Сельскохозяйственных животных.
1. Понятие об иммунодиагностике.
2. Методы иммунодиагностики с использованием проявления гуморального иммунитета.
3. Методы иммунодиагностики с использованием проявления клеточного иммунитета.
1. Иммунодиагностика - это совокупность иммунологических
методов, позволяющих выявить то или иное заболевание или определить возбудителя в исследуемом материале. Все методы иммунодиагностики делятся на 2 группы:
1. Общие неспецифические методы, характеризующие состояние различных звеньев системы иммунитета: лимфоцитов, гранулоцитов, макрофагов, комплемента.
2. Специфические методы, позволяющие выявить антитела, иммунные Т-лимфоциты, антигены в организме животных или антигены возбудителя во внешней среде.
Эти методы используют для оценки иммунного статуса животных, т.е. для характеристики состояния иммунной системы.
К 1-ой группе относят определение общего количества лимфоцитов, их видовую и функциональную активность; общего количества лейкоцитов в крови и соотношение их видов, их поглотительную и переваривающую способность, фагоцитарный индекс и фагоцитарное число и др.
Специфические методы позволяют определить конкретные антитела, возбудители, иммунные Т-лимфоциты и тем самым определить чем болеет животное.
2. На закономерностях гуморального иммунитета строятся гуморальные методы исследований или серодиагностика. Серологическую диагностику проводят путем постановки особых диагностических реакций – преципитации, агглютинации, связывания комплемента, нейтрализации и др. Эти реакции основываются на взаимодействии антигена и специфических антител (преципитинов, агглютининов, антитоксинов, комплементсвязывающих антител и др.).
|
|
|
Имея известный антиген (стандартный диагностикум), изготовленный из микробов определенного вида, можно выявить антитела в исследуемых сыворотках крови животного и благодаря этому диагностировать инфекционное заболевание.
В качестве антигенов применяют взвеси живых или убитых микробов, экстракты или изолированные химические фракции из них.
Имея диагностическую сыворотку, содержащую специфические антитела, можно установить вид неизвестного антигена, т.е. патогенных микробов-возбудителей болезни – при исследовании микробной культуры или патологического материала.
Кроме того, серологические реакции позволяют судить об активности защитных механизмов организма в процессе инфекционного заболевания, напряженности иммунитета, возникающего после переболевания или вакцинации. Результат этих реакций можно наблюдать макроскопически, т.е. невооруженным глазом.
|
|
|
Иммунные сыворотки получают путем длительной иммунизации животных (кроликов, м.свинок, лошадей, баранов, волов и др.). В результате гипериммунизации, проводимой по различным схемам, в крови иммунизированных животных накапливаются антитела.
По проявлению феномена взаимодействия между антигеном и антителом invitro различают: осадочные (прямые) реакции, лизирующие и нейтрализующие. (какие антитела в них участвуют – говорили при характеристике антител).
Реакция агглютинации
РА впервые разработана М.Грубером в 1896 г. Сущность реакции заключается во взаимодействии антитела с антигеном, в результате чего происходит склеивание (агглютинация) микробов с образованием хлопьев, комочков, видимых невооруженным глазом.
РА широко применяется для серологической диагностики многих бактериальных инфекций (бруцеллеза, сапа, сальмонеллезов, колибактериоза и др.) и для серологической идентификации видов и типов выделенных микроорганизмов.
Существует несколько методов постановки РА: пробирочный (объемный), капельный (пластинчатый), кровекапельный, кольцевая реакция с молоком, реакция гемагглютинации и ее варианты (РЗГА, РНГА), антиглобулиновый тест Кумбса и др.
|
|
|
ККРА – вместо сыворотки берется кровь. Ставят пластинчатую реакцию. Диагностируют пуллороз кур и индеек, микоплазмоз кур.
Реакция Кумбса позволяет выявить неполные антитела. Последние одновалентны, в связи с чем они тормозят образование агглютината. Метод основан на применении антиглобулиновой сыворотки, служащей посредником для соединения неполных антител, фиксированных на корпускулярных антигенах (эритроциты, бактерии).
Реакция гемагглютинации – она не относится к серологическим и диагностически точным реакциям, однако позволяет обнаружить антиген – гемагглютинин и установить гемагглютинирующие свойства (способность агглютинировать эритроциты) у некоторых бактерий и микоплазм.
РНГА – в последние годы заняла одно из ведущих мест в серодинамике. Сущность ее заключается в том, что белковые молекулы антигена соответствующего возбудителя или антитела предварительно адсорбируют наобработанных танином эритроцитов барана или др. животного. Затем ставят реакцию путем смешивания сенсибилизированных эритроцитов с сыворотками крови больных животных или во втором случае с исследуемым антигеном. При наличии в сыворотке спец. Антител на данный антиген (или наоборот) происходит агглютинация эритроцитов – реакция положительная.
|
|
|
Реакция преципитации (РП)
Предложена Р.Краусом в 1897 году. Преципитация – явление, наблюдающееся при взаимодействии антител-преципитинов и антигена-преципитиногена. Сущность реакции заключается в изменении дисперсности коллоидов антигена и их осаждением под влиянием специфических антител, находящихся в иммунной сыворотке. РП может быть поставлена в пробирках в жидкой среде (реакция кольцеприципитации) или в агаровом геле (пластинчатая РДП).
Реакция кольцеприципитации впервые предложена Асколи (1910), наиболее широко ее применяют в целях диагностики сибирской язвы. При проведении ветеринарной экспертизы РП является методом определения фальсификации мясных, мучных и др. продуктов. Особое значение эта реакция имеет в судебно-медицинской экспертизе при определении видовой принадлежности крови. Применение реакции преципитации в жидкой среде не позволяет, однако, охарактеризовать гетерогенность антигенов, т.е. количество и концентрацию антигенов в препарате. Данные сведения можно получить, если поставить РП в геле (чаще агаровом). Обладая скоростью передвижения, различные антигены препарата неодинаково диффундируют, образуя в толще прозрачного геля не месте встречи с гомологичным антителом преципитаты. Локализация и концентрация линий преципитинов будут характерны для каждого компонента антигенного препарата, что служит критерием его качества. Путем разведения препарата можно характеризовать относительное содержание в нем антигенов.
Разработано несколько методов постановки РДП: метод прямой одномерной диффузии по Удену (1946), метод простой радиальной иммунодиффузии по Манчини (1963), метод двойной диффузии в агаровый гель по Оухтерлони (1948) и др.
Реакция нейтрализации(РН)
Реакцию впервые продемонстрировал Беринг и Китазато в 1890 г. на модели столбнячных токсинов и антитоксинов. Сущность РН заключается в способности гомологичных антител иммунной сыворотки подавлять (нейтрализовать) инфекционные свойства возбудителя болезни или продуктов его жизнедеятельности. Для установления результата реакции смесью антиген-антитело заражают лабораторных животных, КК, КЭ. Показатель положительно РН – отсутствие гибели биологических тест-систем. В бактериальной практике РН применяют при диагностике анаэробной энтеротоксемии, ботулизма и др. РН проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов.
Реакция связывания комплемента(РСК)
Разработана Борде и Жангу (1901) на основе двух феноменов: бактериолиза и гемолиза. Используют для выявления антител в сыворотке крови и для обнаружения в исследуемом материале антигена (при бруцеллезе, сапе, риккетсиозах, туберкулезе и др.).
Данная реакция относится к непрямой двухсистемной. В ней участвуют 5 компонентов:
1. Антиген.
2. Испытуемая сыворотка.
3. Комплемент.
4. Гемолитическая сыворотка.
5. Эритроциты барана.
Компоненты 3,4,5 составляют индикаторную систему.
Если антиген и антитело испытуемой сыворотки соответствуют друг
другу, возникает иммунный комплекс антиген-антитело, который связывает и извлекает из среды, где протекает реакция, комплемент.
При отсутствии в испытуемой сыворотке антител, соответственных антигену, указанный комплекс не образуется – комплемент остается свободным.
Поскольку это невидимые процессы, то для решения вопроса, что же произошло с комплементом, в пробирку в качестве индикатора вводят компоненты гемолитической системы – гемолитическую сыворотку + эритроциты. Если в бактериологической системе комплемент связался – гемолиз эритроцитов не произойдет, результат положительный – в сыворотке содержатся антитела. Наличие гемолиза служит показателем наличия свободного комплемента в бактериологической системе, что возможно только при отсутствии в испытуемой сыворотке антител – результат отрицательный.
РСК протекает при строгих количественных соотношениях компонентов. Это достигается их предварительным титрованием (комплемент и гемолитическую сыворотку титруют в день постановки реакции; микробный антиген – один раз в течение 2-3 месяцев). Титрование – определение наименьшего количества того или иного компонента в реакции для проведения реакции, лишнее или недостаток – искажение результатов.
РДСК – это вариант РСК, но отличающийся тем, что первая фаза реакции протекает в течение 16-18 часов на холоде (40С), что повышает чувствительность из-за более длительной адсорбции комплемента комплексом антиген-антитело.
Дата добавления: 2018-05-09; просмотров: 248; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!