Осаждение белков высаливанием
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Высаливание – это обратимый процесс. Нейтральные соли аммония, щелочных и щелочноземельных металлов – Na2SO4, (NH4)2SO4, NaCl, MgSO4 и другие нейтрализуют заряд белковых частиц и вызывают их дегидратацию, что ведет к выпадению в осадок. Осадки можно снова растворить в воде, при этом наблюдается значительная степень восстановления свойств белков (например, ферментативной активности, антигенных свойств и т.д.). Высаливанием пользуются для разделения белковых фракций, очистки белков, получения их в кристаллическом виде.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) раствор яичного белка с хлористым натрием; 2) NaCl, кристаллический, тонко растертый порошок (в виде пудры); 3) (NH4)2SO4, кристаллический, тонко растертый порошок; 4) (NH4)2SO4, насыщенный раствор; 5) MgSO4, кристаллический, тонко растертый порошок; 6) СН3СООН, 1 %; 7) NaOH, 10 %; 8) CuSO4, 1 %; 9) пробирки, бумажные фильтры.
ХОД РАБОТЫ:
1. Осаждение сернокислым аммонием. В пробирку наливают 2-3 мл раствора белка, добавляют равный объем насыщенного раствора сернокислого аммония и перемешивают. Выпадает осадок глобулинов, альбумины остаются в растворе. Осадок отфильтровывают через бумажный фильтр.
К фильтрату добавляют тонко растертый порошок сернокислого аммония до получения насыщенного раствора (последняя порция соли уже не растворяется). Выпадает осадок альбуминов, который также отфильтровывают.
С фильтратом проделывают биуретовую реакцию. При полном осаждении белков она должна быть отрицательной.
|
|
|
2. Осаждение сернокислым магнием или хлористым натрием. В 2 пробирки наливают по 2-3 мл раствора яичного белка и добавляют (до получения насыщенного раствора) в одну пробирку порошок хлористого натрия, в другую – сернокислого магния. Через 5-6 мин. в пробирках замечается выпадение осадков (глобулины). Альбумины в нейтральных растворах солей щелочных и щелочноземельных металлов не осаждаются.
Содержимое пробирок отфильтровывают через бумажные фильтры. В фильтратах – альбумины. Фильтраты подкисляют 1 % раствором уксусной кислоты – появляются осадки альбуминов. Их отфильтровывают, а в фильтратах с помощью биуретовой реакции доказывают отсутствие белка.
РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:
Дата добавления: 2016-01-04; просмотров: 55; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!