Опыт 2. Определение концентрации глюкозы в биологических жидкостях.

⇐ ПредыдущаяСтр 10 из 16Следующая ⇒

Для определения глюкозы в биологических жидкостях в настоящее время различными фирмами выпускаются наборы реактивов. Поэтому суть работы сводится только к правильному использованию набора реактивов согласно инструкции по применению.

Определение без депротеинирования.

Без осаждения белков анализируют сыворотку и плазму крови, мочу. Мочу перед анализом разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:10 до 1:500 и в последующем результат умножают на степень разведения.

1. Приготовьте опытную, калибровочную и контрольную пробы по схеме:

	Объем компонента (мл)
	опытная проба	калибровочная проба	контрольная проба
Рабочий раствор реактивов	2,5	2,5	2,5
Исследуемый образец	0,025	-	-
Калибровочный раствор глюкозы	-	0,025	-
Дистиллированная вода	-	-	0,025

2. Поместите пробирки в водяную баню (37^оС) на 10 минут.

3. Измерьте оптическую плотность опытной (D₁) и калибровочной (D₂) проб против контрольной пробы при длине волны 540 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.

4. Рассчитайте концентрацию глюкозы по формуле:

где Х - концентрация глюкозы в калибровочном растворе.

Сравните полученные величины с нормальными значениями. Сделайте вывод о состоянии животного. В случае отклонения полученных значений от нормальных величин, предложите возможные причины, объясняющие данный результат.

Назовите факторы, вызывающие гипогликемию и гипергликемию в крови животных.

Опыт 3. Полуколичественное определение глюкозы в моче.

1. В ступке разотрите в тонкий порошок 1 г сульфата меди и 10 г карбоната натрия.

2. На предметное стекло насыпьте немного порошка и нанесите несколько капель мочи.

3. Подогрейте до кипения. Синий цвет означает, что глюкозы нет, желтовато-зеленый означает, что глюкозы не более 0,5 %, зеленый – не более 1%, коричнево-красный – до 2%, интенсивно красный – свыше 2%.

Запишите Ваши результаты.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Занятие № 11. «Обмен углеводов (часть 2)»

Цель занятия: сформировать знания об основных метаболических путях превращения глюкозы.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Гликолиз. Последовательность химических реакций и их роль в организме.

2. Гликогенолиз. Последовательность химических реакций и их роль в организме.

3. Глюконеогенез. Последовательность химических реакций и их роль в организме. Биологическая роль данного процесса.

4. Пентозный путь окисления углеводов. Охарактеризуйте стадии данного процесса. Укажите биологическое значение каждой стадии.

5. Гормональная регуляция углеводного обмена.

6. Сравните энергетический выход аэробного и анаэробного окисления молекулы глюкозы.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Выделение гликогена из тканей животных и качественные реакции на гликоген.

1. Взвесьте 1 г печени.

2. Поместите навеску ткани в ступку. Налейте 3 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и разотрите пестиком в течение 10 минут.

3. Затем добавьте 5 мл дистиллированной воды.

4. Полученную суспензию фильтруйте в другую пробирку.

5. Повторите пункт 2-5 с мышечной тканью.

6. С полученными фильтратами проведите нижеследующие реакции:

	Сульфат аммония (насыщ.) 10 капель	Ацетат свинца 10 капель	раствор Люголя 1 капля
Экстракт печени (0,5 мл)
Экстракт мышечной ткани (0,5 мл)

Объясните полученные результаты. Как Вы думаете, в эксперименте использовалась печень сытого или голодного животного? Обоснуйте свое предположение. Почему гликоген мышц не может быть использован в качестве прямого источника глюкозы крови?

Опыт 2. Обнаружение активности дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида.

1. В пробирку внесите кусочек дрожжей (величиной с горошину) и 1 мл 2%-ного раствора глюкозы.

2. Разотрите содержимое стеклянной палочкой до получения равномерной взвеси.

3. Добавьте каплю 0,002%-ного раствора метиленового синего и перемешайте содержимое пробирки стеклянной палочкой.

4. Пробирку поместите в штатив и, через некоторое время, наблюдайте постепенное обесцвечивание метиленового синего. Обесцвечивание начинается со дна пробирки.

Объясните механизм обесцвечивания содержимого пробирок.

Напишите реакцию окисления 3-фосфоглицеринового альдегида в ходе гликолиза. Каким образом окисляется НАДН+Н⁺ дегидрогеназы 3-фосфоглицеринового альдегида в анаэробных условиях?

Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 593; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 5 6 7 8 91011 12 13 14 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!