Принцип реакции геммагглютинации ( РГА) - основан на способности вирусов гриппа и парагриппа агглютинировать (склеивать) эритроциты многих животных и человека.
ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ
МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
БЕЛГОРОДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
Кафедра медико-профилактических дисциплин
МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ
К практическим занятиям по курсу
« Микробиология, вирусология, иммунология»
Для студентов 3 курса по специальности 060105.65 «Стоматология»
Тема: «Иммунологические реакции»
Г. Белгород,
Год
Иммунодиагностические реакции (реакции антиген — антитело)
Цель занятия: изучить иммунодиагностические реакции (реакции антиген- антитело) в различных модификациях. Освоить навыки постановки реакций самостоятельно, уметь правильно прочитать результаты реакции, записать протокол постановки.
Иммунные реакции используют при диагностических и иммунологических исследованиях у больных и здоровых людей. С этой целью применяют серологические методы (от лат. serum — сыворотка и logos — учение), т.е. методы изучения антител и антигенов с помощью реакций антиген — антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма. Обнаружение в сыворотке крови больного антител против антигенов возбудителя позволяет поставить диагноз болезни.
Реакции иммунной сыворотки (серологические реакции).
Взаимодействие антигена с антителом проявляется в форме различных иммунологических, или серологических реакций. В связи с их высокой чувствительностью и специфичностью они нашли широкое диагностическое применение.
|
|
|
Серологические реакции применяют с одинаковым успехом для двух целей.
Во-первых, по известному антигену (диагностикуму) определяют в исследуемой сыворотке наличие и количественное содержание специфических к данному антигену антител. Последнее устанавливают путем титрования сыворотки. Титром иммунной сыворотки называют то ее максимальное разведение, которое еще дает положительную реакцию.
Во-вторых, с помощью известного антитела, т.е. диагностической иммунной сыворотки, определяют наличие в исследуемом материале специфического антигена или осуществляют серологическую идентификацию выделенного возбудителя.
С диагностической целью используют следующие серологические реакции:
1. Реакция агглютинации в ее различных вариантах
2. Реакция преципитации и ее различные модификации
3. Реакции иммунофлуоресценции (РИФ) в прямом и непрямом вариантах.
4. Реакции, протекающие с участием комплемента
5. Реакции иммуносорбентного анализа твердой фазы.
6. Реакции нейтрализации биологической активности возбудителя.
РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ (РА)
|
|
|
Агглютинация (от лат. agglutinacio-склеивание) - склеивание (соединение) антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината). Различают реакцию агглютинации прямую -при которой во взаимодействие со специфическими антителами непосредственно участвуют собственные антигены бактериальной или другой клетки, например эритроцитов, и непрямую, или пассивную , при которой бактериальные клетки или эритроциты являются носителями не собственных, а сорбированных на них чужих антигенов( или антител) для выявления специфических к ним антител ( или антигенов).Реакцию агглютинации ставят на стеклянных пластинках или пробирках. Для постановки реакции вносят в лунки (пробирки) вносят разведенную 0,85% -ным раствором NaCl сыворотку и равный объем суспензии стандартного диагностикума. Учет результатов реакции агглютинации проводят через 2 часа инкубации при 37 градусах. Оценку осуществляют по четырехкрестной системе. Реакция обязательно сопровождается контролем сыворотки и контролем антигена.
Классическая реакция агглютинации предусматривает использование корпускулярных антигенов. Однако в ней могут участвовать и растворимые антигены. Чтобы это стало возможным, такие антигены адсорбируют на иммунологически инертных частицах. В качестве носителя наиболее часто применяют в настоящее время эритроциты человека или животных. Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизированныными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они участвуют - реакцией непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА), так как эритроциты участвуют в ней пассивно.
|
|
|
РПГА ставится в специальных полистироловых пластинах с луночками с полусферическим дном. При использовании реакции для серологической диагностики готовят двукратные разведения в физрастворе исследуемой сыворотки и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизируемых эритроцитов. Учет через 2 часа после инкубации при 37 град. по 4-х крестной системе. При положительной реакции агглютинировавшие эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, осадок выглядит в виде маленького "диска " в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА является последнее ее разведение, которое дает еще ярко выраженную геммагглютинацию без значительных признаков наличия " диска".
|
|
|
РПГА может применяться также в качестве ускоренного метода диагностики для обнаружения в исследуемом материале неизвестных бактерий, вирусов. При таком варианте постановки в роли известного компонента реакции используют эритроциты адсорбировавшие известные по своей специфичности антитела- антительный эритроцитарный диагностикум. Если исследуемый материал содержит достаточное количество антиген, РПГА будет положительная.
Вариантами использования РПГА являются реакция нейтрализации антигена (РНАг), реакция нейтрализации антител (РНАт), реакция торможения пассивной геммагглютинации (РТПГА). Для этих реакций используют антигенные и антительные эритроцитарные диагностикумы.
Принцип реакции геммагглютинации ( РГА) - основан на способности вирусов гриппа и парагриппа агглютинировать (склеивать) эритроциты многих животных и человека.
Дата добавления: 2019-07-17; просмотров: 95; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!