Этап иммунодиагностики - лабораторные иммунологические тесты оценки иммунного статуса.
Тесты 1 уровня:
Определение абсолютного количества лимфоцитов
Рассчитывается по формуле лейкоциты х %лимфоцитов
100
У взрослого человека, в норме абсолютное число лимфоцитов - 1.2-2.5x109 в 1 л.
Фенотипирование лимфоцитов
Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD антигены (англ. cluster of differentiation antigens) - это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.
В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.
Метод позволяет определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов:
|
|
|
Т-лимфоциты (CD3+CD19-);
Т-хелперы/индукторы (CD3+CD4+CD45+);
Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3+CD8+CD45+);
истинные "натуральные киллеры" (NK-клетки) (CD3-CD56+CD45+);
В-лимфоциты (CD19+CD3-);
А также оценить малые клеточные популяции, и их функциональную активность:
Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток(Т-NK-клетки) (CD3+CD56+CD45+);
NK-клетки, экспрессирующие α-цепь антигена CD8 (CD3-СD8+CD45+).
Иммунорегуляторный индекс.
Довольно часто в состав иммунограммы включают так называемый иммунорегуляторный индекс, который является соотношением уровней CD3+CD4+ к CD8+ Т-лимфоцитам. Ранее считали, что в состав субпопуляции CD3+CD8+ Т-лимфоцитов входят так называемые клетки-супрессоры, угнетающие иммунный ответ. Сегодня установлено, что отдельной субпопуляции супрессоров не существует, а CD3+СD8+ Т-лимфоциты наделены цитотоксическими свойствами (клетки-киллеры). В связи с этим, изменилось понимание клинического значения оценки величины иммунорегуляторного индекса.
Сегодня уровень иммунорегуляторного индекса оценивают в сопоставлении с фазой иммунного ответа. В период разгара и стихания клинических проявлений иммунорегуляторный индекс достигает высоких значений за счет большого процентного содержания Т-хелперов (CD4+ Т-клеток). В период реконвалесценции значение показателя уменьшается, в связи с нарастанием уровня CD8+ Т-клеток (киллеров). Нарушение такой закономерности свидетельствует о неадекватности иммунной реакции и о возможности хронизации инфекции, в связи с неполной эрадикацией возбудителя.
|
|
|
Численность основных субпопуляций лимфоцитов крови (нормальные значения)
| Показатель | 0-3 мес. | 3-12 мес. | 1-2 года | 2-6 лет | 6-16 лет | 16-80 лет | |
|
CD3+ | % | 55-78 | 45-79 | 53-81 | 62-80 | 66-76 | 55-80 |
| abs *109/л | 2,07-6,54 | 2,28-6,45 | 1,46-5,54 | 1,61-4,23 | 1,40-2,00 | 0,80-2,00 | |
|
CD3+CD4+ | % | 41-64 | 36-61 | 31-54 | 35-51 | 33-41 | 31-49 |
| abs *109/л | 1,46-5,12 | 1,69-4,60 | 1,02-3,60 | 0,90-2,86 | 0,7-1,10 | 0,6-1,60 | |
|
CD3+CD8+ | % | 16-35 | 16-34 | 16-38 | 22-38 | 27-35 | 12-30 |
| abs *109/л | 0,65-2,45 | 0,72-2,49 | 0,57-2,23 | 0,63-1,91 | 0,60-0,90 | 0,19-0,65 | |
|
CD16+CD56+ | % | 2-14 | 2-13 | 3-16 | 4-23 | 4-27 | 6-20 |
| abs *109/л | 0,04-0,92 | 0,04-0,92 | 0,04-0,92 | 0,10-1,33 | 0,10-0,50 | 0,15-0,60 | |
|
CD19+(CD20+) | % | 19-31 | 19-31 | 19-31 | 21-28 | 12-22 | 5-19 |
| abs *109/л | 0,50-1,50 | 0,50-1,50 | 0,50-1,50 | 0,70-1,30 | 0,30-0,50 | 0,10-0,50 | |
| CD3+HLADR+ | % | 1-9 | 1-7 | 3-12 | 3-13 | 3-10 | 0-12 |
Определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов основных классов (IgM, IgG, IgA);
Для количественного определения содержания Ig различных классов в сыворотке крови и других биологических жидкостях широкое применение нашли различные варианты постановки реакции преципитации в геле и в жидкой среде, а также метод ИФА.
|
|
|
Определение иммуноглобулинов в реакции радиальной иммунодиффузии (РРИД) по Манчини.
Метод основан на феномене преципитации, когда взаимодействие антигенов с антителами в геле сопровождается образованием видимого осадка – преципитата. При постановке реакции используются моноспецифические сыворотки против Ig G, М и А человека. Антиген (сыворотка крови), внесенный в лунку агарового слоя, содержащего специфические антитела, диффундируя, образует кольцо преципитации. Диаметрколец увеличивается до тех пор, пока весь внесенный в лунку антиген не будет связан содержащимися в геле антителами. Величина преципитата отражает количество антител в геле, эквивалентное концентрации антигена, внесенного в лунку. Диаметр кольца преципитата прямо пропорционален количеству внесенного в лунку антигена.
Нефелометрия - определение концентрации взвешенных частиц и высокомолекулярных веществ в растворе по оценке интенсивности рассеяния света, проходящего через этот раствор. Нефелометрия может быть использована для определения концентрации белков, поскольку при добавлении к ним антител образуются иммунные комплексы, рассеивающие проходящий свет. Нефелометрия позволяет с высокой точностью определить концентрацию IgG, IgA, IgM, подклассов IgG, СЗ, С4, фактора В, С-реактивного белка и некоторых других сывороточных белков. Этот метод подходит для определения белков в низкой концентрации, например IgE, уровень которого в сыворотке не превышает 1 мкг/мл. В настоящее время многие лаборатории используют нефелометрию в качестве стандартного метода количественного определения иммуноглобулинов.
|
|
|
Иммуноферментный анализ (ИФА) - это лабораторное исследование, основанное на реакции «антиген-антитело Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала. Наибольшее распространение получили пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза и β-D-галактозидаза. Все три фермента определяются на уровне пикомолярных концентраций. Наиболее доступной является пероксидаза хрена. В состав субстратной системы для измерения активности пероксидазы фотометрическим способом входят хромогены, дающие при окислению перекисью окрашенные соединения.
Дата добавления: 2020-11-15; просмотров: 134; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!