Выводы по теоретической части исследования



В ходе проведения анализа литературных источников было определенно, что существует некоторая зависимость между нарушениями, возникающими вследствие развития сахарного диабета и количественным содержанием ретикулоцитов в крови. Из этого можно сделать следующие выводы:

1. при сахарном диабете резко увеличивается содержание глюкозы и если это продолжается длительное время, без какой-либо компенсации, то возникают патологические нарушения со стороны кроветворной системы.

2. В крови у таких пациентов может повыситься уровень гликозированного гемоглобина, образовавшегося в таком количестве следующим образом: глюкоза в крови вступает в не ферментативное воздействие с белками крови в частности с гемоглобином который содержиться в эритроцитах.

3. Соответственно функция их будет нарушена для того чтобы компенсировать этот «урон» красный костный мозг начинает вырабатывать большее количество ретикулоцитов. Они являются предшественниками эритроцитов, которые содержат гемоглобин. Но при постоянной гипергликемии образование гликолизированного гемоглобина продолжается и его уровень не снижается.

4.  Под действием всех перечисленных факторов в крови с высоким содержанием глюкозы начинает увеличиваться количестворетикулоцитов, в качестве компенсации при потерях в следствии гликозилирования гемоглобина находящегося в эритроцитах.

Данные полученные в ходе теоретическогоанализа требуют практического подтверждения, которое описано во второй главе ВКР.

ГЛАВА2.Практическая часть исследования

Анализ изменения количества ретикулоцитов при нарушениях углеводного обмена

Материалы и методы исследования

Внедрение в практику органов здравоохранения предложенной схемы лабораторного обследования больных сахарным диабетом позволит своевременно оценить тяжесть состояния пациента, выявить нарушения в системе эритрона, определить риск развития сосудистых осложнений и рационально подойти к вопросу о назначении терапии при данной патологии.

Целью практического исследования является выявление влияния нарушения углеводного обмена на количество ретикулоцитов. Для достижения этой цели необходимо решить ряд задач, а именно:

1.Определить базу для проведения исследовательской работы:

2.Провести анализ необходимых методик, которые будут применены.

3.Отобрать образцы крови с разными уровнями глюкозы и гликозированного гемоглобина для дальнейшего определения в них количества эритроцитов, ретикулоцитов и гемоглобина.

4.Провести анализ полученных данных в ходе исследовательской работы составить таблицы и итоговую диаграмму. Сделать вывод о проведенной работе.

Для решения выдвинутых задач был выбран следующий график проведения исследовательской работы:

1.Апрель 2018 года -исследования проводились на базе ГБУЗ «Навлинская ЦРБ» в клинической лаборатории. Исследования проводились в течение 10 дней. Для исследования было взято 20 образцов крови пациентов отделения «Эндокринология».Исследуемые показатели: уровень глюкозы, гликозилированного гемоглобина, эритроцитов, ретикулоцитов и гемоглобина в крови.

2.Май 2018 - работа над анализом полученных результатов в ходе исследования, составление таблиц и диаграмм. Подготовка презентации по итогам исследовательской работы.

В ходе исследования применялись следующие методики:

Методика определения уровня глюкозы в крови

Количество глюкозы можно определить как в цельной крови, так и в плазме, и в сыворотке крови вследствие ее равномерного распределения между плазмой и форменными элементами.

Принцип метода:

Этот метод предназначен для количественного определения содержания глюкозы в крови, глюкозооксидазным методом.

Набор реактивов и ход исследования см. приложение 1.

Нормы содержания глюкозы:

•1 месяц - 2,7-4,44 ммоль/л;

•дети старше 5-6 лет - 3,33-5,55 ммоль/л;

•взрослые до 60 лет - 4,44-6,38 ммоль/л;

•старше 60 лет - 4,61-6,1 ммоль/л.

у взрослых:

•гипогликемия - содержания глюкозы ниже 3,3 ммоль/л

•гипергликемия - содержания глюкозы более 6,1 ммоль/л

Методика определения уровня гликозилированного гемоглобина

Принцип:

Метод основан на аффинной хроматографии гликозилированной и негликозилированной фракций гемоглобина в гемолизатторе крови. Используемый в микроколонках набора сорбент с привитой 3-аминофенилборной кислотой обеспечивает на первой стадии специфическое связывание гликозилированного гемоглобина и его отделение от негликозилированной фракции. На второй стадии происходит полнаяэлюциягликозилированной фракции за счет вытеснения с сорбента сорбитолом.

Измерение оптических плотностей обеих фракций при длине волны 414 им позволяет рассчитать относительное содержание гликозилированного гемоглобина в анализируемой пробе.

Показатель гликированного гемоглобина измеряется в процентах от общего количества гемоглобина. Нормой считается уровень менее 6%.Значение 6,5% и выше является критерием диагностики сахарного диабета.

Методика определения уровня эритроцитов

Метод подсчета в счетной камере

Кровь предварительно развели с целью уменьшения числа клеток, подлежащих счету. В химические пробирки отмерили пипеткой по 4 мл 3%-ного раствора хлорида натрия и осторожно выдули в нее 0,02 мл капиллярной крови (кровь забирали пипеткой от гемометра Сали). Полученное разведение практически принялиравным 1:200. Взвесь тщательно перемешали и затем заполнили камеру с сетками Горяева. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15*15). Большие квадраты, расчерченные вертикально и горизонтально на 16 малых квадратов, чередуются с квадратами, разделенными только вертикальными или горизонтальными линиями, и с квадратами чистыми, без линий.

Методика подсчета и окраска ретикулоцитов

Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями является на практике наиболее используемым методом подсчета количества ретикулоцитов. Это связано с тем, что метод простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, в связи с чем может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

Реактивы

Можно использовать один из следующих красителей:

1.Насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать 96% этанол в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса). На 100 мл абсолютного спирта берут 1,2 г краски.

2.Раствор азура I: азур I – 1 г, аммония оксалат – 0,4 г, натрия хлорид – 0,8 г, этиловый спирт 96% - 10 мл, дистиллированная вода – 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2 – 3 дня в термостат при 37° C и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать.

3.Раствор азура II: азур II – 1 г, натрия цитрат – 5 г, натрия хлорид – 0,4 г, дистиллированная вода – 45 мл. Раствор оставляют в термостат при 37° C на 2 суток, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15 – 20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

Специальное оборудование-Микроскоп.

Ход определения

Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке.

Окраска ретикулоцитов на стекле

При окраске ретикулоцитов на стекле хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из перечисленных выше красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Стеклографом маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте. Перед проведением анализа готовят влажную камеру. Обычно для этого пользуются чашкой Петри с уложенными по краям валиками смоченной ваты или фильтровальной бумаги. Наносят каплю крови на мазок краски, готовят из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влажную камеру на 3 – 10 мин. Затем высушивают мазки на воздухе.

Окраска ретикулоцитов в пробирке

Окраска ретикулоцитов в пробирке отличается при использовании разных красителей.


Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 264; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:






Мы поможем в написании ваших работ!