Схема кислотного гідролізу похідних 1,4-бенздіазепіну
1)
хлордиазепоксид 2-аміно-5-хлорбензофенон
α-амінокислота метиламін
2)
оксазепам 2-аміно-5-хлорбензофенон
оксиамінокислота
3)
нітразепам 2-аміно-5-нітро6ензофенон
4)
диазепам 2-метиламіно-5-хлорбензофенон
ТСХ-скрннінг
I етап - у загальній системі розчинників хлороформ-диоксан-ацетон-25 % розчин аміаку (45:47,5:5:2,5), сорбент - силікагель КСК. Виявлення бензофенонів проводиться по власному жовтому забарвленню плям; по реакції утворення азобарвників (2-амінобензофенони) з β-нафтолом (оранжеві плями) або з N-α-нафтилетилендиаміном (рожево-бузкові плями). Бензофенони (Rf 0,63-0,70) із сорбенту елюють бензолом.
II етап - у окремій системі розчинників хлороформ-етанол (20:1); сорбент - основний окис алюмінію; (Rf 0,60-0,63) елюент - бензол.
Очищення від співекстрактивних домішокпроводяться методами тонкошарової хроматографії, електрофорезу, гель-хроматографії, екстракційним методом.
Для виявленнябензофенонів використовують:
Реакції забарвлення - утворення азобарвника.
2-амінобензофенон сіль диазонію
|
|
|
β-нафтол N-α-нафтилетилендиамін
(реактив Браттона-Маршалла)
оранжевий забарвлення розчину рожево-бузковий забарвлення розчину
Реакціїчутливі, не специфічні.
УФ-спектри бензофенонів - при рН < 5 λmax 265 нм; при рН > 7 λmax235,
390 нм.
Кількісна оцінкабензофенонів проводиться фотометрично у видимій області спектра, в УФ-області спектра, екстракційно-фотометричними з кислотними барвниками.
Хроматографічні методиГРХ і ВЕРХ застосовуються для ідентифікації і кількісного аналізу продуктів гідролізу похідних 1,4-бенздіазепіну в біологічних витяжках після очищення від домішок.
Ізолювання по 2 напрямкупроводитися полярними розчинниками (загальні методи). Після екстракції хлороформом бенздіазепінів і їхніх метаболітів з підкисленої і підлужної водних фаз проводять ТСХ-скринінг у загальній системі розчинників (для речовин основного характеру); проявник - реактив Драгендорфа по Муньє (оранжево-коричневі плями з Rf 0,63-0,77).
Речовини елюють розчинниками метанол-25 % розчин аміаку (9:1) і хроматографірують у приватних системах розчинників - хлороформ-етанол (20:1). Після прояву плям реактивом Драгендорфа ідентифікують нативні речовини, порівнюючи їх з «свідками» з наступним елююванням отрут (елюент - метанол-25 % розчин аміаку (9:1) і проведенням підтверджуючих досліджень.
|
|
|
Хімічні методи.
Реакції осадження. Через наявність в молекулах третинних атомів азоту похідні 1,4-бендіазепіну утворюють осади з загальноалкалоїдними осаджувальними реактивами Драгендорфа, Бушарда, пікриновою кислотою, сіллю Рейнеке й ін.
Реакції забарвленняна нативні речовини:
|
|
|
Діазепам і хлордіазепоксид з нінгидрином дають жовто-коричневе забарвлення.
Реакції забарвленняна метаболіти (продукти гідролізу) -2-аміно-бензофенони, утворені при гідролізі хлордиазепоксиду, нітразепаму, оксазепаму дають реакцію азосполучення, за винятком 2-метиламіно-бензофенону, утвореного при гідролізі диазепаму.
Фізико-хімічні методи.
УФ-спектрометрія.
В електронних спектрах похідних 1,4-бендіазепіну є 3 смуги поглинання з λmax в областях:
1. 200 - 215 нм
2. 220 - 240 нм
3. 290 - 330 нм.
Дві перші смуги відповідають збудженню ароматичних хромофорів. Третю довгохвильову смугу відносять до азометинового зв'язку, спряженого з бензогрупою.
|
|
|
За характером поглинання в Уф-області 1,4-бенздіазепіни відносяться до сполук, абсорбція яких змінюється від величини значень рН:
• в кислому середовищі – за рахунок протонування атома азоту в 1 (в хлордиазепоксиду) і 4 (1,2-дигідропохідні 1,4-бендіазепіну – нітразепам, оксазепам, діазепам);
• в лужному середовищі в молекулі 1,2-дигідропохідних 1,4-бендіазепіну спостерігається зміна хромофорної системи (збільшення сполучення за рахунок лактим-лактамної таутомерії азометинового зв'язку в положенні 1,2-нітразепам, оксазепам).
Дослідження за нативною сполукою і метаболітам дає можливість провести ідентифікацію похідних 1,4-бендіазепіну всередині групи і підтвердити результати аналізу по бензофенонам.
Дата добавления: 2018-05-09; просмотров: 558; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!