Моноклональные антитела, определение, сфера применения, фармакологическая классификация
МАТ для мед прим – это препараты иммуноглобулина или фрагмента иммуноглобулина, например, F(ab')2, с определенной специфичностью, выработанные одним клоном клеток.
Сфера применения:
1)лечение онкологич патологий, аутоиммунных заб и тяжелых воспалений;
2)дифференциальная диагностика многих инфекц и неинфекц заболеваний;
3)изучение генетических механизмов многих заболеваний;
4)выделение БАВ(белков, ферментов, гормонов, токсинов) из сложных смесей.
5)в качестве меток для точной идентификации специализир-ых кл, например нейронов;
6)определение дозы ЛС и усиление эффективн их действия на клетки-мишени благодаря использованию МАТ, полученных в результате иммунизации животных этими ср-вами;
7)идентификация локализации опухоли с ее метастазами размером 0,5–1,0 см методом иммуносцинтиграфии;
8)нейтрализация лимфоцитов, ответственных за отторжение трансплантата;
9)нейтрализация аутоАТ, образующихся при аутоиммунных заболеваниях;
10)создание высокоспецифичных вакцин и сывороток
Фармакологическая классификация МАТ:
1)Самостоятельно использование МАТ как ЛС: (Трастузумаб(Герцептин),Ритуксимаб(Мабтера),Алемтузумаб(Кампат)
2)Конъюгация МАТ с токсинами (иммунотоксины):К МАТ пришиваются токсины бактериального или раститпроисхожд. Получается конструкция из структуры специфичной к опухолевому АГ и в-ва способного убить клеткуопухоли и ее метастазов.
|
|
|
3)Радиоиммунотоксины:Ибритумомаб(Зевалин)является конъюгатом Мабтеры с радиоактивным изотопом иттрия 90.
4)МАТ, действие которых направлено на воспалительный ответ:РЕМИКЕЙД (Инфликсимаб)представляет собой МАТ к одному из ключевых цитокинов, учавств в воспалительных процесах (ФНО-α).
Стандартизация вакцин (определение титра антител).
При стандартизации вакцин учитываются показатели: описание, подлинность, р-римость, прозрачность, цветность, механические включения, рН, содержание белка, стерильность, токсичность, специфическая активность, специфическая безопасность, антигенная активность, пирогенность, упаковка, маркировка, транспортирование, хранение, срок годности, назначение. Подлинность проверяется в реакциях идентификации микробного компонента, путем окраски и просматривания препаратов под микроскопом. Специфическая активность (иммуногенность) – необходимый минимальный титр микробного компонента в прививочной дозе.
В спецификации убитых вакцин указывается содержание инактивирующих агентов и консервантов. Если для получения вакцины использовалась клеточная культура, необходим контроль содержания бычьего сывороточного альбумина. Специфическая безопасность это контроль полноты инактивации, отсутствие остаточной вирулентности, генетическая стабильность. Специфическая активность вакцин – количество АГ в единице объема; количество живых или убитых микробных клеток, составляющих основу вакцины; уровень специфических АТ в сыворотке крови иммунизированных животных.
|
|
|
Количественное определение адсорбированной дифтерийной вакцины
Активность дифтерийной вакцины определяется назначения вакцины морским свинкам с последующей провокацией дифтерийным токсином (методы А или В) или путем определения титра антител против дифтерийноro токсина или анатоксина в сыворотке крови морских свинок (метод С).
Метод С. Определение антител у морских свинок
Готовят не менее трех разведений с 2,5–5 кратным шагoм. Каждой свинке вводят подкожно 1,0 мл разведения. Через 35–42 дня берут образцы крови у каждого вакцинированного и контрольного животного, и определяют содержание антител.
Определение титра антител. тИФА (ELISA) и Vero-Tecт, являются примером иммунохим методов для определения титра антител.
Определение титра антител в сыворотке морской свинки с помощью иммуноферментнoгo анализа (тИФА (ELISA)). Покрывают лунки планшета 100 мкл р-ра дифтерийноro анатоксина и оставляют на ночь при t 4ºС во влажной камере. На след день пластины тщательно отмывают буферным р-ром.
|
|
|
Готовят подходящие разведения отриц и полож контрольных сывороток и испытуемых cывороток. Инкубируют при t 37ºС в течение 2 ч. Oтмывают буферным р-ром. Готовят подходящее разведение конъюгата пероксидазы в блокирующем буферном р-ре и прибавляют по 100 мкл в каждую лунку. Инкубируют при t 37ºС в течение 1 ч. Отмывают планшет промывочным буферным р-ром. Прибавляют по 100 мкл субстратногo р-ра в каждую лунку. Инкубируют при комнатной t в темноте в течение 30 мин. Учитывают реакцию при длине волны 405 нм.
Определение титра антител в сыворотке морской свинки С помощью Vero-теста.
Метод основан на регистрации угнетения метаболизма (1) или цитотоксичности (2) в качестве конечногo эффекта. Регистрация может быть выполнена путем микроскопии клеток (определение клеточной морфологии) или макроскопически (по изменению цвета). Метод 1 Дифтерийный токсин оказывает цитопатическое действие на клетки Vero (клетки африканской зеленой мартышки) и их лизис. АТ против токсина могyт нейтрализовать цитопатическое действие. Активность дифтерийной вакцины определяют с помощью культуральной клеточной системы, добавляя в культуру разл разведения сыворотки от иммунизированных животных и фиксированное количество токсина. Жёлтый цвет среды указывает, что клетки живые; красный – что клетки погибли. В случае гибели части клеток цвет среды может быть оранжевым.
|
|
|
Метод 2 Тиазолил синий МТТ восстанавливается в сине-черный формазан митохондриальными дегидроrеназами живых клеток и может быть использован для колич оценки присутствия живых клеток. Белые или бесцветные лунки указывают на отсутствие живых клеток вследствие недостаточной нейтрализации токсина.
Билет
Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 560; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!