Приготовление материала для инокуляции и посев
Для приготовления инокулята используют 18 – 20-ти часовую агаровую или 5 – 6-ти часовую бульонную культуру исследуемого микроорганизма. Суспензию из агаровой культуры или бульонную культуру доводят до мутности стандарта 0.5 McFarland и разводят еще в 10 раз изотоническим раствором хлорида натрия (конечная концентрация 1 – 2 х 107 КОЕ/мл). Для стандартизации суспензии возможно также использовать спектрофотометр, руководствуясь паспортными данными прибора или инструкцией по его применению.
Приготовленный таким образом инокулят наносят в количестве 1 – 2 мл на поверхность чашки Петри с питательной средой, равномерно распределяют по поверхности покачиванием и удаляют избыток жидкости пипеткой. Приоткрытые чашки подсушивают при комнатной температуре в течение 10 – 15 мин.
Однако более практичным способом инокуляции является использование коммерческих стерильных ватных тампонов. Тампон необходимо погрузить в суспензию микроорганизма, избыток влаги удаляют отжимая тампон о стенку пробирки. Инокуляцию на поверхность агаровой среды проводят штриховыми движениями, периодически поворачивая чашку Петри на 60°.
Аппликация дисков
Разместить диски с соответствующими антибиотиками на поверхности агара, выдерживая расстоянии 15 мм от края чашки и не менее 30 мм между дисками.
Расстояние между центрами дисков (30 мм) позволяет обычно избегать интерференции между антибиотиками, но иногда в антибиограмме может быть обнаружен синергизм или антагонизм. Так, расположенные на расстоянии больше 60 мм между центрами, диски с триметопримом и с сульфамидом определяют чувствительность каждый к своему препарату. При расположении их на более близком расстоянии наблюдается эффект синергизма при слиянии зон просветления. Синергизм (несимметричные зоны) могут также наблюдаться в случае устойчивости к одному или другому из компонентов.
|
|
|
Для обеспечения хорошей постоянной диффузии антибиотика плотно прижать каждый диск к поверхности агара.
Оптимизировать стадию аппликации можно с помощью диспенсеров (распределителей дисков), которые выпускают различные микробиологические фирмы.
Оценка результатов
После окончания инкубации чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет настольной лампы падал на них под углом в 45° (учет в отраженном свете). Диаметр зон задержки роста с учетом диаметра самого диска измеряют с точностью до 1 мм, предпочтительнее пользоваться штангенциркулем или кронциркулем. При измерении зон задержки роста следует ориентироваться на полную ингибицию видимого роста. Не следует обращать внимания на очень мелкие колонии, выявляемые в пределах зоны задержки роста только при особых условиях освещения или увеличении, и едва заметный налет у края зоны. Крупные колонии, выявляемые в пределах четкой зоны ингибиции роста, свидетельствуют о наличии посторонней микрофлоры или о гетерорезистентности популяции, в этом случае необходима повторная идентификация и повторение исследования на антибиотикорезистентность.
|
|
|
При оценке антибиотикорезистентности роящихся штаммов протея, зона задержки роста может быть затянута тонкой вуалеобразной пленкой, которая не мешает установлению границы зоны.
При оценке резистентности к сульфаниламидам и их комбинации с триметопримом границу зоны ингибиции роста следует учитывать на уровне ингибиции роста на 80%. Это связано с тем, что под действием этих препаратов перед полной ингибицией роста возможно завершение 1 – 2-х циклов пролиферации микроорганизма.
В отличие от описанного выше метода учета результатов, при оценке антибиотикорезистентности стафилококков в отношении оксациллина необходимо учитывать и самые мелкие колонии, выявляемые в пределах четкой зоны ингибиции роста.
Для интерпретации полученных результатов используют таблицы, в которых приведены пограничные значения зон ингибиции роста, позволяющие отнести исследуемую культуру микроорганизма к одной из трех категорий: “чувствительный”, “промежуточный”, “устойчивый”.
|
|
|
1. При отнесении штамма к категории “чувствительный” предполагается, что лечение инфекционной болезни, вызванной данным микроорганизмом, соответствующим антибиотиком в обычных терапевтических дозах будет, скорее всего, успешным.
2. При отнесении штамма к категории “промежуточный” предполагается, что лечение инфекционной болезни, вызванной данным микроорганизмом, соответствующим антибиотиком может быть успешным лишь при использовании повышенных доз препарата или при локализации инфекции в тех локусах человеческого организма,где антибиотик способен концентрироваться в силу его фармакокинетических особенностей (моча).
3. При отнесении штамма к категории “резистентный” предполагается, что лечение инфекционной болезни, вызванной данным микроорганизмом, соответствующим антибиотиком даже в повышенных дозах будет, скорее всего, неудачным.
Поскольку диаметр зоны ингибиции роста исследуемого микроорганизма, получаемый при постановке диско-диффузионного метода в определенных пределах жестко связан с величиной МПК антибиотика, каждому пороговому значению МПК соответствует определенная пороговая величина диаметра зоны ингибиции роста.
|
|
|
Однако в некоторых случаях корреляции между величиной МПК и диаметром зоны ингибиции роста не наблюдается (бета-лактамные антибиотики и пневмококки), в такой ситуации для оценки чувствительности необходимо использовать метод серийных разведений, диско-диффузионный метод не приемлем.
Необходимо обратить внимание на то, что для различных микроорганизмов критерии чувствительности к одним и тем же антибиотикам могут различаются.
Дата добавления: 2019-02-26; просмотров: 714; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!