Методы культивирования вирусов
Культивирование вирусов. Путем заражения лабораторных животных. Путем заражения куриных эмбрионов. Путем заражения клеточных культур, которые получают из нормальных или злокачественных клеток человека, или животных. Виды клеточных колоний: полуперевиваемые перевиваемые. ПРОДОЛЖЕНИЕ В 36 ВОПРОСЕ
Культуры клеток, их виды
Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и лабораторных животных. Наиболее широкое применение нашли однослойные культуры трипсинизированных клеток, а также перевиваемые клеточные линии, которые получают из различных органов и тканей животных и человека. Для поддержания их жизнедеятельности используют питательные среды (среда 199, Игла и др.), содержащие полный набор веществ, необходимых для роста клеток вне организма (аминокислоты, углеводы, витамины и др.), а также определенный солевой состав и рН. Первично-трипсинизированные культуры клеток готовят из эмбриональных тканей человека, кур, мышей, овец, свиней, кроликов, морских свинок и других животных, а также почечных клеток взрослых обезьян. Эмбриональные ткани обладают большей потенцией к росту, чем ткани взрослых животных. Перевиваемые культуры представляют собой штаммы клеток нормальных тканей человека, животных (СОЦ — сердце обезьян циномольгус, КК—почки кролика и др.) и тканей злокачественных опухолей. Их рост поддерживается в лабораториях путем последовательных пассажей.
|
|
|
В зараженных культурах ткани одни вирусы проявляют свое цитопатическое действие в течение нескольких дней (вирусы оспы, полиомиелита и др.), другие — спустя 1—2 нед (аденовирусы, вирусы парагриппа и др.) в зависимости от особенностей, количества вирусов и свойств клеток. Цитопатический эффект выражается в различных изменениях морфологии клеток, пикнозе ядер, образовании симпластов (гигантские многоядерные клетки), в полной деструкции монослоя. Кроме того, вирусы в зараженных клетках вызывают образование внутриклеточных включений, специфического вирусного антигена, обнаруживаемого методом иммунофлюоресценции, и др.
Для культивирования вирусов в курином эмбрионе вируссодержащий материал вводят в амниотическую, аллантоисную Полость, желточный мешок, внутривенно, в мозг, в тело эмбриона, на аллантоисную мембрану (рис. 23). Специфические поражения в куриных эмбрионах развиваются в виде очагового поражения, диффузного помутнения оболочек, отека с обильными язвами, участками некроза, кровоизлияний, пустул, пузырьков и др. (рис. 24). Эти изменения эмбриона характеризуют специфический вирусный инфекцион-ный процесс. Репродукцию вируса в курином эмбрионе обнаруживают реакцией гемагглютинации. Культивирование вирусов проводят также в организме чувствительных лабораторных животных, особенно тех вирусов, которые не репродуцируются в культурах тканей и куриных эмбрионах.
|
|
|
Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций.
При постановке диагноза инфекционной болезни, как и при диагностике любых других заболеваний, основываются на жалобах больного, анамнезе болезни, эпидемиологическом анамнезе, результатах осмотра, данных лабораторных и инструментальных исследований.
Тем не менее, необходимо учитывать, что инфекционные заболевания имеют ряд особенностей, принципиально отличающих их от других заболеваний, это:
1- Заразительность
2- Специфичность
3- Наличие инкубационного периода и циклическое развитие клинических симптомов
4- Формирование специфического инфекционного иммунитета
На основании выше перечисленных особенностей должна строиться принципиальная врачебная тактика в отношении диагностики инфекционных заболеваний на амбулаторном, догоспитальном и госпитальном этапе постановки предварительного диагноза. Эти ориентиры могут оказать значимую помощь в дифференциальной диагностике инфекционных заболеваний от неинфекционных, правильно и своевременно сориентироваться во врачебной тактике.
|
|
|
Выявить наличие особенностей возможно при грамотном сборе анамнестических данных.
Из Эпидемиологического анамнеза мы можем выяснить, присуще ли заболеванию пациента заразительность ( болеет ли в настоящий момент или в определённые сроки до настоящего времени заболеванием со схожими симптомами люди из близкого окружения); в какие сроки укладывается инкубационный период заболевания (например, сыпь при эпидемическом сыпном тифе появляется на 4-6 день болезни, а при брюшном тифе на 8-10 день);
Из анамнеза заболевания : порядок возникновения клинических симптомов заболевания ( например, при пищевых токсикоинфекциях, сначала появляется рвота, затем диарея, при холере-наоборот, диарея предшествует рвоте).
Из анамнеза жизни пациента мы можем выяснить какими заболеваниями он переболел, тем самым можем сразу исключить из дифференциально-диагностического ряда ранее перенесённые инфекционные заболевания, сформировавшие специфический иммунитет (например, детские инфекции).
После постановки предварительного диагноза определяется дальнейшая тактику обследования и проведения противоэпидемических мероприятий (изоляция больного, выявление лиц, с которыми общался больной, возможных источников возбудителя инфекции и механизма передачи возбудителя инфекции).
|
|
|
3. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА
Лабораторные исследования играют важную роль в установлении диагноза инфекционных болезней, назначении этиотропной терапии, проведении контроля за эффективностью лечения. Процесс специфической лабораторной диагностики основан на выявлении возбудителя и ответной реакции организма человека в ходе инфекционного процесса. Он состоит из трех этапов: сбора материала, транспортировки и его исследования в лаборатории. К проведению каждого этапа предъявляют определенные требования, от соблюдения которых зависит эффективность лабораторной диагностики. Задача врача заключается в правильном выборе метода исследования и грамотной оценке его результатов.
Лабораторные методы диагностики различны по чувствительности и специфичности. Чувствительность метода отражает вероятность того, что результат теста будет положительным у инфицированного пациента и определяется отношением общего числа положительных результатов к общему числу инфицированных пациентов. Чем выше чувствительность теста, тем меньше вероятность получения ложноотрицательных результатов. Критерий специфичности отражает вероятность того, что результат теста будет положительным у неинфицированного пациента, и его вычисляют как отношение общего числа отрицательных результатов к общему числу неинфицированных пациентов. Чем меньше специфичность, тем больше вероятность получения ложноположительных результатов. Оба показателя выражают в процентах.
38. Вирусы бактерий – фаги. Фаги вирулентные и умеренные, их взаимодействие с бактериальной клеткой. Профаг. Лизогения. Фаговая конверсия.
Особое значение в бактериологии имеют вирусы бактерий или бактериофаги.
Морфология.
Внешне большинство бактериофагов напоминают сперматозоиды, но встречаются и другие формы. Выделяют 5 основных типов бактериофагов в зависимости от типа нуклеиновых кислот (ДНК-содержащие и РНК-содержащие фаги), строения, типа симметрии:
Нитевидные ДНК-содержащие фаги, которые лизируют клетки бактерий, несущих F-плазмиду.
Фаги с аналогом отростка, РНК-содержащие И однонитевой ДНК-фаг.
Фаги Т3 и Т7 с коротким отростком.
Фаги с несокращающимся чехлом и 2-нитевой ДНК.
ДНК-содержащие фаги с сокращающимся чехлом отростка, заканчивающимся базальной пластиной.
Наиболее полно описаны так называемые Т-четные фаги или Т-фаг (Т- типовые).
Головка Т-фагов имеет кубический тип симметрии, довольно ригидна, состоит из белковой оболочки, построенной из отдельных субъединиц и заключенного в ней ДНКового генома, размеры головки около 100нм. Геном фагов образован спирально упакованной двойной нитью ДНК.
Отросток (хвост) Т-фагов имеет длину около 100 нм, включает полый стержень, сконструированный по типу спиральной симметрии и мократительный чехол, присоелдиняющийся к воротничку, окружающему стержень головки. Чехол образован 120-140 белковыми молекулами. В дистальном отделе стержня расположена 6-угольная базальная пластина сcharrsid15350845 По сравнению с вирусами человека бавктериофаги более устойчивы к различным физическим и химическим воздействиям. Они хорошо переносят высокие температур (50-60 С), действие дизинфицирующих средств, УФ-облучение в низких дозах.
Взаимодействие с бактериальной клеткой строго специфично, т.е. они способны инфицировать бактерии только определенного вида. Происходит в несколько этапов.
Адсорбция на бактерии происходит за счет наличия на поверхности бактериальной специфических рецепторов для бактериофага. Некоторые фаги адсорбируются на половых ворсинках. На бактериях, лишенных клеточной облочки, адсорбция не происходит.
Внедрение вирусной ДНК (инъекция фага). После адсорбции происходит расщепление фрагмента клеточной стенки лизоцимом, который содержится в капсиде фага. Одновременно в чехле высвобождаются ионы Са, активирующие АТФазу, в результате чехол сокращаектся и стержень хвоста вталкивается через цитоплазматическую мембрану в клетку. Затем вирусная ДНК впрыскивается в цитоплазму.
Репродукция фага. Происходит в 3 этапа: синтез фаговых белков, затем репликация нуклеиновых кислот, сборка фага.
Выход дочерних популяций фага. После образования потомства (10-200 из одной инфицированной частицы) клетка хозяина лизируется, высвобождая дочернюю популяцию. Это так называемый литический или продуктивный тип инфекции. Характерен для вирулентных фагов.
Существует другой тип взаимодействия, которыйназывают интегративным или интегративной инфекцией. Вызывают его умеренные фаги. В случае интегративной инфекции ДНК вируса встраивается в геном бактериальной клетки – образуется профаг. Репликация вирусной ДНК происходит вместе с бактериальной, полноценного синтеза вирусспецифических белков и НК фактически не происходит. Бактерия приобретает новые свойства – происходит лизогенная (фаговая) конверсия. Бактерии, содержащие профаг, называют лизогенными. Новые свойства бактериальной клетки: продукция экзотоксинов и адгезинов, т.е. в результате фаговой конверсии могут усилиться вирулентные свойства бактерий. При воздействии на лизогенные культуры ряда физических и химических факторов возможна так называемая индукция фага, т.е. стимуляция вирулентных свойств его и переход на литический цикл развития.
Практическое применение бактериофагов.
Фаготипирование и дифференцировка бактериальных культур.
Эпидемиологические наблюдения – определение количества бактериофагов в водоемах позволяет оценить количество патогенных бактерий.
Применение с терапевтической целью. Применяют дизентерийные, сальмонеллезные, стафилококковые бактериофаги, строго специфическое действие бактериофагов позволяет отказаться от антибиотиков в некоторых случаях, т.е. снизить побочные действия от антибиотикотерапии.
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 779; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!