Совершенствование биообъекта методами генной инженерии
Создание биообъектов методами генетической инженерии. Основные принципы технологии рекомбинантной ДНК. Плазмиды. Транспозоны. Функции. Использование в конструировании продуцентов. Генетическая инженерия – один из важнейших методов биотехнологии, предполагающий целенаправленное искусственное создание определенных комбинаций генетического материала, способных нормально функционировать в клетке, т.е. размножаться и контролировать синтез конечных продуктов. Таким образом, генетическая инженерия включает выделение из клеток отдельных генов или синтез генов вне клеток, направленную перестройку, копирование и размножение выделенных или синтезированных генов, а также их перенос и включение в подлежащий изменению геном и таким путем можно добиться включения в клетки бактерий «чужых» генов и синтеза бактериями важных для человека соединений. Развитие генетической инженерии стало возможным благодаря открытию двух ферментов: рестриктаз, разрезающих молекулу ДНК в строго определенных участках и лигаз, сшивающих определенные участки различных молекул ДНК друг с другом. Кроме того, в основе генетической инженерии лежит открытие векторов, которые представляют собой короткие, самостоятельно размножающиеся в клетках бактерий кольцевые молекулы ДНК. С помощью рестриктаз и лигаз в векторы встраивают необходимый ген, добиваясь в последствии его включения в геном клетки-хозяина. Различают следующие виды генетической инженерии: Генная инженерия: её сущность состоит в целенаправленном использовании перестроек естественного генома, осуществляемых in vivo и in vitro, для изменения генетических характеристик известных вирусов и клеток, прямое манипулирование рДНК, включающими отдельные гены. Геномная инженерия: её сущность заключается в целенаправленной глубокой перестройке генома акариот, прокариот и эукариот, вплоть до создания новых видов, т.е. перенос всего или большей части генетического материала от одной клетки к другой. При геномной инженерии возможно получение половых (слиянием гамет) и соматических (слиянием неполовых клеток) гибридов. Хромосомная инженерия связана с переносом изолированных хромосом от клетки-донора одного организма в клетку-реципиент другого организма. Техника клеточной генной инженерии 1-ый метод. Метод перегруппировки генов Внутри клетки есть определенный набор и последовательность генов. При протопластировании идет перегруппировка генов. Также происходит и активация молчащих генов. П-ой метод. Слияние или фузия генов. Прокариот сливают с эукариотом, образуется рекомбинант, содержащий кусок одного ДНК и другого ДНК. Ш-й метод: Трансформация. а) клетка с определенным набором генов в ДНК —> живой протопласт без перегруппировки генов —> протопласт гибрид-рекомбинант —> клетка т б) выделение изолированной ДНК в пробирке - вектор (это кусок изолированной ДНК, выделенный из другого микроорганизма (фаг, плазмида) Если есть клетка и изолированная ДНК с нужным геном (вектор) - вектор может быть в виде фага, плазмиды, вируса, космиды (плазмида+ фаг), то можно включить вектор в изолированный протопласт (т.е. провести трансформацию ). При этом образуются «+» продуценты с новыми качествами, но в клетке существуют системы репарации (восстановления) молекулы ДНК и постепенно эти рекомбинанты возвращаются к исходному (дикому) типу. Репарацию преодолевают следующим образом: «+» варианты дополнительно обрабатывают мутагенами для преодоления действия системы репарации; иммобилизация клеток «+» вариантов. Для того, чтобы прошла трансформация, необходимо сделать клетку компетентной, т.е.увеличитъ ее проницаемость. Это достигается следующим образом: воздействовать на клетку ионами тяжелых металлов (цинк, кобальт, литий, магний) воздействовать на клетку ферментами (лизоцим, комплексный фермент виноградной улитки) быстрое замораживание и оттаивание. Компетентные клетки легче поглощают вектор, куски ДНК. У них обнажена цитоплазматическая мембрана, которая в некоторых местах выходит на поверхность, и в образующиеся в этих местах окошечки, легко проникает вектор в виде изолированной ДНК, а также в виде фага, вируса, космиды (космида- изолированная ДНК или плазмида+ фаг). При протопластировании и слиянии протопластов может происходить явление амплификации (увеличение) генов - при этом продукция целевого назначения (витаминов, гормонов, антибиотиков) увеличивается. Клетки с амплификацией генов есть «+» вариант.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Совершенствование биообъекта методами генной инженерии.
Отличие клеточной инженерии от генной инженерии в том, что в генной инженерии имеют дело с изолированными ДНК, с которыми работают in vitro.
Суть технологии: производят соединение фрагментов ДНК in vitro (в пробирке) с последующим введением изолированной ДНК в живую клетку. Чистая генная инженерия - это техника обмена изолированными фрагментами ДНК. Это происходит с помощью ферментов, которые относятся к эндонуклеазам (например, рестриктазы).
Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 1834; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!