Экстракция и выделение ДНП из тканей.
1) В ступке, охлаждаемой льдом, растирают 2 г ткани органа, затем постепенно добавляют 5 мл охлажденного 2 М раствора хлорида натрия, содержащего 0,04 % трехзамешенного цитрата натрия, и растирают в ступке еще в течение 15 мин.
2) Затем, перемешивая содержимое, постепенно, малыми порциями добавляют 50 мл охлажденного 1 М раствора хлорида натрия. Образовавшуюся гомогенную массу переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин.
3) Надосадочную жидкость после центрифугирования сливают в маленький стакан, измеряют в цилиндре объем полученного центрифугата и медленно вливают его в шестикратный объем дистиллированной воды тонкой струйкой, размешивая жидкость деревянной палочкой. Выделившиеся нити ДНП наматывают на деревянную палочку. Затем часть нитей ДНП осторожно собирают и вместе с палочкой переносят в другую пробирку.
4) Нити выделенного ДНП растворяют в 1 мл 0,4 % раствора NaOH. Полученный раствор делят на две части и ставят: 1) биуретовую реакцию (на белок); 2) реакцию с дифениламином (на ДНК).
2. Качественная реакция на белковый компонент ДНП. К 5-10 каплям раствора ДНП добавляют 10 капель 10 % раствора NaOH и по 1 капле 1 % раствора CuSO4. Раствор окрашивается в сине-фиолетовый цвет.
3. Качественная реакция на нуклеиновую кислоту в ДНП. При нагревании ДНП гидролизуются, а освободившаяся дезоксирибоза дает синее окрашивание. К раствору (15-20 капель) добавляют равный объем дифениламина, находящегося в смеси с уксусной и серной кислотами. Смесь нагревают на кипящей водяной бане 15 мин. Жидкость постепенно приобретает синюю окраску, обусловленную реакцией дифениламина с дезоксирибозой.
РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:
Дата добавления: 2016-01-04; просмотров: 19; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!