Методы ускоренной диагностики
Наилучшим является люминесцентно-серологический метод, он дает возможность через 1,5-2 ч выявить холерных вибрионов в исследуемом материале, а также в среде после подращивания в количестве 106 микробных клеток в 1 мл. Методика изготовления мазков, обработка люминесцентной сывороткой, микроскопия и оценка результатов является общей для выявления всех видов бактерий. Она изложена в инструкции, прилагаемой к
сыворотки. С помощью метода иммобилизации вибрионов под влиянием специфической холерной 01 сыворотки можно выявить возбудителя в течение 15-20 мин при концентрации в исследуемом материале не менее чем 105 микр.тил / мл. На предметное стекло наносят 2 капли жидких испражнений, рвотных масс или верхнего слоя (пленки) из
среды накопления. Первую каплю накрывают покровным стеклом (контроль), ко второй добавляют каплю холерной 01 сыворотки (1:100), перемешивают и также накрывают покровным стеклом. Надавленные капли исследуют под фазово-контрастным микроскопом или используют темнопольный конденсор. При наличии в пробах холерных
вибрионов в первой капли видны характерное движение, во второй – иммобилизация микробных тел и их агглютинация. Для ускоренной диагностики применяют также чувствительную реакцию непрямой гемагглютинации с использованием холерного антительного эритроцитарного диагностикума.
Метод массового исследования на вибриононосительство
|
|
|
Метод массового исследования на вибриононосительство проводят во время
эпидемических вспышек холеры. Стул одновременно забирают из прямой кишки алюминиевыми петлями от 10 человек, рационально сгруппированы, и вносят их в одну колбу с 200 мл щелочной лептонной воды и 01 холерной агглютинирующие сывороткой, разведенной до половины титра. Инкубацию проводят при 37 ° С в течение 3-4 часов.
Холерные вибрионы, размножились, начинают аглютинуватись и в виде хлопьев опадают на дно колбы. При положительном результате материал забирают от каждой из 10 человек и исследуют раздельно. Такой метод дает значительную экономию питательных сред и рабочего времени бактериологов.
Серологическое исследование
Серологические исследования имеют лишь вспомогательное значение и сводятся к определению в сыворотке крови и вибрионосиив вибриоцидних антител, агглютинины и антитоксина. От больных нужно брать парные сыворотки с интервалом в 8-10 дней
(первую пробу берут на 3-5 день болезни). Наиболее чувствительной является реакция определения вибриоцидинив. Эти антитела определяются с 3-го дня заболевания в титрах 1:100-1:1000 и максимально нарастают к 10-12-го дня. При постановке реакции сначала изотоническим раствором хлорида натрия разводят комплемент 1:20 и разливают его в ряд пробирок по 0,9 мл. Затем в первую пробирку вносят 0,1 мл сыворотки больного,
|
|
|
перемешивают и последовательно переносят по 0,1 мл в разведении 10в-10, получая десятикратные разведения в объеме 0,9 мл. В каждую пробирку добавляют по 0,1 мл суспензии культуры холерного вибриона, в которой содержится 1 -2 тыс. микробных клеток. Реакцию сопровождают соответствующими контролями комплемента, сыворотки и культуры. Пробирки выдерживают при 37 ° С в течение 60 мин и делают высев из них
на секторы агара в чашках Петри, инкубируют в термостате 18-20 ч и подсчитывают количество выращенных колоний. Титром вибриоцидних антител считают максимальное разведение сыворотки, которое вызывает гибель не менее 50% вибрионов по сравнению с количеством колоний, выросших после посева из пробирки контроля комплемента.
Противохолерную и противооспенную агглютинины выявляют с помощью развернутой реакции агглютинации. Исследуемую сыворотку разводят 1% щелочной пептонной водой в объеме 1 мл от 1:10 до 1:640. Антигеном служит 3-часовая бульонная культура холерного вибриона, который выделили в данном очаге. В два ряда пробирок с розтитрованимы парными сыворотками вносят по 1 капле культуры и ставят на 60 мин в термостат при 37 ° С, потом до утра в холодильник, после чего учитывают результаты.
|
|
|
Реакцию сопровождают, как обычно, контролями сыворотки и антигена. Результат
считают ориентировочно положительным при агглютинации Первую сыворотку вразведении 1:40 и выше. Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное нарастание титра антител в реакции с другой сывороткой. Более чувствительной и специфичной считают двухкомпонентную реакцию непрямой гемагглютинации с
эритроцитарным холерным диагностикумом. Необходимые компоненты реакции и методика ее постановки в макро-и микрообъемах приведены в инструкции диагностикума.
Обязательно нужно ставить и эту реакцию методом парных сывороток. Диагностическое значение имеет хотя 4-кратный нарастание титра антител в динамике. Определение антитоксинов в сыворотке крови проводят с помощью непрямой гемагглютинации.
Исследуемую сыворотку разводят микроабо макрообьемним способом и добавляют эритроцитарный холерный энтеротоксигенными диагностикум. Диагностическим титром считают разведение сыворотки 1:160. Целесообразно исследовать парные сыворотки.
|
|
|
Исследование материалов среды
Чаще исследуют воду открытых водоемов, водопроводную воду, гидробионтов, пищевые продукты, мух, смывы с различных предметов. В исследуемую воду (две пробы по 500 мл) добавляют раствор основного пептона до 1% концентрации, инкубируют 5-8 ч при 37 ° С и исследуют поверхностную пленку так же, как и пленку с пептонной воды после
посева кала или рвотных масс. Надежные результаты получают при использовании метода фильтрации через мембранные фильтры № 2 или 3, смывы из которых после фильтрации воды засевают в щелочную пептонную воду и на селективные среды. При этом исследуют большие количества воды (1,5-2,5 л). С смыва из фильтров можно делать мазки для окраски их люминесцентной холерной сывороткой, а также ставить реакцию непрямой
гемагглютинации. От гидробионтов после их вскрытия сеют желчный пузырь, желудок икишечник (после их гомогенизации) в 1% щелочную пептонную воду и на элективные агар. Дафний и рачков растирают в ступке и засевают петлей в 1% пептонную воду.
Твердые продукты питания измельчают, растирают в ступке с физиологическим раствором хлорида натрия и засевают в количестве 10 г в 50-100 мл 1% пептонной воды и на агаровые среды. Молоко и молочные продукты, смывы с объектов окружающей среды и мух засевают в 1% пептонную воду и исследуют по обычной схеме. В различных
объектах окружающей среды могут находиться и другие представители семейства Vibrionaceae, морфологически подобные вибрионов. Особенно это касается родов Aeromonas, Pseudomonas и Plesiomonas. Отличить их от холерных и холероподобных вибрионов можно, в основном, по биохимическим тестам. Для видовой идентификации холерных вибрионов ведущими тестами является агглютинация культуры 01 холерной
сывороткой, лизис холерным фагом СIV или eltor 2
Профилактика и лечение
Основные средства борьбы с холерой - раннее выявление больных и вибрионосителей, а также лиц, контактировавших с ними с последующей их изоляцией. Для вакцинопрофилактики используют несколько видов вакцин: корпускулярная убитая, холероген-анатоксин, живая для перорального применения. В нашей стране массовая вакцинация не проводится.
Контрольные вопросы для закрепления:
1. Систематика возбудителя.
2. Морфологические, культуральные и биохимические свойства.
3. Пути передачи, патогенез, клиника и профилактика холеры.
4. Методы м/б диагностики холеры.
Основная литература по микробиологии:
1. Воробьев А.А. Медицинская и санитарная микробиология. – МИА, 2003
2. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. – МИА, 2007
3. Жукова М.В., Нестеренко Н.В. Курс лекций по микробиологии. Учебное пособие. - КМФК, 2004
4. Тестовые задания по микробиологии с основами эпидемиологии и методами исследований для студентов отделения «Лабораторная диагностика» - КМФК, 2003
Дополнительные источники по микробиологии:
1.Воробьев А.А. Атлас по медицинской микробиологии. – МИА, 2007
2.Камышева К.С. Микробиология, основы эпидемиологии и методы
микробиологических исследований. – Феникс, 2010
3.Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. – Феникс, 2009
4.Мартинчик А.Н. Микробиология, физиология питания, санитария. – Academia, 2010
5.Поздеев О.К. Медицинская микробиология. – ГЭОТАР-Медиа, 2008
6.Поляк М.С., Сухаревич В.И., Сухаревич М.Э. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. – Элби, 2008
7.Шлегель Г.Г. История микробиологии. – М.: изд-во УРСС, 2002
8.Микробиология (Электронный ресурс).URL:
http://window.edu.ru/window/library
9.Медицинская библиотека (Электронный ресурс).URL:
http://www.booksmed.com/biologiya/
Дата добавления: 2022-06-11; просмотров: 19; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!