ВОЗДУХ ЖИДКОСТИ ПОВЕРХНОСТИ
ЗАНЯТИЕ 2. Бактериологический анализ: основные этапы. Питательные среды: классификация, приготовление и состав. Методы взятия проб. Посев микрофлоры воздуха.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ – ИЗУЧЕНИЕ КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА МИКРОФЛОРЫ ТОГО ИЛИ ИНОГО ОБЪЕКТА.
При проведении бактериологического анализа можно выделить три основных этапа: 1) взятие пробы; 2) выделение чистых культур; 3) идентификация выделенных культур. Все эти этапы предполагают те или иные действия с микроорганизмами, культивирование которых производят с использованием питательных сред.
Питательная среда – субстрат содержащий все необходимые для развития микроба компоненты и отвечающий определенным требованиям (см. ниже). Выращивание м.о. в искусственных условиях получило название культивирование.
Питательные среды делятся по назначению, происхождению и консистенции.
По происхождению:
естественные и искусственные (из искусственных выделяют в особую группу синтетические среды, их готовят из химически чистых веществ солей, углеводов, аминокислот и др., взятых в определенных соотношениях).
По консистенции:
жидкие: мясная вода, МПБ, бобово-пептонный бульон и др.
полужидкие: готовятся на основе жидких путемдобавления 0,25% агара.
плотные: МПЖ, МПА (готовятся - к жидкой среде добавляется 10-15% желатины или 1,5-2% агара).
По назначению:
Простые (обычные ) - применяются для выращивания большинства м.о.: МПБ, МПА, МПЖ и др.
|
|
|
Элективные - пригодные для выращивания одного приспособленного к данным условиям вида м.о. Сопутствующие м.о. или не растут на такой среде или развитие их сильно задерживается. Пример - щелочно-пептонная вода ( для холерного вибриона ); среда Эшби для азотобактера.
Дифференциально-диагностические - применяются для изучения биохимических свойств микробов, а в особых случаях для выделения чистых культур некоторых микроорганизмов. Среды Гисса - жидкие среды с углеводами; среда Эндо - плотная среда с индикатором для кишечной палочки.
ТРЕБОВАНИЯ, КОТОРЫМ ДОЛЖНА УДОВЛЕТВОРЯТЬ ВСЯКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА.
1. Содержать необходимые для м.о. питательные вещества: источники азота, углерода, кислорода, водорода и неорганические соли; факторы роста;
2. Быть стерильной, т.е. не содержать никаких посторонних м.о.;
3. Быть достаточно прозрачной, что обеспечит хорошее наблюдение за характером роста культуры и теми изменениями, которые происходят в среде в результате роста микроорганизмов;
4. иметь соответствующую реакцию среды.
О СРЕДАХ:
Обычные - МПБ- жидкая среда, относящаяся к искусственным питательным средам ( готовится из мясо-пептонного бульона + соли + пептон + фосфатные буферные смеси для стабилизации рН.). Такой МПБ пригоден для выращивания большинства бактерий. Из него легко приготовить ряд сред специального назначения.
|
|
|
МПА - готовятся из МПБ + 1-2% агара. МПА содержит много питательных веществ, является основной плотной питательной средой пригодной для выращивания большинства м.о. Агар - вещество полисахаридной природы, получаемое из морской водоросли.
Полужидкие среды: готовятся из МПБ + 0,25% агара, используются редко, в частности для изучения подвижности микроорганзмов.
Сыпучие среды - готовые в виде порошка.
Элективные - применение их основано на свойствах некоторых организмов потреблять определенные вещества. Среда Эшби - для азотофиксирующих микроорганизмов, в частности для p. Azotobacter spp. Элективность этой среды заключается в том, что она не содержит N2 (а N2 необходим м.о.). На этой среде культивируются м.о., которые могут фиксировать N2 из воздуха (азотфиксаторы).
Щелочно-пептонная вода - для холерных вибрионов. Элективность этой среды заключается в том, что холерные вибрионы развиваются только в щелочных условиях. Применение элективных сред позволяет выделить чистые культуры м.о. Открыл элективные среды Виноградский. Им разработаны основные методы выделения чистых культур.
|
|
|
Дифференциально-диагностические - применение их основано на различной биохимической активности м.о. Биохимическая активность определяется по наличию ферментов, расщепляющих те или иные соединения, например сахара (как в случае сред Гисса). Среды Гисса – т.н. " пёстрый ряд" или классические - готовятся из МПБ + индикатор рН + углевод; разливаются в пробирки с поплавком. Пример: имеем несколько пробирок 1) глюкоза; 2) сахароза; 3) лактоза и т.д. В эти пробирки производят посев одной и той же культуры. Известно, что данная культура расщепляет только глюкозу и лактозу, при этом цвет среды изменяется (среда подкисляется). По изменению цвета среды определяют способность м.о. расщеплять сахара. Если в процессе расщепления углеводов образуется газ (СО2), то поплавок всплывает на поверхность среды.
Среда Эндо - плотная среда для бактерий кишечной группы, содержит лактозу - которую расщепляют только кишечные бактерии. Кишечная палочка на этой среде образует, в частности крупные колонии малинового цвета с металлическим блеском, а среда вокруг них изменяет цвет до малинового. Дизентерийная палочка образует полупрозрачные голубоватые колонии, и среда цвет не изменяет. Для обнаружения разных м.о. используют различные среды исходя из особенностей их обмена веществ.
|
|
|
Но не все микроорганизмы можно выращивать в искусственных условиях. В этом отношении вирусы и риккетсии отличаются от всех других м.о.: будучи облигатными (обязательными) паразитами, они не способны размножаться вне бактериальной клетки.
МЕТОДЫ ВЗЯТИЯ ПРОБ
ВОЗДУХ ЖИДКОСТИ ПОВЕРХНОСТИ
 |  |  |  |  | |||||
СМЫВ
СЕДИМЕНТАЦИЯ СИЛЬНО ЗАГРЯЗНЕННЫЕ
ФИЛЬТРОВАНИЕ СЛАБО ЗАГРЯЗНЕННЫЕ
(аппарат Кротова)
последовательные непосредственное исследование
разведения исследование суспензии
ПОСЕВ МИКРОФЛОРЫ ВОЗДУХА
Одним из простейших методов взятия проб воздуха является метод седиментации (осаждения)
Схема
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 73; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!