательны к питательным средам. На искусственных питательных средах они растут только в присутствии кусочков мозга или почек кролика и асцитической жидкости. Растут медленно, 5-12 дней при температуре 35-36° С в анаэробных условиях. Бледные трепонемы хорошо размножаются в курином эмбрионе (поперечным делением). При выращивании на искусственных питательных средах трепонемы теряют вирулентность. Такие культуры называются культуральными. Культуры, выращенные в курином эмбрионе, называют тканевыми. Они обычно сохраняют вирулентность.
|
|
|
Ферментативными свойствами трепонемы не обладают. Однако культуральные штаммы различаются между собой по способности образовывать индол и сероводород.
Токсинообразование. Не установлено.
Антигенная структура. Бледная трепонема содержит несколько антигенных комплексов: полисахаридный, липидный и протеиновый. Серогруппы и серовары не установлены.
Устойчивость к факторам окружающей среды. Бледные трепонемы малоустойчивы. Температура 45-55° С губит их через 15 мин. К низким температурам они устойчивы. При замораживании сохраняются до года. Спирохеты чувствительны к солям тяжелых металлов (ртути, висмута, мышьяка и др.). Обычные концентрации дезинфицирующих веществ губят их в течение нескольких минут. Они чувствительны к бензилпенициллину, бициллину и др. Под влиянием некоторых факторов внешней среды и антибактериальных препаратов трепонемы могут образовывать цисты. В такой форме они длительно находятся в организме в латентном состоянии.
|
|
|
Восприимчивость животных. В естественных условиях животные сифилисом не болеют. Однако на обезьянах, как показали И. И. Мечников и Э. Ру, можно воспроизвести клиническую картину сифилиса: на месте введения образуется твердый шанкр. В настоящее время показано, что при заражении кроликов, морских свинок на месте введения или в другом месте на коже образуются язвы. На кроликах путем пассажей можно длительное время сохранять выделенный штамм трепонем.
Источники инфекции. Больной человек.
Пути передачи. Контакт бытовой (прямой контакт), преимущественно половой путь. Иногда сифилис может передаваться через предметы (посуду, белье). От больной сифилисом матери заболевание передается через плаценту ребенку (врожденный сифилис).
Патогенез. Входными воротами являются слизистые оболочки половых путей и ротовой полости.
Первичный период - спирохеты попадают на слизистую оболочку, и после инкубационного периода (в среднем 3 нед) на месте внедрения образуется язва, которая характеризуется плотными краями и дном - твердый шанкр. Образованию твердого шанкра сопутствует увеличение лимфатических узлов. Первичный период продолжается 6-7 нед.
|
|
|
Вторичный период - возбудители сифилиса по лимфатическим и кровеносным путям распространяются по всему организму. При этом на коже и слизистых оболочках образуются розеолы, папулы, везикулы. Продолжительность этого периода - 3-4 года.
Третий период - развивается при нелеченом сифилисе. В этот период в органах, тканях, костях, сосудах образуются грануляционные разрастания - гуммы или гуммозные инфильтраты, склонные к распаду. Этот период может продолжаться несколько лет (в скрытой форме). Больной в этот период незаразен. При нелеченом сифилисе (в некоторых случаях), спустя много лет, может наступить поражение центральной нервной системы: при поражении головного мозга - прогрессивный паралич, при поражении спинного мозга - спинная сухотка. Эти заболевания возникают при локализации трепонем в мозговой ткани, что приводит к тяжелым органическим и функциональным изменениям в организме.
Иммунитет. Естественного иммунитета нет. При заболевании сифилисом развивается "нестерильный" инфекционный иммунитет. Его называют шанкерный, так как при повторном заражении твердый шанкр не образуется, но все последующие периоды развиваются. При сифилисе обнаруживают IgC и IgM, а также реагины IgE, которые в присутствии кардиолипидного антигена связывают комплемент.
Профилактика. Санитарно-просветительная работа, раннее выявление больных сифилисом. Специфическая профилактика. Не разработана. Лечение. Пенициллин, бициллин, биохинол и др.
Контрольные вопросы
1. Опишите морфологию спирохет и методы окраски.
2. Что такое твердый шанкр?
3. Какой материал для исследования Вы будете брать в разные периоды заболевания сифилисом?
4. Каков иммунитет при сифилисе?
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выявление бледной трепонемы и серодиагностика.
Материал для исследования
1. Содержимое твердого шанкра (первичный период).
2. Содержимое розеол, папул, везикул (вторичный период).
3. Кровь (вторичный, третий и четвертый периоды).
Способы сбора материала
Способы сбора материала
Основные методы исследования
1. Микроскопический.
2. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).
3. Серологический: 1) реакция Вассермана (РСК);
2) осадочные реакции.
4. Реакция иммобилизации трепонем (РИТ).
Ход исследования
Ход исследования
Серологическая диагностика
Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента (табл. 52). Отличается она тем, что при реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген. Например, липоидный экстракт из бычьего сердца - кардиоантиген. Ввиду неспецифичности антител, реагирующих с этим антигеном, их называют реагинами. Реакция с неспецифическим антигеном объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидными экстрактами, образуют комплекс, который связывает комплемент, и поэтому гемолиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза - положительная реакция - серологически подтверждает диагноз "сифилис". При постановке серологических реакций нужно использовать также специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные.
Таблица 52. Постановка реакции Вассермана
Примечание. 1) ++++ полная задержка гемолиза; - гемолиз; 2) антиген № 1 неспецифический (липоидная фракция бычьего сердца); 3) антигены № 2 и 3 специфические, приготовленные из культур трепонем.
Осадочные реакции. 1. Реакция Кана. Сыворотку больного инактивируют при 56° С 30 мин. К антигену (экстракт липидов бычьего сердца) прибавляют 0,6% холестерина для повышения чувствительности реакции (табл. 53).
Таблица 53. Схема постановки реакции Кана
Учет результата: появление преципитации отмечается как положительная реакция.
2. Реакция Закса - Витебского (цитохолевая осадочная реакция) является модификацией реакции Кана. Авторы применили более концентрированный антиген, к которому прибавлен холестерин, что способствует более быстрому образованию преципитата.
Реакция иммобилизации трепонем (РИТ). Это наиболее специфичная реакция в диагностике сифилиса.
В настоящее время разработана методика этой реакции: взвесь трепонем получают из измельченного яичка кролика, зараженного Т. pallidum, и сохраняют в специальной среде, не угнетающей подвижность трепонем. В пробирку вносят 1,7 мл взвеси тканевых трепонем, добавляют 0,2 мл испытуемой сыворотки, 0,1 мл свежего комплемента.
Контроли: в 1-ю пробирку вместо испытуемой сыворотки вносят сыворотку здорового лица; во 2-ю - наливают инактивированную сыворотку морской свинки. Все пробирки помещают в эксикатор или анаэростат, заполняют их смесью газов (1 объем углекислоты и 19 объемов азота) и ставят в термостат при 35° С. Затем исследуемый материал наносят на стекло и изучают подвижность трепонем в темном поле. Принцип реакции заключается в том, что сыворотка больного сифилисом в присутствии комплемента угнетает движение бледной трепонемы. Определяют процент иммобилизованных трепонем.
Результат считают положительным, если иммобилизованных трепонем выше 50%; слабоположительным - от 30-50%; отрицательным - ниже 20%.
Контрольные вопросы
1. Какой материал используют для лабораторной диагностики сифилиса в разные периоды заболевания?
2. Каковы методы лабораторного исследования при диагностике сифилиса?
3. Какими антигенами нужно пользоваться при постановке реакции Вассермана?
4. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции иммобилизации трепонем (РИТ)? Какой материал берут у обследуемого, что в нем определяют?
Тестирование
1.Вопрос:
Возбудитель сифилиса:
Варианты ответа:
1. Treponema denticola
2. Treponema vincentii
3. Treponema pallidum
4. Treponema carateum
5. Treponema bryantii
2. Вопрос:
Для возбудителя сифилиса характерно все, к р о м е:
Варианты ответа:
1. активно подвижен
2. имеет 8-14 равномерных завитков
3. грамотрицателен
4. плохо окрашивается анилиновыми красителями
5. имеет 3-10 неравномерных завитков
3.Вопрос:
Факторы вирулентности возбудителя сифилиса (верно все, к р о м е):
Варианты ответа:
1. высокая инвазивность
2. экзотоксин
3. устойчивость к комплементу
4. устойчивость к фагоцитозу
5. антигенная изменчивость
4.Вопрос:
Источник инфекции при сифилисе:
Варианты ответа:
1. бактерионоситель
2. больной
3. предметы обихода больного
4. свежая кровь больного
5. инфицированные продукты питания
5.Вопрос:
Пути передачи при сифилисе:
Варианты ответа:
1. половой, трансмиссивный
2. алиментарный, контактный
3. половой, трансплацентарный
4. воздушно-капельный
5. воздушно-пылевой
6.Вопрос:
Для патогенеза сифилиса характерно все, к р о м е:
Варианты ответа:
1. цикличности течения
2. фибринозного воспаления
3. генерализации инфекции
4. длительной персистенции
5. развития Т-гиперчувствительности
7.Вопрос:
Особенности патогенеза первичного сифилиса (верно все, к р о м е):
Варианты ответа:
1. проникновение через поврежденные слизистые и кожу
2. образование твердого шанкра
3. регионарный лимфаденит
4. спонтанное излечивание
5. гранулематозное воспаление
8.Вопрос:
Особенности патогенеза вторичного сифилиса (верно все, к р о м е):
Варианты ответа:
1. генерализация инфекции
2. образование вторичных твердых шанкров
3. поражение кожи и слизистых (сыпь)
4. поражение лимфоузлов, ЦНС, суставов и др.
5. спирохетемия
9.Вопрос:
Особенности патогенеза третичного сифилиса (верно все, к р о м е):
Варианты ответа:
1. спирохетемия
2. незначительное количество спирохет в организме
3. развитие ГЧЗТ
4. образование гумм в ССС, печени, ЦНС, коже
5. значительные нарушения функций внутренних органов
10.Вопрос:
Микробиологическая диагностика вторичного и третичного сифилиса:
Варианты ответа:
1. выявление ГЧЗТ
2. выявление антител
3. выделение культуры
4. обнаружение возбудителя
5. не проводится
11.Вопрос:
Микробиологическая диагностики первичного сифилиса:
Варианты ответа:
1. выделение культуры
2. биопроба на кроликах
3. темнопольная микроскопия отделяемого шанкра, пунктата лимфоузлов
4. основной – выявление антител
5. темнопольная микроскопия содержимого элементов сыпи
Дата добавления: 2020-11-29; просмотров: 204; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!