Сравнительное действие ферментов
И небиологических катализаторов
Ферменты в отличие от небиологических катализаторов (металлы, кислоты и т.д.) обладают высокой эффективностью катализа, специфичностью действия, способностью ускорять реакции в мягких условиях.
Работа 19. Сравнение действия α-амилазы слюны и соляной кислоты
на реакцию гидролиза крахмала
Реактивы. Крахмал, 1%-ный раствор в 0,3%-ном растворе хлорида натрия, свежеприготовленный; раствор иода в иодиде калия*; реактив Фелинга*; пероксид водорода, 10%-ный раствор.
Оборудование. Штатив с пробирками; воронка с ватой; стеклянные палочки; глазные пипетки; водяная баня с термометром; пипетки вместимостью 5 мл.
Материал.
1. Разбавленная слюна. Для ее получения промывают рот водой от остатков пищи. Набирают в рот порцию дистиллированной воды около 20 мл и держат ее примерно 2 мин, смешивая языком со слюной. Жидкость со слюной выпускают в стаканчик и профильтровывают через вату в пробирку. Фильтрат используют для работы.
2. Соляная кислота, 10%-ный раствор.
Метод основан на изучении скорости гидролиза крахмала, определяемого по убыли субстрата (крахмал) реакцией с раствором иода или по приросту продукта (мальтоза), выявляемого реакцией Фелинга (образование красного осадка оксида меди). Реагентом на крахмал и декстрины служит иод, образующий с ними окрашенные комплексные соединения (табл.6). Амилоза крахмала при этом дает с иодом комплекс синего цвета, гликоген – красно-бурого, а декстрины в зависимости от молекулярной массы окрашиваются в красно-бурый или желтоватый цвет. Последний обусловлен не образованием комплекса, а находящимся в среде иодом.
|
|
|
Мальтоза как восстанавливающий дисахарид выявляется реакцией Фелинга, которая основана на способности углеводов в щелочной среде восстанавливать ионы Cu2+, содержащиеся в жидкости Фелинга в виде комплексного соединения с тартратами, до оксида меди красного цвета, выпадающего в осадок.
Таблица 6. Проба с иодом на крахмал и продукты его гидролиза
| Крахмал и продукты его гидролиза | Окрашивание с иодом |
| Крахмал | Синее |
| Амилодекстрины | Фиолетовое |
| Эритродекстрины | Красное |
| Ахродекстрины | Желтое (окраска раствора иода) или бесцветное |
| Мальтодекстрины | То же |
| Мальтоза | То же |
Чем выше скорость катализа, тем быстрее исчезает (положительная иод-крахмальная проба) синее окрашивание и усиливается реакция Фелинга на мальтозу.
Ход определения. Берут три пробирки: в первую вносят 1 мл воды, во вторую – 1 мл раствора соляной кислоты, в третью – 1 мл разбавленной слюны. Добавляют во все пробы по 5 мл раствора крахмала, перемешивают их стеклянной палочкой и ставят первую и третью пробирки в водяную баню при 38˚С, а вторую – в кипящую водяную баню. Через 15 мин пробирки охлаждают. Из каждой пробирки отбирают по 5 капель в другие пробирки, добавляют по 1-2 капли раствора иода и сравнивают окрашивание проб.
|
|
|
Для определения мальтозы отбирают по 3 мл из каждой пробирки, прибавляют по 1 мл реактива Фелинга и нагревают верхний слой смеси до кипения. Отмечают появление в пробах красного осадка оксида меди (I).
Оформление работы. Результаты заносят в таблицу.
| Катализатор | Субстрат реакции | Продукт реакции | Выявление | Результат | |
| субстратов | продуктов | ||||
В выводах указать разницу в действии катализаторов на скорость гидролиза крахмала.
Выявление ферментов, относящихся к разным классам
Все ферменты в зависимости от типа катализируемых химических реакций делятся на шесть классов: оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы (синтетазы). Внутри каждого класса ферменты подразделяются на подклассы, подподклассы, которые уточняют природу ферментативной реакции (номенклатуру и систему нумерации ферментов см. учебник, с.125-129).
|
|
|
Для обнаружения ферментов каждого класса в биологическом материале имеются свои особенности, поэтому необходимо определить условия для протекания ферментативной реакции. Качественные реакции на ферменты используются в клинике для обнаружения ферментов в мазках крови, биоптатах и микропрепаратах при энзимоцитохимических исследованиях, а также в гигиенической практике при постановке проб на присутствие ферментов в продуктах питания (молоко, картофель и т.д.). При разделении ферментов методом электрофореза их идентификацию также производят с помощью качественных реакций.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 428; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!