Методика приготовления элективной натур. жид. пит. среды для выращивания Bacillus subtilis



Около1 г. сена из разнотравья мелко нарезают ножницами, помещают в коническую колбу объемом 100-200 мл, приливают 50-100 мл воды и щепотку мела и кипятят около10-15 мин.Колбу закрыв. ватн. пробкой и помещ. в термостат при t 250С на 2-3 сут. Насене всегда имеются споры сенной палочки; при кипячении споры не гибнут и послеостывания питат. субстрата дают начало вегет. клеткам. На поверхности сен. отвараобразуется сероват. пленка, состоящая из особей аэроб., Гр+ сенной полочки.

Сен.палочка (Bacillussubtilis)– гетеротроф, сапрофит, обит. в почве, на поверхности растений во влажныхместах (залив. луга), питаясь орг. веществами отмерших листьев. При иссушениисубстрата образ. споры., п.э. на поверхности сена всегда имеются споры сен. палочки.Это аэроб. бактерия, в пит. среде обитает у ее поверхности, при массов. размноженииобразует на поверхности пит. субстрата сероват. пленку. Сен. палочка подвижна,жгутики покрывают всю поверхность клетки (перитрихальное жгутиков-ие). Для неехарактерен опред. жизнен. цикл, кот. необходимо учитывать примикроскопировании. В молод. культуре сен. палочка представлена мелкимиовальными одиночн. подвижн. клетками. По мере старения культуры происходитделение кл-к, в результ. чего появл. цепочки кл-к, как подвижные, так инеподвиж. Благодаря образ. Цепочек кл-к, сен. палочка м. б. заметна даже вшкольн. микроскоп. даже вшкольн. микроскоп.

Микроскопирование методами раздавленной капли и прижизненной окраски микробов.

Раздавленная капля — это метод приготовления препаратов для микроскопич. изучения живых объектов. Применяется при исследовании бактерий, к-к культуры тканей, простей-ших, ряда водорослей. Для приготовления препаратов по этому методу на поверхность чистого сухого предметного стекла наносят каплю воды, физиологического раствора или культуральной жидкости. Стеклянной палоч-кой или бакте-риологич.петлей в каплю вносят небольшое кол-во исследу-емой культуры и осторожно распределяют ее в жидкости для получения однородной взвеси. При работе с культурой тка-ней на предметное стекло наносят каплю суспензии к-к в культуральной жидкости. Если суспензия к-к слишком густая, предварительно приготовляют рабочее разведение культуры. К 4,5 мл воды, физиологического р-ра или среды для роста добавляют 0,5 мл суспензии к-к и тщательно перемешивают. Этим достигается десятикратное разбавление исход. суспензии. Можно получить более высокие разведения (1:100—1:1000); приготовленную каплю накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. Если часть жидкости выступает за края покровного стекла, излишек среды можно отсосать узкой полоской фильтровальной бумаги. Готовые препараты рассматривают в сухих и иммерсионных системах. Для получения наибольшего контраста применяют темнополь-ную или фазово-контрастную микроскопию. Т.к. при этом чаще всего необходима двойная иммерсия (объектива и конденсора), толщина препарата не должна превышать 1,1—1,3 мм. Неокрашенные организмы выглядят под микроскопом обведенными светлой или темной (в зависимости от фокусировки) полоской (линия Векке), возникающей на границе преломления среды и тела.

Прижизненная окраска –метод явл. видоизменён. методом раздавленной капли, для лучшей видимости микробов прокраш. р-ром метиленовой сини или нейтр. красного (под покровное стекло). Бактерии сохраняют жизнеспособность, приобретают син. или красную окраску, отчётливо видны под микроскопом.

42. Метод окраски и фиксации препарата. 

Фиксация – обработка живого объекта, к-рая даёт возможность быстро прервать течение жизненных процессов в нём, сохранив тонкую структуру. Ф-ия необходима при работе с патогенными м-ми для безопасности.

 Приготовление мазка. На чистое обезжиренное стекло нанести каплю воды, прокалённой бактериологической иглой из пробирки с культурой берут микробную массу и вносят в каплю. Каплю размазывают по стеклу на площади 4 см.. густую массу сначала разводят водой. Мазок сушат на воздухе или при нагревании над пламенем горелки. Затем фиксируют.

 Фиксация мазка.

•Над пламенем горелки;

•Использование формалина, ацетона, хромовых соединений;

•Обработка 96 этил. Спиртом или смесью спирта и эфира (жидкость Никифорова), препараты погружают в фиксирующую жидкость.

 Окраска препарата. На мазок наносят несколько капель красителя (кислые и основные красители: нейтральный красный, фуксин, метиленовый синий, генциан фиолетовый, др). В зависимости от вида красителя продолжительность окрашивания от 1 до 5 мин. Промыть под водой, фильтровальной бумагой удалить воду, подсушить на воздухе и микроскопировать.

44.Техника и механизм окраски б-ий по Граму. Метод основан на свойстве Гр- м-ов при обесцвечивании их в этиловом спирте отдавать основной фиолетовый краситель и докрашиваться в дальнейшем в оранжево-красный.

•Препарат покрывают полоской фильтровальной бумаги и заливают 1% водным р-ром генциан фиолетового на 1мин.

•Бумагу снимают, препарат промывают под проточной водой и заливают р-ром Люголя на 1-2 мин до почернения мазка.

•Р-р Люголя смывают и приступают к обесцвечиванию препарата в 96 этиловом спирте на 1мин.

•Промывают водой и наносят водный р-р нейтрального красного на 1-2 мин.Смывают, высушивают, микроскопируют (с использованием иммерсии при увеличении объектива 90).


Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 213; Мы поможем в написании вашей работы!






Мы поможем в написании ваших работ!