Реакция бласттрансформации лимфоцитов
Бласттрансформация лимфоцитов - фактически, это размножение делением лимфоцитов в результате контакта с антигеном или аллергеном.
Для постановки реакции бласттрансформации in vitro у больного в асептических условиях берут 5-10 мл крови в пробирку, содержащую 100-200 ЕД гепарина, осторожно перемешивают и помещают на 60 мин в термостат при температуре 37°С для осаждения эритроцитов. После инкубации надосадочный слой плазмы отсасывают в стерильную пробирку. Определяют число лимфоцитов в 1 мкл.
Затем взвесь лимфоцитов разводят питательной средой 199 таким образом, чтобы в 1 мл содержался 1-2 млн лимфоцитов. Приготовленную лимфоцитарную взвесь разливают в стерильные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена. Флаконы закрывают пробирками и помещают в термостат при температуре 37°С на 72 часа.
Затем готовят мазки, фиксируют и окрашивают по Романовскому. Интенсивность бласттрансформации оценивается путем подсчета бластных клеток на 1000 клеток и определения их процентного содержания.
Реакция оценивается как положительная, если число бластных форм не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число бластных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%.
Реакция гладкомышечного органа сенсибилизированного животного при контакте с аллергеном (по Шульцу-Дейлу)
Исследование проводят на отрезке изолированной тонкой кишки. Препарат длинной 3-4см готовят из проксимального отдела тощей кишки морской свинки, сенсибилизированной лошадиной сывороткой. С обоих концов на кишку накладывают лигатуру, одну из которых закрепляют на стеклянном крючке, опущенном в сосуд, заполненный раствором Тироде. Другую лигатуру соединяют с миографом для записи сокращений кишки на кимографе. Включают кимограф и в раствор Тироде добавляют сыворотку крови собаки (неспецифический аллерген) и отмечают отсутствие сокращений отрезка кишки. Раствор Тироде заменяют свежим, вводят в него 1-2 мл лошадиной сыворотки (специфический аллерген), отмечают резкое сокращение отрезка кишки.
|
|
Реакция Овери.
Морскую свинку наркотизируют, фиксируют на препаровальном столике на спине, тщательно выстригают шерсть на животе. Пассивную сенсибилизацию кожи осуществляют путем внутрикожного введения кроличьей антисыворотки по 0,1 мл в разведениях 1:1; 1:10; 1:100 с интервалом в 1 см по средней линии живота. Для контроля отдельно в ту же область вводят 0,1 мл физиологического раствора. Через 1-2 часа после этого животному вводят внутривенно 1 мл лошадиной сыворотки (антиген) вместе с 1 мл 2% раствора синего Эванса. Спустя 10-20 мин после инъекции иссекают кожу на животе, на внутренней поверхности отмечают появление окрашенных в синий цвет пятен разной величины. Реакция считается положительной, если диаметр окрашенного пятна в месте инъекции сыворотки составляет не менее 5 мм.
|
|
Стадии нарушения микроциркуляции при остром воспалении (опыт Конгейма)
Лягушку обездвиживают и фиксируют ее к дощечке на спине. Кожу и мышцы в нижней половине брюшной стенки справа разрезают ножницами, пинцетом осторожно захватывают петлю кишечника и растягивают брыжейку над круглым отверстием дощечки. Петлю кишечника закрепляют булавками. Под малым увеличением в брыжейке наблюдают кровоток. Через 5-10 мин в результате подсыхания в брыжейке развивается острый воспалительный процесс, характеризующийся вначале артериальной гиперемией. Артериальная гиперемия через 30-40 мин после извлечения брыжейки сменяется венозной гиперемией. Продолжают наблюдать прогрессирующее замедление кровотока, которое переходит в стаз.
Прикрыв брыжейку, рассматривают ее при большом увеличении. В венах и капиллярах, в которых хорошо выражено пристеночное стояние лейкоцитов, они постепенно проникают сквозь сосудистую стенку, отделяются от нее, принимают амебовидную форму и оказываются за пределами сосуда (эмиграция лейкоцитов). В капиллярах удается также наблюдать и выход эритроцитов наружу (диапедез эритроцитов). В некоторых участках, в связи с разрывом сосудов, наблюдаются кровоизлияния с массовым выходом крови в окружающую ткань. В других участках можно обнаружить полную остановку движения крови - стаз.
Дата добавления: 2018-02-15; просмотров: 720; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!