Пояснения по поводу метода ПЦР



Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является по сути искусственной репликаций определенной последовательности ДНК in vitro. В отличие от обычной репликации для проведения ПЦР не нужны природные РНК-затравки (праймеры), а используются заранее химически синтезированные ДНК-олигонуклеотиды, которые определяют границы реплицируемой последовательности. Обычно используется два таких олигонуклеотида-праймера, называемые «прямой» и «обратный», для репликации одной и другой нитей ДНК соответственно. Для денатурации двойной спирали используется нагрев до 950С. Это влияет на выбор ферментов для репликации – белки обычных организмов в этих условиях денатурировали бы, поэтому используются белки термофильных архей и эубактерий. Оптимальная температура для обычно используемой при ПЦР Taq-полимеразы составляет 720С. Ещё одна температура, используемая в трёхшаговом цикле ПЦР, зависит от температуры диссоциации праймеров от матрицы ДНК и обычно составляет 55-600С. В ходе одного цикла ПЦР последовательно происходит денатурация двойной спирали, связывание праймеров с матрицей (отжиг), и достройка новых нитей ДНК. Затем три этих шага повторяют (происходит следующий цикл), по итогам 30-40 циклов количество амплифицируемой ДНК в реакционной смеси возрастает на несколько порядков. Кроме праймеров и ферментов репликации в реакционной смеси должны находиться 5`-нуклеозидтрифосфаты для синтеза ДНК, буферизующие рН соли и соли катионов, стабилизирующих двунитевую структуру ДНК-матрица/праймер.

 

Шифр Номер геля Сумма баллов

ЛИСТ ОТВЕТОВ

Задание 1. Электрофорез. 13 баллов.

    Катод       Анод
Электрофорез                                          (оценивается преподавателем, максимум 6 баллов)

Укажите стрелкой направление движения ДНК  в форезной камере (1б.)

Этидий связывается с молекулой ДНК ___________________________________________ _________________________________________________________________________________(1 б.)

Исходя из спектров возбуждения и флуоресценции бромистого этидия, для проявки ДНК, окрашенной этидием, необходим источник света с длинной волны в ______________________ , либо _____________________________________ части спектра (2 б.)

 
Размер ПЦР-продукта вида А составляет примерно__________ п.н. (1 б.)

Размер ПЦР-продукта вида В составляет примерно__________ п.н. (1 б.)

Размер ПЦР-продукта вида С составляет примерно__________ п.н. (1 б.)

 

Задание 2. ПЦР. 11 баллов.

Укажите температуры, при которых происходят отдельные последовательные этапы ПЦР (3 б.)

 
 
 
 
950С

 

 


Подчеркните в приведенной ниже последовательности ДНК нуклеотиды, соответствующие прямому (синим цветом) и обратному (красным цветом) праймерам для амплификации этой самой последовательности (2 б.)

В определенный момент времени в реакционной смеси ПЦР находилось 10 миллионов молекул однонитевой ДНК ПЦР-продукта. Сколько двунитевых молекул ДНК образуется, если провести еще 5 циклов ПЦР, а потом охладить реакционную смесь (2б.)? _________________

Из перечисленных ниже реактивов выберите и обведите в кружок номера тех четырёх реактивов, что должны входить в состав реакционной смеси для ПЦР (4 б.)

1) Рибо-АТФ                        5) хлорид железа        9) термофильная ДНК-полимераза

2) Дезоксирибо-АТФ        6) хлорид магния        10) термофильная РНК-полимераза

3) Дезоксирибо-УТФ          7) ЭДТА                      11) термофильная ревертаза

4) Дезоксирибо-ЦТФ          8) глюкоза                   12) термофильная хеликаза

 

Задание 3. Биология полиплоидов и межвидовых гибридов. 16 баллов.

Исходя из анализа данных электрофореза, является ли вид Х межвидовым гибридом? Если да, то каким образом Вы это определили?____________________________________________________ _________________________________________________________________________________ (1 б.)

Исходя из анализа данных электрофореза, является ли вид Х полиплоидом? Если да, то каким образом Вы это определили?____________­_________________________________________________ _________________________________________________________________________________ (1 б.)

Как называется полиплоид, образующий сбалансированные гаметы и несущий геномы трех родителей?________________________________________________________________________ (1 б.)

Как называется полиплоид, образовавшийся в результате межвидовой гибридизации и последующего удвоения числа хромосом? _____________________________________________ (1 б.)

Как называется полиплоид, образовавшийся в результате удвоения числа хромосом в соматических клетках особи? ________________________________________________________ (1 б.)

Какой растительный алкалоид используют для нарушения веретена деления клеток и последующей полиплоидизации? _____________________________________________________ (1б.)

Секвенирование ДНК вискашевой крысы Tympanoctomys barrerae, которую по причине большого числа хромосом и крупного размера генома долгое время считали тетраплоидом, показало, что это нормальное диплоидное млекопитающее. Объясните, какая особенность регуляции работы генов млекопитающих по-видимому не позволяет выжить полиплоидам?

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________(1б.)

Используя карандаши четырёх разных цветов для четырёх разных гомологичных хромосом и обозначение     А о для одной хроматиды с аллелью гена А и центромерой (о), нарисуйте на схеме мейоза этапы расхождения хромосом для тетраплоида ААаа, если у него НЕ БЫЛО кроссинговера между геном А и центромерой (3 б.)

 
Метафаза 1
 
 
 
 
 
 
Метафаза 2
Продукты мейоза

 

 


Какие гаметы и в каком соотношении мы будем ожидать от тетраплоида ААаа без кроссинговера? (1б.)________________________________________________________________

Метафаза 2
Используя карандаши четырёх разных цветов для четырёх разных гомологичных хромосом и обозначение   А о для одной хроматиды с аллелью гена А и центромерой, нарисуйте на схеме мейоза этапы расхождения хромосом для тетраплоида ААаа, если у него в обеих парах гомологичных хромосом БЫЛ кроссинговер между геном А и центромерой (3 б.)

 
 
 
 
 
 
 
Метафаза 1
Продукты мейоза

 

 


       Какие гаметы и в каком соотношении мы будем ожидать от тетраплоида ААаа с полным кроссинговером между геном и центромерой? (1б.)______________________________________

               От чего будет зависеть соотношение реально продуцируемых тетраплоидом гамет для разных генов? (1 б.)_____________________________________________________________

 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34
35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51
52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68
69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85

 


  

  

  

  


Дата добавления: 2018-06-27; просмотров: 551; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:






Мы поможем в написании ваших работ!