Пояснения по поводу метода ПЦР
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является по сути искусственной репликаций определенной последовательности ДНК in vitro. В отличие от обычной репликации для проведения ПЦР не нужны природные РНК-затравки (праймеры), а используются заранее химически синтезированные ДНК-олигонуклеотиды, которые определяют границы реплицируемой последовательности. Обычно используется два таких олигонуклеотида-праймера, называемые «прямой» и «обратный», для репликации одной и другой нитей ДНК соответственно. Для денатурации двойной спирали используется нагрев до 950С. Это влияет на выбор ферментов для репликации – белки обычных организмов в этих условиях денатурировали бы, поэтому используются белки термофильных архей и эубактерий. Оптимальная температура для обычно используемой при ПЦР Taq-полимеразы составляет 720С. Ещё одна температура, используемая в трёхшаговом цикле ПЦР, зависит от температуры диссоциации праймеров от матрицы ДНК и обычно составляет 55-600С. В ходе одного цикла ПЦР последовательно происходит денатурация двойной спирали, связывание праймеров с матрицей (отжиг), и достройка новых нитей ДНК. Затем три этих шага повторяют (происходит следующий цикл), по итогам 30-40 циклов количество амплифицируемой ДНК в реакционной смеси возрастает на несколько порядков. Кроме праймеров и ферментов репликации в реакционной смеси должны находиться 5`-нуклеозидтрифосфаты для синтеза ДНК, буферизующие рН соли и соли катионов, стабилизирующих двунитевую структуру ДНК-матрица/праймер.
|
|
Шифр | Номер геля | Сумма баллов |
ЛИСТ ОТВЕТОВ
Задание 1. Электрофорез. 13 баллов.
Катод Анод |
Укажите стрелкой направление движения ДНК в форезной камере (1б.)
Этидий связывается с молекулой ДНК ___________________________________________ _________________________________________________________________________________(1 б.)
Исходя из спектров возбуждения и флуоресценции бромистого этидия, для проявки ДНК, окрашенной этидием, необходим источник света с длинной волны в ______________________ , либо _____________________________________ части спектра (2 б.)
Размер ПЦР-продукта вида В составляет примерно__________ п.н. (1 б.)
Размер ПЦР-продукта вида С составляет примерно__________ п.н. (1 б.)
Задание 2. ПЦР. 11 баллов.
Укажите температуры, при которых происходят отдельные последовательные этапы ПЦР (3 б.)
950С |
|
|
Подчеркните в приведенной ниже последовательности ДНК нуклеотиды, соответствующие прямому (синим цветом) и обратному (красным цветом) праймерам для амплификации этой самой последовательности (2 б.)
В определенный момент времени в реакционной смеси ПЦР находилось 10 миллионов молекул однонитевой ДНК ПЦР-продукта. Сколько двунитевых молекул ДНК образуется, если провести еще 5 циклов ПЦР, а потом охладить реакционную смесь (2б.)? _________________
Из перечисленных ниже реактивов выберите и обведите в кружок номера тех четырёх реактивов, что должны входить в состав реакционной смеси для ПЦР (4 б.)
1) Рибо-АТФ 5) хлорид железа 9) термофильная ДНК-полимераза
2) Дезоксирибо-АТФ 6) хлорид магния 10) термофильная РНК-полимераза
3) Дезоксирибо-УТФ 7) ЭДТА 11) термофильная ревертаза
4) Дезоксирибо-ЦТФ 8) глюкоза 12) термофильная хеликаза
Задание 3. Биология полиплоидов и межвидовых гибридов. 16 баллов.
Исходя из анализа данных электрофореза, является ли вид Х межвидовым гибридом? Если да, то каким образом Вы это определили?____________________________________________________ _________________________________________________________________________________ (1 б.)
|
|
Исходя из анализа данных электрофореза, является ли вид Х полиплоидом? Если да, то каким образом Вы это определили?_____________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ (1 б.)
Как называется полиплоид, образующий сбалансированные гаметы и несущий геномы трех родителей?________________________________________________________________________ (1 б.)
Как называется полиплоид, образовавшийся в результате межвидовой гибридизации и последующего удвоения числа хромосом? _____________________________________________ (1 б.)
Как называется полиплоид, образовавшийся в результате удвоения числа хромосом в соматических клетках особи? ________________________________________________________ (1 б.)
Какой растительный алкалоид используют для нарушения веретена деления клеток и последующей полиплоидизации? _____________________________________________________ (1б.)
Секвенирование ДНК вискашевой крысы Tympanoctomys barrerae, которую по причине большого числа хромосом и крупного размера генома долгое время считали тетраплоидом, показало, что это нормальное диплоидное млекопитающее. Объясните, какая особенность регуляции работы генов млекопитающих по-видимому не позволяет выжить полиплоидам?
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________(1б.)
|
|
Используя карандаши четырёх разных цветов для четырёх разных гомологичных хромосом и обозначение А о для одной хроматиды с аллелью гена А и центромерой (о), нарисуйте на схеме мейоза этапы расхождения хромосом для тетраплоида ААаа, если у него НЕ БЫЛО кроссинговера между геном А и центромерой (3 б.)
Метафаза 1 |
Метафаза 2 |
Продукты мейоза |
Какие гаметы и в каком соотношении мы будем ожидать от тетраплоида ААаа без кроссинговера? (1б.)________________________________________________________________
Метафаза 2 |
Метафаза 1 |
Продукты мейоза |
Какие гаметы и в каком соотношении мы будем ожидать от тетраплоида ААаа с полным кроссинговером между геном и центромерой? (1б.)______________________________________
От чего будет зависеть соотношение реально продуцируемых тетраплоидом гамет для разных генов? (1 б.)_____________________________________________________________
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 |
18 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 |
35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 |
52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 |
69 | 70 | 71 | 72 | 73 | 74 | 75 | 76 | 77 | 78 | 79 | 80 | 81 | 82 | 83 | 84 | 85 |
Дата добавления: 2018-06-27; просмотров: 551; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!