Регуляция активности генов у про- и эукариот. Работа лактозного оперона



Регуляция экспрессии генов у прокариот

Изучение регуляции генной активности у прокариот привело французских

микробиологов Ф. Жакоба и Ж. Моно к созданию (1961) оперонной модели

регуляции транскрипции. Оперон — это тесно связанная последовательность

структурных генов, определяющих синтез группы белков, которые участвуют в

одной цепи биохимических преобразований. Например, это могут быть гены,

которые детерминируют синтез ферментов, участвующих в метаболизме какого-

либо вещества или в синтезе какого-то компонента клетки. Оперонная модель

регуляции экспрессии генов предполагает наличие единой системы регуляции у

таких объединенных в один оперон структурных генов, имеющих общий промотор

и оператор.Особенностью прокариот является транскрибирование мРНК со всех

структурных генов оперона в виде одного полицистронного транскрипта, с которого

в дальнейшем синтезируются отдельные пептиды.

Примером участия генетических и негенетических факторов в регуляции

экспрессии генов у прокариот может служить функционирование лактозного

оперона у кишечной палочки Е. colt. При отсутствии в среде, на которой

выращиваются бактерии, сахара лактозы активный белок-репрессор, синтезируемый

геном-регулятором , взаимодействует с оператором , препятствуя соединению

РНК-полимеразы с промотором и транскрипции структурных генов Z, Y, А.

Появление в среде лактозы инактивирует репрессор, он не соединяется с

оператором, РНК-полимераза взаимодействует с промотором и осуществляет

транскрипцию полицистронной мРНК. Последняя обеспечивает синтез сразу всех

ферментов, участвующих в метаболизме лактозы. Уменьшение содержания лактозы

в результате ее ферментативного расщепления приводит к восстановлению

способности репрессора соединяться с оператором и прекращению транскрипции

генов Z, Y, А.

Таким образом, регуляция экспрессии генов, организованных у прокариот в

опероны, является координированной. Синтез полицистронной мРНК обеспечивает

одинаковый уровень синтеза всех ферментов, участвующих в биохимическом

процессе.

В связи с особенностями организации отдельных генов эукариот и генома в

целом регуляция генной активности у них характеризуется некоторыми отличиями

по сравнению с прокариотами.

У эукариот не установлено оперонной организации генов. Гены,

определяющие синтез ферментов одной цепи биохимических реакций, могут быть

рассеяны в геноме и, очевидно, не имеют, как у прокариот, единой регулирующей

системы (ген-регулятор, оператор, промотор). В связи с этим синтезируемые мРНК

у эукариот моноцистронны, т.е. являются матрицами для отдельных пептидных

цепей. В настоящее время механизмы регуляции и координации активности

эукариотических генов интенсивно изучаются. Установлено, что их

функционирование несомненно подчиняется регуляторным воздействиям, однако

регуляция транскрипции у эукариот является комбинационной, т.е. активность

каждого гена регулируется большим спектром генов-регуляторов (рис. 3.87).

Регуляция экспрессии гена, кодирующего белок Х у эукариот,

двумя регуляторными белками. У многих эукариотических генов, кодирующих белки и транскрибируемых РНК-полимеразой II, в ДНК имеется несколько областей, которые узнаются разными белками-регуляторами. Одной из них является область, расположенная вблизи промотора. Она включает около 100 пар нуклеотидов, в том числе ТАТА-

блок, располагающийся на расстоянии 25 пар нуклеотидов от точки начала

транскрипции. Установлено, что для успешного присоединения РНК-полимеразы II

к промотору необходимо предварительное соединение с ТАТА-блоком особого

белка — фактора транскрипции — с образованием стабильного транскрипционного

комплекса. Именно этот комплекс ДНК с белком узнается РНК-полимеразой II.

Последовательности нуклеотидов, примыкающие к ТАТА-блоку, формируют

требуемый для транскрипции элемент, расположенный перед промотором.

Другая область, играющая важную роль в регуляции активности

эукариотических генов, располагается на большом расстоянии от промотора (до

нескольких тысяч пар нуклеотидов) и называется энхансером (от англ. enhance —

усиливать).

И энхансер, и препромоторный элемент эукариотических генов содержат

серию коротких нуклеотидных последовательностей, которые связываются с

соответствующими регуляторными белками. В результате взаимодействия этих

белков происходит включение или выключение генов.

Особенностью регуляции экспрессии эукариотических генов является также

существование белков-регуляторов, которые способны контролировать

транскрипцию многих генов, кодирующих, возможно, другие белки-регуляторы. В

связи с этим некоторые (главные) белки-регуляторы обладают координирующим

влиянием на активность многих генов и их действие характеризуется плейотропным

эффектом (рис. 3.88). Примером может служить существование белка, который

активирует транскрипцию нескольких специфических генов, определяющих

дифференцировку предшественников жировых клеток.

Регуляция экспрессии многих генов эукариот

одним белком-регулятором

Ввиду того что в геноме эукариот имеется много избыточной ДНК, а в каждой

клетке организма транскрибируется всего 7—10% генов, логично предположение о

том, что у них преобладает позитивный генетический контроль, при котором

активация небольшой части генома оказывается более экономичной, нежели

репрессия основной массы генов.

Несомненной особенностью регуляции транскрипции у эукариот является

подчиненность этих процессов регулирующим влияниям со стороны гормонов

организма. Последние часто играют роль индукторов транскрипции. Так, некоторые

стероидные гормоны обратимо связываются особыми белками-рецепторами,

образуя с ними комплексы. Активированный гормоном рецептор приобретает

способность соединяться со специфическими участками хроматина, ответственными

за регуляцию активности генов, в которых рецепторы узнают определенные

последовательности ДНК.

Специфичность регулирующего воздействия гормона на транскрипцию

обусловлена не только природой самого гормона, но и природой клетки-мишени,

синтезирующей специфический белок-рецептор, который влияет на транскрипцию

определенного для данной клетки набора генов. Примером участия гормонов в

регуляции активности определенных генов может служить влияние тестостерона на

развитие тканей организма по мужскому типу при наличии специфического белка-

рецептора. Отсутствие последнего при мутации соответствующего гена не дает

возможности гормону проникнуть в ядра клеток-мишеней и обеспечить включение

определенного набора генов: развивается синдром тестикулярной феминизации, или

синдром Морриса .

Следующая особенность регуляции генной активности у эукариот связана с

образованием стойкого комплекса ДНК с белками — хроматина (см. разд. 3.5.2.2).

Ведущая роль в компактизации ДНК принадлежит гистонам, поэтому они,

несомненно, участвуют и в процессах регуляции генной активности (см. разд. 3.5.4).

Непременным условием для осуществления транскрипции у эукариот является

предварительная декомпактизация хроматина на соответствующем участке, где

временно утрачивается связь с Hi-гистонами и несколько ослабляется связь с

нуклеосомными гистонами. Правда, нуклеосомная организация хроматина не

утрачивается даже в ходе транскрипции, однако контакт ДНК и негистоновых

белков становится возможным и происходит дерепрессия гена.

Отличительной особенностью регуляции экспрессии генов у эукариот

является возможность ее осуществления не только на стадии транскрипции, но и на

других этапах растянутого во времени процесса реализации наследственной

информации. Регуляция на стадии транскрипции является наиболее экономичной,

но недостаточно быстро реагирующей на изменение ситуации. Так, возникшая в

клетке потребность в каком-либо белке не может быть быстро удовлетворена путем

включения транскрипции соответствующего гена. Синтезированный транскрипт

должен подвергнуться процессингу, затем зрелая мРНК должна выйти из ядра в

цитоплазму и, образуя комплекс с рибосомами, осуществить трансляцию

информации, синтезировав пептид, который, лишь пройдя посттрансляционное

изменение, формирует активный белок, необходимый клетке.

В том случае, когда клетке нужно прекратить синтез какого-то продукта,

после выключения транскрипции соответствующего гена в цитоплазму некоторое

время будут продолжать поступать созревающие молекулы мРНК, осуществляющие

там синтез пептидных цепей, пока они не деградируют под действием ферментов.

Таким образом, для эффективной регуляции экспрессии генов у эукариот должны

существовать механизмы, работающие не только на стадии транскрипции, но и на

других этапах этого процесса.

Связанная с экзон-интронной организацией генов необходимость процессичга,

в том числе сплайсинга, делает возможным регуляцию этих процессов в ядре. В

настоящее время обсуждается роль интронных участков ДНК в изменении схемы

сплайсинга при синтезе антител или цитохрома b. Это создает возможность, используя один и тот же первичный транскрипт, обеспечивать образование матриц для разных пептидов, вырезая из них разные последовательности или изменяя последовательности на 5'- и 3'-концах мРНК.

Очевидно, и транспорт зрелых мРНК из ядра в цитоплазму также

регулируется определенным образом, так как установлено, что лишь небольшая

часть РНК, транскрибируемой с генов, после сплайсинга покидает ядро.

Значительное количество ее деградирует. Возможно, это является результатом

процессинга, приводящего к появлению ≪неправильных≫ матриц.

Существуют механизмы, обеспечивающие регуляцию процессов синтеза

пептидных цепей. Они менее экономичны, но отличаются быстротой реагирования

на изменения потребностей клетки в данном белке. Регуляция трансляции

осуществляется на стадии инициации путем воздействия на один из факторов

инициации, катализирующий присоединение к малой субъединице рибосомы тРНК,

несущей метионин (формилметионин).В результате при наличии в

цитоплазме мРНК трансляции на ней не происходит. Такая ситуация наблюдается,

например, при отсутствии в цитоплазме гема, что ведет к выключению трансляции

глобиновых цепей гемоглобина. Наконец, регуляция процесса реализации наследственной информации может осуществляться и на стадии посттрансляционных изменений. Прекращение этих процессов обусловливает задержку в формировании активных молекул белка при наличии необходимых для этого пептидных цепей. Например, для формирования активной формы белкового гормона — инсулина — из проинсулина должны вырезаться две субъединицы. Торможение этих процессов уменьшает выход конечного активного продукта. Таким образом, рассмотренный выше пример регуляции экспрессии генов демонстрирует сложнейшие взаимосвязи, которые существуют между ними в геноме. Формирование любого признака поэтому нельзя рассматривать как результат действия одной пары аллельных генов в генотипе. В любом случае регуляция экспрессии ответственного за этот признак гена осуществляется при участии других генов.

 

 

Формы изменчивости, их значение в онтогенезе и эволюции. Модификационная изменчивость. Норма реакции, фено- и генокопии. Экспрессивность и пенентрантность. Развитие фенотипа как результат реализации генотипа в конкретных условиях среды. Комбинативная изменчивость и ее роль.

Модификационная изменчивость

Модификационная изменчивость не вызывает изменений генотипа, она связана с реакцией данного, одного и того же генотипа на изменение внешней среды: в оптимальных условиях выявляется максимум возможностей, присущих данному генотипу. Так, продуктивность беспородных животных в условиях улучшенного содержания и ухода повышается (надои молока, нагул мяса). В этом случае все особи с одинаковым генотипом отвечают на внешние условия одинаково (Ч. Дарвин этот тип изменчивости назвал определенной изменчивостью). Однако другой признак — жирность молока — слабо подвержен изменениям условий среды, а масть животного — еще более устойчивый признак. Модификационная изменчивость обычно колеблется в определенных пределах. Степень варьирования признака у организма, т. е. пределы модификационной изменчивости, называется нормой реакции.
Широкая норма реакции свойственна таким признакам, как удои молока, размеры листьев, окраска у некоторых бабочек; узкая норма реакции — жирности молока, яйценоскости у кур, интенсивности окраски венчиков у цветков и др.
Фенотип формируется в результате взаимодействий генотипа и факторов среды. Фенотипические признаки не передаются от родителей потомкам, наследуется лишь норма реакции, т. е. характер реагирования на изменение окружающих условий. У гетерозиготных организмов при изменении условий среды можно вызвать различные проявления данного признака.
Свойства модификаций: 1) ненаследуемость; 2) групповой характер изменений; 3) соотнесение изменений действию определенного фактора среды; 4) обусловленность пределов изменччивоти генотипом

Норма реакции — это предел изменчивости определенного признака, в зависимости от окружающих воздействий. Пример: у зайца шире норма реакции на колебания температуры окружающей среды, чем у коров. Корова не может себе позволить безнаказанно гулять зимой и прыгать по сугробам. Зайцы же не плохо себя чувствуют и зимой и летом. А у лошадей узкая норма реакции на изменения состава крови, и малейшее его нарушение может быть фатально для животного. Лошади вынуждены пить исключительно чистую воду и остерегаться даже укуса пчелы. А вот обычные домашние свиньи имеют тот же диапазон значительно шире, вот и способны пить и есть практически что угодно.

Фенокопии — изменения фенотипа под влиянием неблагоприятных факторов среды, по проявлению похожие на мутации. В медицине фенокопии — ненаследственные болезни, сходные с наследственными.одно, без вреда организму.

Генокопии (лат. genocopia) — это сходные фенотипы, сформировавшиеся под влиянием разных неаллельных генов. То есть это одинаковые изменения фенотипа, обусловленные аллелями разных генов, а также имеющие место в результате различных генных взаимодействий или нарушений различных этапов одного биохимического процесса с прекращением синтеза. Проявляется как эффект определенных мутаций, копирующих действие генов или их взаимодействие.

Экспрессия генов - это процесс в ходе, которого информация, содержащаяся в гене, используется для синтеза функционального генетического продукта. Как правило, этим генетическим продуктом являются белки или РНК. Процесс экспрессии генов происходит в организмах всех живых существ: эукариот (в том числе в многоклеточных организмах), прокариот (у бактерий и архей), а также вирусов - для создания макромолекулярных основ для их жизнедеятельности. Некоторые процессы, происходящие при экспрессии генов, могут модулироваться определенными факторами, например транскрипция, сплайсинг РНК, трансляция и посттрансляционная модификация белка.
Экспрессия генов обеспечивает поддержание структуры и функции клетки, что является основой для дифференциации клеток, морфогенеза, а также универсальной адаптации любого организма к условиям существования. Регуляция генов может также служить в качестве субстрата для эволюционных изменений, поскольку контроль над временем, местом и интенсивностью экспрессии генов может иметь огромное влияние на функции (действие) генов в клетке или в многоклеточном организме.

Пенетрантность (от лат. penetro — проникаю, достигаю), количественный показатель фенотипической изменчивости проявления гена. Измеряется (обычно в %) отношением числа особей, у которых данный ген проявился в фенотипе, к общему числу особей, в генотипе которых этот ген присутствует в необходимом для его проявления состоянии (гомозиготном — в случае рецессивных генов или гетерозиготном — в случае доминантных генов). Проявление гена у 100% особей с соответствующим генотипом называется полной П., в остальных случаях — неполной П. Неполная П. свойственна проявлению многих генов человека, животных, растений и микроорганизмов. Например, некоторые наследственные болезни человека развиваются только у части лиц, в генотипе которых присутствует аномальный ген; у остальных же наследственное предрасположение к болезни остаётся нереализованным. Неполная П. гена обусловлена сложностью и многоступенчатостью процессов, протекающих от первичного действия генов на молекулярном уровне до формирования конечных признаков на уровне целостного организма. П. гена может варьировать в широких пределах в зависимости от генотипической среды. Путём селекции можно получать линии особей с заданным уровнем П. Средний уровень П. зависит также от условий среды. См. также Экспрессивность, Феногенетика.

Комбинативная изменчивость - это следствие перекреста гомологичных хромосом, их случайного расхождения в мейозе и случайного сочетания гамет при оплодотворении. Комбинативная изменчивость ведет к появлению бесконечно большого разнообразия генотипов и фенотипов. Она служит неиссякаемым источником наследственного разнообразия видов и основой для естественного отбора.
Громадное генотипическое и, следовательно, фенотипическое разнообразие в природных популяциях является тем исходным эволюционным материалом, с которым оперирует естественный отбор.

 

Виды наследственной изменчивости: комбинативная и мутационная. Теория мутагенеза. Классификация мутаций: генные, хромосомные, геномные, спонтанные и индуцированные, генеративные, соматические и т.д. Сущность, примеры. Значение мутационной изменчивости

Наследственную, или генотипическую, изменчивость подразделяют на комбинативную и мутационную.

Комбинативной называют изменчивость, в основе которой лежит образование рекомбинаций, т. е. таких комбинаций генов, которых не было у родителей.

В основе комбинативной изменчивости лежит половое размножение организмов, вследствие которого возникает огромное разнообразие генотипов. Практически неограниченными источниками генетической изменчивости служат три процесса:

1) Независимое расхождение гомологичных хромосом в первом мейотическом делении. Именно независимое комбинирование хромосом при мейозе является основой третьего закона Менделя. Появление зеленых гладких и желтых морщинистых семян гороха во втором поколении от скрещивания растений с желтыми гладкими и зелеными морщинистыми семенами — пример комбинативной изменчивости.

2) Взаимный обмен участками гомологичных хромосом, или кроссинговер. Он создает новые группы сцепления, т. е. служит важным источником генетической рекомбинации аллелей. Рекомбинантные хромосомы, оказавшись в зиготе, способствуют появлению признаков, нетипичных для каждого из родителей.

3) Случайное сочетание гамет при оплодотворении.

Эти источники комбинативной изменчивости действуют независимо и одновременно, обеспечивая при этом постоянную «перетасовку» генов, что приводит к появлению организмов с другими генотипом и фенотипом (сами гены при этом не изменяются).

Комбинативная изменчивость является важнейшим источником всего колоссального наследственного разнообразия, характерного для живых организмов. Однако перечисленные источники изменчивости не порождают существенных для выживания стабильных изменений в генотипе, которые необходимы, согласно эволюционной теории, для возникновения новых видов. Такие изменения возникают в результате мутаций.

Мутационная изменчивость. Мутационной называется изменчивость самого генотипа.

Мутагенез — это внесение изменений в нуклеотидную последовательность ДНК (мутаций). Различают естественный (спонтанный) и искусственный (индуцированный) мутагенез.

Естественный, или спонтанный, мутагенез происходит вследствие воздействия на генетический материал живых организмов мутагенных факторов окружающей среды, таких какультрафиолет, радиация, химические мутагены.

Механизм мутагенеза

Последовательность событий приводящая к мутации (внутри хромосомы) выглядит следующим образом:

Происходит повреждение ДНК.

В случае, если повреждение произошло в незначащем (интрон) фрагменте ДНК, то мутации не происходит.

В случае если повреждение произошло в значащем фрагменте (экзон), и произошла корректная репарация ДНК, или вследствие вырожденности генетического кода не произошло нарушения, то мутации не происходит.

Только в случае такого повреждения ДНК, которое произошло в значащей части, которое не было корректно репарированно, которое изменило кодировку аминокислоты, или которое привело к выпадению части ДНК и соединению ДНК вновь в единую цепь — то оно приведет к мутации.

Мутагенез на уровне генома также может быть связан с инверсиями, делециями, транслокациями, полиплоидией, и анеуплоидией, удвоением, утроением (множественной дупликацией) и т. д. некоторых хромосом.

Искусственный мутагенез широко используют для изучения белков и улучшения их свойств (направленной эволюции (англ.)).

Ненаправленный мутагенез

Методом ненаправленного мутагенеза в последовательность ДНК вносятся изменения с определенной вероятностью. Мутагенными факторами (мутагенами) могут быть различные химические и физические воздействия — мутагенные вещества, ультрафиолет, радиация. После получения мутантных организмов производят выявление (скрининг) и отбор тех, которые удовлетворяют цели мутагенеза. Ненаправленный мутагенез более трудоемок и его проведение оправдано, если разработана эффективная система скрининга мутантов.

Направленный мутагенез

В направленном (сайт-специфическом) мутагенезе изменения в ДНК вносятся в заранее известный сайт. Для этого синтезируют короткие одноцепочечные молекулы ДНК (праймеры),комплементарные целевой ДНК за исключением места мутации.

Мутации — это внезапные наследуемые изменения генетического материала, приводящие к изменению тех или иных признаков организма.

Мутации возникают внезапно, скачкообразно, как дискретные изменения признаков.

В отличие от ненаследственных изменений мутации представляют собой качественные изменения, которые передаются из поколения в поколение.

Мутации проявляются по-разному и могут быть как полезными, так и вредными, как доминантными, так и рецессивными.

Мутации ненаправленны (спонтанны), т. е. мутировать может любой участок хромосомы, вызывая изменения как незначительных, так и жизненно важных признаков.

Почти любое изменение в структуре или количестве хромосом, при котором клетка сохраняет способность к самовоспроизведению, обусловливает наследственное изменение признаков организма. По характеру изменения генома, т. е. совокупности генов, заключенных в гаплоидном наборе хромосом, различают генные, хромосомные и геномные мутации.

Генные, или точковые, мутации— результат изменения нуклеотидной последовательности в молекуле ДНК в пределах одного гена. Такое изменение в гене воспроизводится при транскрипции в структуре иРНК; оно приводит к изменению последовательности аминокислот в полипептидной цепи, образующейся при трансляции на рибосомах. В результате синтезируется другой белок, что ведет к изменению соответствующего признака организма. Это наиболее распространенный вид мутаций и важнейший источник наследственной изменчивости организмов.

Существуют разные типы генных мутаций, связанных с добавлением, выпадением или перестановкой нуклеотидов в гене. Этодупликации (повторение участка гена), вставки (появление в последовательности лишней пары нуклеотидов), делеции ("выпадение одной или более пар нуклеотидов), замены нуклеотид-ных пар (AT -><- ГЦ; AT -><-; ЦГ; или AT -><- ТА), инверсии (переворот участка гена на 180°).

Хромосомные мутации (перестройки, или аберрации) — это изменения в структуре хромосом, которые можно выявить и изучить под световым микроскопом.

Известны перестройки разных типов (рис. 3.13):

нехватка, или дефишенси, — потеря концевых участков хромосомы;

делеция — выпадение участка хромосомы в средней ее части;

дупликация — двух- или многократное повторение генов, локализованных в определенном участке хромосомы;

инверсия — поворот участка хромосомы на 180°, в результате чего в этом участке гены расположены в последовательности, обратной по сравнению с обычной;

транслокация — изменение положения какого-либо участка хромосомы в хромосомном наборе. К наиболее распространенному типу транслокаций относятся реципрокные, при которых происходит обмен участками между двумя негомологичными хромосомами. Участок хромосомы может изменить свое положение и без реципрокного обмена, оставаясь в той же хромосоме или включаясь в какую-то другую.

При дефишенси, делециях и дупликациях изменяется количество генетического материала. Степень фенотипического изменения зависит от того, насколько велики соответствующие участки хромосом и содержат ли они важные гены. Примеры дефишенси известны у многих организмов, включая человека. Тяжелое наследственное заболевание —синдром «кошачьего крика» (назван так по характеру звуков, издаваемых больными младенцами), обусловлен гетерозиготностью по дефишенси в 5-й хромосоме. Этот синдром сопровождается сильным нарушением роста и умственной отсталостью. Обычно дети с таким синдромом рано умирают, но некоторые доживают до зрелого возраста.

Геномные мутации — изменение числа хромосом в геноме клеток организма. Это явление происходит в двух направлениях: в сторону увеличения числа целых гаплоидных наборов (полиплоидия) и в сторону потери или включения отдельных хромосом(анеуплоидия).

Полиплоидия — кратное увеличение гаплоидного набора хромосом. Клетки с разным числом гаплоидных наборов хромосом называются триплоидными (Зn), тетраплоидными (4n), гексанло-идными (6n), октаплоидными (8n) и т. д.

Анеуплоидия, или гетероплодия, — явление, при котором клетки организма содержат измененное число хромосом, не кратное гаплоидному набору. Анеуплоиды возникают тогда, когда не расходятся или теряются отдельные гомологичные хромосомы в митозе и мейозе. В результате нерасхождения хромосом при гамето-генезе могут возникать половые клетки с лишними хромосомами, и тогда при последующем слиянии с нормальными гаплоидными гаметами они образуют зиготу 2n + 1 (трисомик)по определенной хромосоме. Если в гамете оказалось меньше на одну хромосому, то последующее оплодотворение приводит к образованию зиготы 1n - 1 (моносомик) по какой-либо из хромосом. Кроме того, встречаются формы 2n - 2, или нуллисомики, так как отсутствует пара гомологичных хромосом, и 2n + х, или полисомики.


Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 4026; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:






Мы поможем в написании ваших работ!