Опыт 2 Биуретовая реакция белков

Мерным цилиндром налейте в одну пробирку 2 мл раствора яичного белка, в другую - 2 мл 1 %-ного раствора желатина. В обе пробирки добавьте по 2 мл 10 %-ного раствора NaOH и 1 -2 капли 3 %-ного раствора CuSО₄. Встряхните содержимое пробирок. Наблю­дайте появление характерного окрашивания раствора. О присутствии какой атомной группы в молекулах белка свидетельствует эта реак­ция?

Реакция обусловлена присутствием в белках пептидных связей, которые образуют окрашенные солеобразные комплексные соедине­ния.

Опыт З Ксантопротеиновая реакция белков

Мерным цилиндром в пробирку налейте 2 мл раствора белка и осторожно добавьте к нему 6-8 капель концентрированной НNО₃. Смесь нагрейте в водяной бане до появления светло-желтой окраски. Затем охладите смесь, опустив пробирку в стакан с водой. После ох­лаждения добавьте 10-12 капель 30 %-ного раствора NaOH. Желтая окраска переходит в оранжевую.

Реакция обусловлена присутствием циклических аминокислот, которые при взаимодействии с азотной кислотой образуют нитропроизводные желтого цвета

Опыт 4 Реакция Фоля на содержащие серу аминокислоты

В четыре пробирки пипеткой налейте по 2 капли раствора Рb(СН₃СОО)₂ и понемногу прибавляйте концентрированный раствор NaOH до растворения образовавшегося осадка гидроксида свинца. В первую пробирку наливают около 1 мл раствора белка, во вторую -1 мл желатины, в третью - 1 мл гликокола, в четвертую - 1 мл тиро­зина. Смесь осторожно нагревают. При положительной реакции рас­твор начинает темнеть.

Реакция обусловлена наличием в белке содержащих серу ами­нокислот, которые под действием щелочи разрушаются с образовани­ем сульфида щелочного металла; последний с плюмбитом дает осадок сульфида свинца.

Опыт 5 Реакции на триптофан

Реакции основаны на способности триптофана в кислой среде вступать во взаимодействие с альдегидами, образуя при этом окра­шенные продукты конденсации.

 

А) Реакция Адамкевича

К 5-6 каплям белка добавить 5 капель СН₃СООН (концентриро­ванной), слегка подогреть и подслоить (осторожно! по стенке накло­ненной пробирки) равный объем H₂SO₄ (концентрированной). На гра­нице двух слоев жидкости появляется красно-фиолетовое кольцо.

Взаимодействие триптофана с глиоксиловой кислотой (которая всегда присутствует в ледяной уксусной кислоте) приводит к образо­ванию соединения красно-фиолетового цвета.

Б) Реакция Шульца-Распайля

К 5-6 каплям раствора белка приливают 1 каплю 10%-ного рас­твора сахарозы и подслаивают 1 мл Н2SO₄ (концентрированной). На границе раздела жидкостей появляется вишнево-красное окрашива­ние.

Триптофан, взаимодействуя с оксиметилфурфуролом (образую­щимся при гидролизе сахарозы и обезвоживании моносахаридов под действием концентрированной серной кислоты) образует комплекс вишнево-красного цвета.

Опыт 6 Диазореакция на гистиоин и тирозин (реакция Пау­ли)

К свежеприготовленному диазореактиву (3 капли 1%-ного рас­твора сульфаниловой кислоты в 2%-ном растворе НС1 и 3 капли 5%-ного раствора NaNO₂) добавляют 6-8 капель раствора белка, и, после перемешивания, 3-5 капель 10%-ного раствора Na₂CO₃. Развивается интенсивная красная окраска.

Реакция обусловлена присутствием а белке аминокислот гистидина и тирозина, которые, реагируя с диазобензолсульфокислой, об­разуют азокраситель красного цвета.

Лабораторная работа 2

Осаждение белков

Цель: Изучить способы осаждения белков

Оборудование и реактивы: Яичный белок, раствор (3 белка куриных яиц смешивает с 600 мл 3%-ного раствора хлористого на­трия); кишечный белок; сернокислый аммоний (насыщенный раствор); сернокислый аммоний кристаллический; азотная кислота кон­центрированная; трихлоруксусная кислота (5%-ный раствор); фенол . (насыщенный раствор); формальдегид (формалин, 40%- ный раствор);

хлористый натрий кристаллический; сернокислая медь (5%-ный рас­твор); уксуснокислый свинец (0,5%~ный раствор).

Ход работы

Опыт 1 Осаждение белка при нагревании

В одну пробирку налейте 2 мл раствора яичного белка, в другую - столько же мышечного. Определите рН в этих растворах. Прокипя­тите растворы в обеих пробирках. Выпадает ли осадок в пробирках? Объясните происходящие явления.

Опыт 2 Высаливание белков

В пробирку налейте 3 - 4 мл раствора яичного белка, добавьте равный объем насыщенного раствора (NH₄)₂SO₄. Смесь встряхните. Раствор мутнеет от выпадающего осадка белка. Профильтруйте жид­кость через фильтр. Фильтрат в количестве 2 мл отлейте в пробирку и прокипятите. Наблюдайте свертывание оставшихся в фильтрате бел­ков. Какие это белки?

К оставшемуся непрокипяченному фильтрату добавьте избыток кристаллического (NH₄)₂SO₄ до прекращения его растворения. На­блюдайте появление мути или хлопьев осажденного белка. Объясните механизм высаливания белков.

Опыт 3 Осаждение белка органическими растворителями

К 1 мл раствора яичного белка прилейте 2 - 3 мл С₂Н₅OН или ацетона. Раствор мутнеет. Добавьте 1 каплю раствора NaCl и дайте постоять. Что наблюдается?

Опыт 4 Осаждение белка концентрированными минераль­ными кислотами

В пробирку налейте 1 мл концентрированной НNО₃ и, наклонив её под углом 45°, осторожно по стенке пробирки опустите из пипетки равный объем раствора белка. Что наблюдается на границе двух сло­ев? Вместо НNО₃ можно ваять концентрированную H₂SO₄ или НС1.

Опыт 5 Осаждение белка солями тяжелых металлов

Налейте в 2 пробирки по 1мл раствора яичного белка. По каплям добавляйте в одну пробирку 5 %-ный раствор CuSO₄, в другую -0,5%-ный раствор Рb(СН₃СОО)₂. Появляется осадок. Объясните по­чему?

---

Дата добавления: 2018-05-02; просмотров: 794; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!