Питательные среды и культивирование
Исследование анаэробных микроорганизмов осуществляется в несколько этапов. Общая схема выделения и идентификации анаэробов представлена на рисунке 1.
Важным фактором развития анаэробной бактериологии является наличие коллекции типовых штаммов бактерий, включая референсштаммы из коллекций АТСС, CDC, VPI. Особенно это важно для контроля питательных сред, для биохимической идентификации чистых культур и оценки активности антибактериальных препаратов. Имеется широкий спектр основных сред, которые используются для приготовления специальных питательных сред для анаэробов.
Питательные среды для анаэробов должны отвечать следующим основным требованиям: 1) удовлетворять питательным потребностям; 2) обеспечивать быстрый рост микроорганизмов; 3) быть адекватно редуцированными. Первичный посев материала осуществляется на чашки с кровяным агаром или элективные среды, приведенные в таблице 7.
Все чаще выделение облигатных анаэробов из клинического материала осуществляется на средах, которые включают селективные агенты в определенной концентрации, позволяющие выделить определенные группы анаэробов (20, 23) (таблица 8).
Длительность инкубирования и частота исследования засеянных чашек зависит от исследуемого материала и состава микрофлоры (таблица 9).
Исследуемый материал Отделяемое ран, Содержимое абсцессов, Трахеобронхональный аспират и др. Транспортировка в лабораторию: в киприце, в специальной транспортной среде (немедленное помещение материала в среду) Микроскопия материала Окраска по Граму | Культивирование и выделение чистой культуры Аэробные чашки для 35±2°С сравнения с 18- 28 часов анаэробами 5-10 % С02 1. Кровяной агар Микроаэростат Газ-Пак (Н2 + С02) 35±2°С от 48 ч до 7 днейми 2. Кровяной агар Шедлера 35±2°С от 48 ч до 7 дней 3. Селективная среда для эдентификации анаэробов от 48 ч до 2-х недель 4. Жидкая среда (тиогликолевая) | Идентифика-ция . Чистые культуры из изолированных колонии 1.Окраска по Граму и Ожешко для выявлления спор 2.Морфология колоний 3.Связь типа колонии с кислородом 4.Предварительная дифференциация по чувствительности к антимикробным препаратам 5.Биохимические тесты Определение чувствительности к антибиотикам 1.Метод разведения в агаре или бульоне 2.Метод бумажных дисков (диффузии) |
Рис. 1. Выделение и идентификация анаэробных микроорганизмов
|
|
|
|
Т а б л и ц а 7. Среды рекомендуемые для первичного выделения
Анаэробных микроорганизмов
Среда | Назначение |
Кровяной агар для бруцелл (CDC анаэробный кровяной агар, кровяной агар Шэдлера) (BRU agar) | Неселективная, для выделения анаэробов, присутствующих в материале |
Желчно-эскулиновый агар для бактероидов (ВВЕ agar) | Селективная и дифференциальная; для выделения бактерий группы Bacteroides fragilis |
Канамицин-ванкомицин кровяной агар (KVLB) | Селективная для большинства неспорообразующих грамотрицательных бактерий |
Фенил-этиловый агар (PEA) | Ингибирует рост протея и других энтеробактерий; стимулирует рост грамположительных и грамотрицательных анаэробов |
Тиогликолевый бульон (THIO) | Для специальных ситуаций |
Желточный агар (EYA) | Для выделения клостридий |
Циклосерин-цефокситин-фруктозный агар (CCFA) или циклосеринманнитовый агар (СМА) или циклосеринманнитовый кровяной агар (СМВА) | Селективная для С. difficile |
Кристалл-виолет-эритромици-новый агар (СVЕВ) | Для выделения Fusobacterium nucleatum и Leptotrichia buccalis |
Бактероид гингивалис агар (BGA) | Для выделения Porphyromonas gingivalis |
|
|
Дата добавления: 2019-02-12; просмотров: 134; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!