Альтернативные методы определения гаптенов
Меченый антиген. Ловгреи описал конкурентный метод определения прогестерона в периферической плазме с помощью нового конъюгата прогестерон-EDTA-Eu. В этом методе используется строго ограниченное количество иммобилизованных на твердой фазе антител, полученных к конъюгату 11а-сукцинил-про-гестерона с БСА.
Меченые антитела. Предложено несколько подходов к разработке иммунометрических методов определения гаптенов.
На рис.8 представлена схема одного из них, включающего несколько стадий неравновесных односайтовых анализов. В соответствующей методике применены моноклональные антитела, меченные аминофенил-EDTA-Eu, и избыток конъюгата 11-сукцинил-прогестерона с тироглобулином быка, иммобилизованного на поверхности пластиковых вкладышей. Вкладыши помещают в лунки стрипов микротитровальных планшетов. Метку измеряют в "свободной" фракции антигена на вкладыше после промывки и удаления остатков биологических образцов. В предварительных экспериментах достигнуты большая чувствительность и лучшая точность, чем в конкурентных методах иммуноанализа.
Перспективы развития флуоресцентного иммуноанализа с временным разрешением
Разработка новых методов иммуноанализа. Разработка новых исследовательских методов иммуноанализа затруднена из-за недоступности соответствующего реагента для введения метки. Такие реагенты очень стабильны, а методы получения конъюгатов с использованием этих реагентов очень просты. Выпуск таких реагентов в промышленном масштабе значительно ускорит внедрение методов;: флуоресцентного иммуноанализа с временным разрешением и разработку новых исследовательских методов иммуноанализа.
|
|
|
Скрининг
Клинические анализы. Аренде и Норгаард-Педерсен изучали возможность применения метода DELFIA для скрининга конгенитального пшотироидизма путем измерения уровня TSH в пятнах крови на фильтровальной бумаге с точки зрения возможности применения в клинической практике н в сравнении с методом РИА. Анализ 19 проб крови новорожденных с конгенитальным гипотироидизмом дал положительные результаты как в DELEIA, так и в РИА. Анализ 3944 проб двумя методами позволил обнаружить конгенитальный гипотироидизм в одной пробе. Как показали повторные анализы, метод DELFIA реже дает ложные положительные результаты и характеризуется лучшей воспроизводимостью как в одном анализе, так и между анализами.
Моноклональные антитела. Доступность антимышиных IgG, меченных европием, позволила разработать простые методики скрининга клонов, продуцирующих антитела. Метод DELFIA дополняет существующие иммуноферментные методы скрининга моноклональных антител.
|
|
|
Внелабораторные анализы. Ощущается необходимость разработки и создания специальных приборов для каждой сферы применения флуоресценции с временным разрешением. Должны выпускаться автоматические флуориметры двух типов. Приборы первого типа должны быть простыми, надежными, способными работать на сухих элементах питания. В будущем приборы этого типа, как и соответствующие реагенты, должны использоваться и в больницах, и на дому. Такой прибор позволит осуществить довольно сложные клинические анализы, например, непосредственно в операционной или на дому, где он даст возможность самим больным контролировать ход лечения. Приборы второго типа должны обеспечивать оценку профилей определяемых веществ на соответствующих стрипах микропланшетов или дисках.
Безразделительные анализы. Куо и др. описали применение конъюгата производного хелата тербия с Антигеном, полученного с помощью бифункционального хелатирующего агента 1 - EDTА. Интенсивность флуоресценции измеряли непосредственно в супернатантной жидкости, содержащей биологический материал, без добавления усиливающего реагента. Недостатком этой методики является ее невысокая чувствительность. Этот недостаток можно преодолеть за счет более эффективных меток. Флуоресцентные метки такого типа могут содействовать созданию безразделительных методов, основанных на принципе усиления или гашения флуоресценции антителами.
|
|
|
Одновременные анализы. На рис.9 представлены спектры эмиссии европия и тербия. Максимумы эмиссии этих лантанидов расположены при различных длинах волн, что создает возможность их одновременного определения с помощью соответствующих фильтров.
Бадор и др. сообщили об использование вропия и самария в флуоресцентном иммунометрическом анализе с временным разрешением для определения FSH. Можно надеяться, что вскоре будут созданы методы одновременного определения нескольких веществ с помощью антител, меченных хелатами различных лантанидов.
Пути повышения чувствительности анализов. Джексон и Экинс теоретически показали, что максимальную чувствительность обеспечивают неконкурентные методы иммуноанализа и что наиболее перспективно в настоящее время для этих целей применение флуоресценции с временным разрешением. Для этого в свою очередь необходимы метки с максимальной удельной активностью и методы иммуноанализа, обеспечивающие минимальную фоновую флуоресценцию.
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 131; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!