Количественное определение каталазы крови
Принцип: _______________________________________________________________________________________________________________
| Пробы (в стаканчиках) | Разведенная кровь 1: 1000 | Дист. вода | Н2О2 1% раствор | Н2SО4 10% р-р | Экспозиция | Н2О2 1% раствор | Н2SО4 10% р-р | Кол-во 0,1 М р-ра KMnO4 в мл, пошедшего на титрование | Каталазное число (КЧ)=(А-В)*1,7 = ? мг |
| Опыт | 1 мл | 7 мл | 2 мл | - | 30 мин. при комн. темпер. | - | 5 мл | В=? |
КЧ=______________
|
| Контроль | 1 мл | 7 мл | - | 5 мл | 2 мл | - | А=? |
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________
В норме каталазное число = 10-15.
Таблица 2
Обнаружение дегидрогеназ цикла Кребса
Принцип: _______________________________________________________________________________________________________________
| № пробы | Мышечная ткань | 3% р-р цитрата натрия | 3% р-р сукцината натрия | 20% р-р сульфосалициловой кислоты | 0,002% р-р метиленовой сини | Вазелиновое масло | Инкубация при 37°С | Окрашивание раствора |
| №1 | На конце шпателя | 10 кап. | - | - | 10 кап. | 10 кап. | 30 мин | ? |
| №2 | На конце шпателя | - | 10 кап. | - | 10 кап. | 10 кап. | 30 мин | ? |
| №3 | На конце шпателя | - | - | 10 кап. | 10 кап. | 10 кап. | 30 мин | ? |
Вывод:______________________________________________________________
Подпись преподавателя __________________
«___»_________20____ г.
Занятие № 14 Тема: Биологическое окисление. Исследование действия полифенолоксидазы. Определение активности пероксидазы.
|
|
|
Цель: изучить строение и функционирование митохондриальной дыхательной цепи ферментов. Механизм окислительного фосфорилирования, процесс свободнорадикального окисления. Научиться определять количественно активность пероксидазы в растительном сырье и обнаруживать действие полифенолоксидазы (качественная реакция).
Вопросы для обсуждения.
1. Понятие тканевого дыхания.
2. Определение первичного субстрата биологического окисления.
3. Особенности строения цепи дыхательных ферментов в митохондриях.
4. Механизм сопряжения фосфорилирования АДФ с окислительным процессом в дыхательной цепи.
5. Хемоосмотическая гипотеза сопряжения фосфорилирования и окисления.
6. Характеристика оксидазного и оксигеназного типов окисления.
7. Характеристика свободнорадикального окисления и его роль в развитии патологических состояний.
8. Роль антиоксидантов и их использование в качестве лекарственных препаратов.
Выполняемая работа.
Работа № 1. Определение активности пероксидазы в растительном материале.
Работа № 2. Исследование действия полифенолоксидазы.
Полифенолоксидаза ускоряет реакцию окисления фенолов (например, адреналина) в присутствии кислорода. Активность полифенолоксидазы обнаруживают по изменению окраски раствора за счет образования продуктов окисления адреналина.
|
|
|
Ход работы:
Для получения ферментного препарата полифенолоксидазы сырой картофельный клубень очищают от кожуры, верхний слой клубня в количестве 2,0 г. кусочками нарезают в ступку, растирают с 10 мл дистиллированной воды и фильтруют через два слоя марли или через складчатый фильтр из бумаги. Фильтрат содержит как полифенолоксидазу, так и пероксидазу и поэтому может быть использован в работе по определению активности пероксидазы и активности полифенолоксидазы.
В 2 пробирки отмеривают по 1 мл полученного фильтрата. Содержимое первой пробирки кипятят в течение 2-х минут и затем охлаждают в струе водопроводной воды. В обе пробирки добавляют по 0,5 мл 0,1% р-ра адреналина, содержимое пробирок перемешивают для лучшего соприкосновения с воздухом и помещают в термостат. Постепенно в одной из пробирок под действием полифенолоксидазы жидкость изменяет свою окраску за счет образования продуктов окисления адреналина – вначале адренохрома, а затем типа меланина.
В пробирке, где фермент инактивирован кипячением, цвет жидкости не меняется.
|
|
|
Таблица 1
Исследование действия пероксидазы
Принцип: _____________________________________________?
| Исследуемый материал (приготовление водной вытяжки) | Фильтрат водной вытяжки | Ацетатный буфер 0,1 М р-р рН=5,4 | Р-р бензидина 0,92 г/л | Н2О2 0,03% р-р после помещения в ФЭК | Время реакции (достижение значения Е=0,25 на ФЭКе) | 
|
| 100 мг растит. материала (капуста) + 10 мл дистилл. воды, растирание в ступке, помещение в колбу и доведение водой до объема 25 мл, настаивание 10 мин, фильтрация | 2,0 мл | 2,0 мл | 2,0 мл | 2,0 мл | - | х= [с-1/кг] |
| 2,0 мл | 2,0 мл | 2,0 мл | 2,0 мл |
Вывод:___________________________________ ________________________________________________________________________
Таблица 2
Дата добавления: 2018-02-15; просмотров: 1352; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!