Микробиологическая диагностика холеры
Холера — особо опасное, карантинное инфекционное заболевание, проявляющееся в виде острого гастроэнтерита с выраженной интоксикацией и обезвоживанием (эксикозом) в результате нарушения водно-электролитного обмена, cвязанного с выработкой вибрионами холерного энтеротоксина (холерогена). Исследования на холеру проводятся круглосуточно в специальной лаборатории медицинскими работниками, прошедшими подготовку по особо-опасным инфекциям.
| Классификация возбудителей Порядок: | Vibrionales |
| Семейство: | Vibrionaceae |
Различают два биовара (биотипа):
Классический (Vibrio cholerae biovar cholerae
C lassical biotype )
Эль - Тор
(Vibrio cholerae biovar eltor, El Tor biotype).
Классическая» холера вызывается холерным вибрионом серогруппы О1 (Vibrio cholerae O1). Различают два биовара (биотипа) серогруппы О1
Антигены серогруппы О1 включают субединицы А-, В-, С-. По их сочетанию выделяют серовары.
серовар Инаба (Inaba) содержит фракцию А, С
серовар Огава (Ogawa) — фракции А, B
серовар Гикошима (Hikojima) — фракции А, B, С.
Микроскопический метод (микроскопия окрашенных мазков и препаратов «висячей капли» из материала от больного) при холере в настоящее время не применяется в связи с низкой его информативностью. Разработаны методы экспресс-диагностики холеры, применяют иммунолюминесцептный и иммобилизационный методы и ПЦР.
Экспресс – метод
· РНТФ с индикаторными холерными бактериофагами IV типа и Eltor
|
|
|
· РИФ с люминесцирующей холерной сывороткой
· РПГА с суспензионными холерными АТ
· Реакция иммобилизации холерных вибрионов с О1 (О139) холерной сывороткой, учет – темнопольная микроскопия
· ИФА, ПЦР
Бактериологический метод состоит из нескольких этапов.
Первый этап. Исследуемый материал засевают на щелочные (элективные) плотные питательные среды (щелочной агар Монсура – МПА с триптиказой, хлоридом натрия, таурохолатом натрия, карбонатом натрия; TCBS - тиосульфат-цитрат-бромтимол-сахарозный агар;щелочной МПА) и жидкие среды обогащения (1% щелочная пептонная вода).
Второй этап проводится через 6 —8 ч от начала анализа. Выполняют пересев из верхней части 1-й среды накопления на плотные элективные питательные среды и на 2-ю среду накопления. При наличии на 1-й пептонной воде нежной голубоватой пленки из нее готовят мазок в окраске по Граму, проверяют подвижность, ставят ОРА с холерными сыворотками О-1, О-139 и RO , а также специфическую иммунофлюоресценцию.
Третий этап выполняется через 12— 14 ч от начала анализа. Производится пересев из верхней части 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучают и отбирают для исследования типичные для холерного вибриона колонии на плотных средах, засеянных нативным материалом.
|
|
|
Четвертый этап. (через 18-24 ч от начала анализа). Изучают и отбирают с помощью стереомикроскопа типичные для холерного вибриона колонии на всех плотных средах. Холерный вибрион образует прозрачные, круглые, диаметром 1-2 мм, гладкие, плоские, гомогенные, с ровными краями колонии, имеющие голубоватый оттенок и маслянистую консистенцию. Культуру проверяют на наличие оксидазы (холерные вибрионы оксидазоположительны), ставят РА на стекле с холерными сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.
Положительная РА или ИФМ в сочетании с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры позволяет выдать предварительный положительный ответ.
Пятый этап проводится через 24 —36 ч от начала исследования. На этом этапе изучают и отбирают характерные для холерного вибриона культуры на среде Ресселя, на которой холерный вибрион расщепляет сахарозу, не ферментирует лактозу (отсутствие изменений скошенной части среды), ставят РА с холерными сыворотками (О-1, RO,Огава, Инаба, при наличии положительных результатов выдают ответ о выделении соответствующего холерного вибриона.
|
|
|
Шестой этап (выполняется через 36-48 ч от начала анализа) - окончательная идентификация выделенных культур вибриона с указанием биовара, серогруппы (серовара) и эпидемической значимости по косвенным биологическим признакам. Токсигенные штаммы холерных вибрионов серогрупп Ои О139 обычно не лизируют бараньи эритроциты, относятся к 1-й группе Хейберга, определение их чувствительности к антибиотикам,
Вирулентность холерных вибрионов определяют в специализированных лабораториях путем внутрикишечного заражения кроликов-сосунков, а также методами генодиагностики (ПЦР или ДНК-ДНК-гибридизация с целью определения гена, ответственного за выработку токсина).
|
Серодиагностика является дополнительным методом лабораторной диагностики холеры. Исследуют парные сыворотки крови больных, взятые с интервалом в 6-8 дней, с целью выявления агглютининов с помощью РА (диагностический титр 1:40 и выше), антитоксинов с помощью РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (диагностический титр - 1: 160) и вибриоцидных антител с помощью реакции иммобилизации вибрионов (диагностический титр1:1000). Учитывается также нарастание титра антител (не менее чем в 4 раза) в процессе инфекции.
|
|
|
. Биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:
· люминесцирующая холерная сыворотка для постановки реакции иммунофлюоресценции с целью выявления вибрионов;
· агглютинирующие холерные сыворотки Инаба и Огава (для постановки реакции агглютинации при идентификации холерного вибриона);
· холерные фаги: классический (фаг С) и Эль-Тор. Используются для фагодиагностики;
· поливалентный холерный бактериофаг для лечения и профилактики;
· холерная вакцина. Создано 3 вакцины против холеры (убитая Эль-Тор; холероген- анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона для подкожных инъекций; холероген-анатоксин, обогащенный О-антигеном холерного вибриона таблетированный). Используются для специфической профилактики холеры. В настоящее время разработаны также следующие пероральные противохолерные вакцины:
1. Вакцина WC/rBS — состоит из убитых целых клеток V. cholerae О1 с очищенной рекомбинантной В-субъединицей холерного анатоксина (WC/rBS) — предоставляет 85-90-процентную защиту во всех возрастных группах в течение шести месяцев после приёма двух доз с недельным перерывом.
2. Модифицированная вакцина WC/rBS — не содержит рекомбинантной В-субъединицы. Необходимо принимать две дозы этой вакцины с недельным перерывом. Вакцина лицензирована только во Вьетнаме.
3. Вакцина CVD 103-HgR — состоит из ослабленных живых оральных генетически модифицированных штаммов V. Cholerae О1 (CVD 103-HgR). Однократная доза вакцины предоставляет защиту от V. cholerae на высоком уровне (95 %). Через три месяца после приёма вакцины защита от V. cholerae El Tor на уровне 65 %.
Дата добавления: 2022-12-03; просмотров: 24; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!