Опыт 1 Доказательство белковой природы инсулина



Биуретовая реакция

К 8-10 каплям раствора инсулина прибавляют 6-8 капель 10 %-ного раствора NaOH и 1-2-капли 1 %-ного раствора CuSO4. Появляется сине-фиолетовое или красно-фиолетовое окрашивание, указывающее на наличие пептидных связей в молекулу инсулина.

 

Реакция Фоля

К 8 - 10 каплям раствора инсулина прибавляют 10 - 12 капель 30%-ного раствора NaOH и 1-2-капли 5%-ного раствора Рb(СН3СОО)2. При длительном нагревании появляется чёрный (или бурый) осадок.

Реакция Милана

К 8-10 каплям раствора инсулина прибавляют 3-4 капли реактива Милона и осторожно нагревают. Жидкость окрашивается в красный цвет и выпадает красно-коричневый осадок.

Реакция Геллера

К 10-12 каплям концентрированной НNО3 по стенке наклонённой про­бирки прибавляют (не допуская смешивания жидкостей) раствор инсулина. На границе двух слоев жидкости образуется осадок белка в виде кольца.

Опыт 2 Обнаружение йода в препарате щитовидной железы

К половине таблетки тиреоидина (препарата, представляющего собой обезжиренную и высушенную щитовидную железу животных) прибавляют 10-12 капель концентрированной HNO3. Для проведения гидролиза содер­жимое пробирки нагревают 1-2-мин (не допуская вспенивания). После это­го в пробирку добавляют 8-10 капель 2%-ного раствора КIO3, который окисляет образовавшуюся при гидролизе йодистоводородную кислоту. По­сле охлаждения содержимое пробирки разделяют на две части и открыва­ют молекулярный йод по реакции с крахмалом (при добавлении 1-2 капель 1%-ного раствора крахмала наблюдается синее окрашивание) или экстрак­цией йода хлороформом (при приливании 1 мл хлороформа, встряхивании и отстаивании хлороформный слой окрашивается в фиолетовый цвет).

Опыт 3 Качественные реакции на адреналин.

Окисление адреналина йодатом калия

К 3-4 каплям раствора адреналина (1:1000) прибавляют 5-6-капель 2%-ного раствора КIO3 и 10 - 12 капель 10%-ного раствора СН3СООН. Жидкость слегка нагревают. Появляется красно-фиолетовое окрашивание.

Реакция с дихроматом калия

Раствор адреналина (3-4 капли) смешивают с 1-2-каплями 2%-ного раствора К2Сr2О7. Жидкость окрашивается в коричневый цвет.

Проба с йодом

10-12 капель раствора адреналина (1:1000) смешивают с 1 каплей 0,1%-ного раствора I2 в KI. При нагревании появляется розовое или красное окрашивание.

Диазореакция на адреналин

К свежеприготовленному диазореактиву (3 капли 1%-ного рас­твора сульфаниловой кислоты в 2 %-ном растворе НС1 и 3 капли рас­твора NaNO2) прибавляют 5-6 капель раствора адреналина (1:1000) и 4-5-капель 10%-ного раствора Na2CO3. Жидкость окрашивается в красный цвет.

Обнаружение группировки пирокатехина в молекуле адреналина

К 8-10 каплям раствора адреналина (1:5000) прибавляют 1 каплю 1%-ного раствора FеСl3. Содержимое пробирки окрашивается в изумруд­но-зелёный цвет. От прибавления 1 капли концентрированного рас­твора NH4OH окраска переходит в вишнёво-красную (или коричне­вую).

Опыт 4 Качественные реакции на фолликулин

Диазореакция на фолликулин

К 8-10 каплям спиртового раствора эстрона прибавляют 5-6-капель 10%-ного раствора Na2CO3 и 6- 8-капель свежеприготовлен­ного диазореактива (см. предыдущую работу). Постепенно появляется бледно-жёлтое окрашивание (вследствие образования азокрасителя).

Реакция с концентрированной серной кислотой

Пробирку с 15 - 16 каплями спиртового раствора фолликулина помещают в кипящую водяную баню на 5 - 6-мин для удаления спир­та. К оставшемуся фолликулину прибавляют 20 - 25 капель концен­трированной H2SO4 и вновь нагревают на водяной бане до появления жёлтого, а затем оранжевого окрашивания (имеющего зелёную флуо­ресценцию).

 

 

Литература

1 Проскурина, И. К. Биохимия : учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / И. К. Проскурина. - М.: ВЛАДОС-ПРЕСС, 2003. - 240 с.

2 Биологическая химия: учебник / Т. Т. Березов [и др.]. - М.: Меди­цина, 1998.-704 с.

3 Основы биохимии : учебник в 3 т. /А. Уайт [и др.]. - М.: Мир, 1981. Т. 1-Мир, 1981.-534 с. Т. 2-Мир, 1981.-617 с. Т. 3-Мир, 1981.-726 с.

4 Белясова, Н. А. Биохимия и молекулярная биология : учеб. пособие для студ. высш. учеб. заведений / Н. А. Белясова. - Мн.: Книжный Дом, 2004. - 416 с.

5 Шапиро, Д. К. Практикум по биологической химии : практикум / Д. К. Шапиро. - Мн.: Вышэйшая школа, 1972. - 256 с.

6 Комов, В. П. Биохимия : учеб. для вузов / В. П. Комов, В. Н. Шве­дова. - 3-е изд., стереотипное. - М.: Дрофа, 2008. - 640 с.


Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 1448; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:






Мы поможем в написании ваших работ!