Стерилизация (обеспложивание) - полное уничтожение м.о., их спор и всего живого в питательной среде, материале, посуде, инструментах и других предметах лабораторного обихода.
Правила работы в микробиологической лаборатории. Устройство и работа с иммерсионным объективом. Знакомство с основными методами стерилизации и группами питательных сред 2 ч
ЗАНЯТИЕ 1. Правила работы в микробиологической лаборатории. Стерилизация. Методы и приемы. Подготовка сред и оборудования к стерилизации.
ПЛАН ЗАНЯТИЯ
1. Знакомство с правилами техники безопасности и правилами работы в лаборатории.
2. Знакомство с работой оборудования для стерилизации.
3. Подготовка посуды и инструментов к стерилизации.
Прежде чем приступить к лабораторным занятиям, необходимо ознакомиться с особенностями и основными правилами работы в микробиологической лаборатории.
Одним из основных приемов микробиологической техники является выделение из естественных субстратов микроорганизмов, среди которых иногда могут находиться и патогенные формы.
При неосторожном обращении с чистыми культурами м.о. их можно загрязнить посторонними бактериями, поэтому специфическим условием работы в микробиологической лаборатории является НЕОБХОДИМОСТЬ СОЗДАНИЯ стерильных УСЛОВИЙ, СТРОГОГО СОБЛЮДЕНИЯ чистоты и ПОРЯДКА.
В частности, вмикробиологической лаборатории необходимо соблюдатьследующие правила:
1. ЗАПРЕЩАЕТСЯ РАБОТАТЬ БЕЗ СПЕЦОДЕЖДЫ. Не входить в лабораторию в пальто, головном уборе, РАБОТАТЬ ТОЛЬКО В ХАЛАТЕ ИЛИ другой спецодежде. Халат - не роскошь, а средство защиты одежды от загрязнения микроорганизмами. Студенты должны носить халат в отдельном пакете и вынимать его только на заня3тиях и для стирки дома. Следить за тем чтобы с халатом не контактировали домашние, особенно дети до 3 лет.
|
|
|
2. ЗАПРЕЩАЕТСЯ ПИТЬ, КУРИТЬ, ПРИНИМАТЬ ПИЩУ. В помещении лаборатории необходимо соблюдать чистоту и порядок, не разрешается курить, принимать пищу, немытыми руками касаться лица, а также ничего не бросать на пол. Чувство "грязных рук" поможет Вам постоянно контролировать ситуацию в лаборатории. Если вы коснулись руками загрязненного материала или почувствовали что ваши руки загрязнены, не стесняйтесь и не ленитесь помыть их. Запрещается прикасаться руками к исследуемому материалу (колонии в чашках, сырые пробирки, чашки, колбы и т.д.).
3. ЗАПРЕЩАЕТСЯ ПРИНОСИТЬ В ЛАБОРАТОРИЮ ПОСТОРОННИЕ КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ. Перед началом работы убедиться в порядке ли рабочее место, не держать на столе посторонних предметов: портфелей, одежды и др. С них сыплется множество микробов, загрязняющих рабочие культуры микроорганизмов. Кроме того, все, что находится на столе, может быть загрязнено культивируемыми в лаборатории бактериями.Во времяработы избегать лишнего хождения, открывания и закрывания дверей, все это создает ненужные потоки воздуха, переносящие микробов по лаборатории.
|
|
|
4. ЗАПРЕЩАЕТСЯ ВЫНОСИТЬ ИЗ ЛАБОРАТОРИИ ИНФИЦИРОВАННЫЙ МАТЕРИАЛ. Инфицированным материалом считается все, что соприкасалось или могло соприкасаться с микробами – потенциально в лаборатории все может быть загрязнено. Поэтому все отработанные культуры и посуду обезвреживать стерилизацией и только после этого мыть. Необходимо помнить, что за распространение культур микроорганизмов предусмотрена уголовная ответственность.
5. Запрещается оставлять неубранным рабочее место. Каждый работающий в лаборатории несет персональную ответственность за чистоту рабочего места. При этом различные "аварии" на рабочем месте неминуемы, однако важно не оставлять их последствия без внимания.
Некоторые другие правила обращения с микроорганизмами Вы узнаете позднее. Однако следует предупредить об опасности работы со спиртовкой и большими количествами спирта (до 100-200 мл.), иногда наливаемого в открытые емкости. Не рекомендуется низко наклонятся к спиртовке так как пары спирта неожиданно вырвавшиеся могут обжечь лицо и волосы. Спирт, налитый в открытые емкости для стерилизации инструмента, при неаккуратном обращении может вспыхнуть. В этом случае главное сохранять самообладание и не делать резких движений, иначе опрокинутая емкость может стать причиной больших неприятностей.
|
|
|
Инфицированный материал, отработанные культуры микробов подлежат непременной стерилизации в конце работы.
Что же такое стерилизация (sterilis—бесплодный)? Каким образом можно стерилизовать тот или иной объект?
Стерилизация (обеспложивание) - полное уничтожение м.о., их спор и всего живого в питательной среде, материале, посуде, инструментах и других предметах лабораторного обихода.
МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ
ФИЗИЧЕСКИЕ ХИМИЧЕСКИЕ
Фильтрованием Растворами
Излучениями Газообразными
Высокой температурой веществами
МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ ВЫСОКОЙ ТЕМПЕРАТУРОЙ.
1. Прокаливание на пламени - самый быстрый и надежный метод. Этим методом стерилизуют бактериологические петли, иглы, пинцеты, предметы из стекла и другие мелкие предметы.
|
|
|
Для стерилизации обрабатываемый материал (предмет) несколько раз проводят через пламя горелки. При прокаливании происходит сгорание м.о. и их опор. Следует отметить, что прокаливание режущих предметов приводит к их порче, а стеклянные предметы часто лопаются и плавятся, что ограничивает возможность этого метода.
2. Сухим жаром. Стерилизация сухим жаром (или горячим воздухом) – проводится в сушильных шкафах (печах Пастера ). Этим методом стерилизуют пробирки, пипетки, колбы, чашки Петри, другую стеклянную посуду и металлический инструмент. Перед стерилизацией посуду хорошо моют, высушивают, закрывают ватными пробками пробирки и колбы, пипетки и чашки заворачивают в бумагу. Стерилизация проводится при 160 - 180° в течение 1 - 1,5 часов с момента достижения этой температуры.
3. Кипячение - простейший способ стерилизации игл, шприцев и хирургических инструментов. Кипячение проводят в стерилизаторах в течение 10 - 15 мин. с добавлением 1-2% раствора соды, что устраняет жесткость воды и предохраняет металлические предметы от ржавчины после кипячения. Этот метод не обеспечивает полной стерилизации, так как споры некоторых бацилл и клостридий выдерживают кипячение в течение нескольких часов.
4. Стерилизация паром под давлением. Самый эффективный в бактериологической практике способ стерилизации. Даже однократная стерилизация паром под давлением уничтожает не только вегетативные, но и споровые формы бактерий. Производится стерилизация в автоклавах под давлением. В автоклавах стерилизуют питательные среды, лабораторную посуду, отработанные культуры. Автоклав впервые введен в практику нашим соотечественником Гейденрейхом в 1884 г.
Режим работы автоклава:
| Давление | ТоС |
| 0,5 атм. | 110° - 122°С |
| 1 атм. | 121° - 122°С |
| 1,5 атм. | 127°С |
| 2 атм. | 152°С |
1. МПА, МПБ посуда: 1 атм. - 50 мин.;
2. среды, содержащие сахара: 0,5 атм. 15 - 20мин.; при более высокой температуре происходит карамелизация сахара.
5. Тиндализация. Проводится с целью уничтожения микроорганизмов в веществах, легко разрушающихся и денатурирующихся при температуре больше 60°. Прогревание проводится в водяных банях или других приборах при температуре 56 - 60°. в течение часа с 5 - 6 кратным повторением через каждые 24 часа. В интервалах между прогреваниями материал выдерживается при комнатной температуре. За это время споровые формы микробов прорастают и превращаются в вегетативные, которые погибают при повторных прогревах.
6. Пастеризация. Однократное прогревание материала в течение 1 часа при температуре 65 - 70° или 5-10 мин. при 75 - 80°. Этот метод направлен на уничтожение вегетативных форм, преимущественно патогенных м.о. Споровые же формы и многие сапрофиты сохраняются. Применяется этот метод для обеспложивания молока, пива, вина и др. продуктов. При пастеризации полностью сохраняются витамины и вкусовые качества продукта. Пастеризованные продукты долгому хранению не подлежат.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ФИЛЬТРОВАНИЕМ.
Применяется для освобождения от м.о. различных жидкостей (питательных сред и др.), которые нельзя подвергать воздействию высокой температуры. Этим методом механически отделяют микроорганизмы от субстрата.
Фильтр Зейтца - круглые асбестовые пластины, вставленные в механические держатели.
Свечи Шамберлана - небольшие полые цилиндры с определенным диаметром пор, обозначаемых номерами. Фильтрование ведется под давлением или в вакууме. Для генерации свечей их кипятят в водопроводной воде, а затем прокаливают в муфельной печи.
Мембранные фильтры - из нитроцеллюлозы (нитроклетчатки), они обозначены номерами в зависимости от диаметра пор (от 350ммк. до 1200 ммк.). Стерилизуют их кипячением в дистиллированной воде в течение 20 мин.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИЗЛУЧЕНИЯМИ.
Стерилизация УФ-лучами - применяется главным образом для стерилизации воздуха помещений. Ультрафиолетовое излучение обладает высокой повреждающей активностью, поэтому КАТЕГОРИЧЕСКИ ЗАПРЕЩАЕТСЯ НАХОДИТСЯ В ПОМЕЩЕНИИ ПРИ РАБОТАЮЩЕМ УФ ИЗЛУЧАТЕЛЕ.
Для стерилизации некоторых объектов используют и другие виды излучений: жесткое ионизирующее излучение, поток электронов и др.
ХИМИЧЕСКАЯ СТЕРИЛИЗАЦИЯ.
Химическая стерилизация основана на губительном действии химических веществ на микробы. Химические вещества применяются для уничтожения микроорганизмов в различных ситуациях: в объектах внешней среды, на рабочем месте, в помещениях. Ими стерилизуют рабочую одежду, моют руки и т.д. В случаях, когда уничтожаются патогенные микроорганизмы, говорят о дезинфекции. После дезинфекции в том или ином материале или среде могут сохраняться жизнеспособные сапрофиты Понятие «стерилизация» шире понятия «дезинфекция». Для дезинфекции применяют: 3 - 5 % раствор фенола, 0,5 - 2 % раствор формалина, 10% р-р хлорной извести, 0,5 - 5% р-р хлорамина, р-р йода, сулемы, (дезинфицируют столы в операционных) и др. Для консервирования вакцин и лечебных сывороток пользуются фенолом (0, 25—5%), формалином (0, 05%), хлороформом (0, 5%). Глицерин, борную кислоту и толуол употребляют для консервирования агглютинирующих сывороток. Предметы, зараженные патогенными микробами ми, во время лабораторной работы дезинфицируются 3% раствором перекиси водорода с моющим средством, 1% раствором сулемы, 3% раствором фенола, 2,5% раствором крезола, 1—3% раствором хлорамина, 1 % осветленным раствором хлорной извести и 700 спиртом, а выделения больных (кал, мокрота и др.) — сухой хлорной известью (200 г на 1 л выделений)
ПОДГОТОВКА ПОСУДЫ, ИНСТРУМЕНТОВ, ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО РАСТВОРА. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ВАТНЫХ ПРОБОК.
Посуда. Приготовленные среды разливают в стеклянную посуду (матрацы, флаконы, пробирки и т. д.). Бывшую в потреблении посуду стерилизуют, моют теплой водой с помощью ерша или щетки, после чего ополаскивают 2—3 раза дистиллированной водой и сушат. Если посуда с трудом поддается обычному мытью, ее обрабатывают в течение 30 минут хромовой смесью (на 1 л воды 50 г двухромовокислого калия, 100 г технической серной кислоты), хорошо промывая после этого водой и сушат. Посуду со следами агара, желатины и других питательных сред можно замачивать за сутки перед мытьем в растворе щелока. Для обесцвечивания не отмывшейся краски употребляют 3% раствор хлорной извести.
Посуду, применяемую для питательных сред, нельзя использовать для дезинфицирующих веществ. Примесь последних делает питательную среду негодной.
Сушить посуду следует или в сушильном шкафу, или в комнате-сушилке с температурой до 50° и хорошей вентиляцией.
Ватные пробки. Сухие пробирки, колбы, флаконы, бутыли перед стерилизацией закрывают ватными пробками, которые готовят следующим образом. Кладут на стол продолговатую четырехугольную пластинку ваты соответствующей величины, загибают внутрь все четыре края (рис.1) так, чтобы получилась ленточка, по ширине равная длине пробки, и скатывают валик по диаметру пробирки или колбы. Ватную пробку можно обертывать кусочком марли в один слой. Края марли связывают снаружи над пробкой ниткой.
Пастеровские пипетки. Стеклянную трубку диаметром 5—6 мм вносят в пламя горелки, нагревают до размягчения стекла и, вынув из пламени, аккуратно растягивают концы трубки в разные стороны.
Микробиологические петли. Берут отрезок платиновой или нихромовой проволоки (10—12 см. длиной) и при помощи пинцета на одном конце делают петлю диаметром 4-5 мм. Затем один конец стеклянной палочки сильно расплавляют на большом огне и к нему припаивают заготовленную вышеуказанным образом проволоку. Вместо стеклянной палочки часто используют специальный держатель. Стерилизуют непосредственно перед работой в пламени горелки.
Стеклянный шпатель. Стеклянную палочку необходимой толщины вводят в пламя горелки, нагревают до размягчения, конец обжимают предварительно нагретыми плоскогубцами, сгибают два раза, образуя треугольник. Стерилизуют перед работой в пламени горелки.
Физиологический раствор. На 1 л дистиллированной воды берут 8,5 г поваренной соли, растворяют и фильтруют через бумажный фильтр. Затем разливают во флаконы и стерилизуют автоклавированием.
Пробирки, колбы, матрацы и другие емкости для культивирования микробов, перед стерилизацией закрывают ватными пробками, а иногда дополнительно заворачивают в бумагу.
Чашки Петри заворачивают в бумагу по одной или помещают в большую закрывающуюся емкость и автоклавируют.
Пипетки. В микробиологической лаборатории широко пользуются пипетками. Пипетки бывают пастеровские и градуированные. Первые не имеют делений, и расчет жидкости при работе с ними ведется на капли; вторые имеют деления, и количество вытекающей из них жидкости определяется более точно. Отсчитывание измеряемой жидкости производится по делениям сверху вниз (так, например, если нужно градуированной пипеткой в 5 мл отмерить 3,5 мл, то набирают жидкость до 0, а затем выливают до 3,5).
При подготовке к стерилизации в верхний, широкий конец пипетки вкладывают кусочек ватки, которая в дальнейшем будет служить фильтром в случае вытекания суспензии из пипетки в грушу. Пипетки заворачивают в бумагу или помещают в закрываемый цилиндр. После работы пипетки погружают в стерилизующий раствор на 2-3 см. выше уровня насасывания бактериальной суспензии.
МЕТОДЫ ВЗЯТИЯ ПРОБ
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 123; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!