Методика окраски цитологических препаратов в автомате для окраски мазков эмкостейнер АФОМК-13-ПАП.
Автоматизированная окраска для окраски мазков осуществляется в соответствии с инструкцией по работе с аппаратом.
Расходные материалы:
1.Перчатки смотровые латексные неопудренные.
2.Наборы реарентов для окраски цитологических препаратов (производства НПФ Абрис+).
3.Дистиллированная вода.
4.Спирты 70%,80%,96%.
5.0,5% солян кислота.
6.Синтетический бальзам (BIO MOUNT)(производства BIO Optica)
Красители и спирты для окраски заливаются в соответствующие емкости аппарата. Стеклопрепараты помещаются в штативы для окраски.
Окраска стеклопрепаратов проходит по следующей схеме:
1. Спирт 70% 3 мин.
2. Проточная вода – промывка
3. Дистиллированная вода – промывка
4. Гематоксилин – 8 мин
5. Проточная вода – промывка
6. Дистиллированная вода – промывка
7. Сушка на воздухе – 5 мин
8. Углекислый литий (3 капли на 100 мл.дист.воды) – 3 мин
9. Спирт 70% - 2 мин
10. Спирт 96% - 2 мин
11. Краситель OG-6 («оранж») – 10 мин
12. Спирт 96% - 2 мин
13. Спирт 96% - 2 мин
14. Основной краситель ЕА-5 – 10 мин
15. Спирт 96% - 2 мин
16. Спирт 96% - 2 мин
17. Ксилол – 2 мин
18. Ксилол – 2 мин
19. Препарат заключают в синтетический бальзам, затем накрывают покровным стеклом.
Приложение 5
Методика окрашивания цитологических препаратов азур-эозином по Романовскому.
Оборудование и материалы:
1. Ванны с реактивами
2. Штативы для окразки стеклопрепаратов
3. Устройство для фиксации и окраски мазков со встроенным таймером и сушильной камерой со звуковым сигналом «УФОМК-01» ТУ 9443-001-59879805-2004
|
|
|
Вспомогательное оборудование:
1. Пластиковые контейнеры для сбора и дезирфекции отработанных расходных материалов, перчаток, ветоши.
Расходные материалы:
1. Перчатки одноразовые латексные неопудренные
2. Раствор красителя азур-эозина по Романовскому «Профессионал» Диахим Геми Стейн производства Абрис
3. Раствор красителя эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду Диахим Геми Стейн производства Абрис
4. Буфер рН 6,8-7,2 для приготовления забуференной воды производства Абрис. Для приготовления забуференной воды необходимо растворить в 3 л дистиллированной воды
Методика окраски:
1. Препараты помещаются в штативы для окраски
2. Фиксация препаратов красителем эозин метиленовым синим по Май-Грюнвальду 3 мин
3. Разводим краситель азур-эозин по Романовскому забуференой водой в соотношении 1 часть красителя, 3 части забуференной воды.
4. Красим 12 мин
5. Препараты промыть проточной водой
6. Препараты просушиваются с помощью устройства «УФОМК-01»
Методика окраски по Романовскому позволяет получить четкое окрашивание ядерной субстанции, вследствие чего хорошо просматривается структура хроматина и нуклеол. Также окраска по Романовскому позволяет получить четкое окрашивание бактериальной флоры и простейших.
|
|
|
Образец правильной окраски представлен на фотографии.
Амастиготы Leishmania tropica, расположенные в макрофагах.
Приложение 6
МЕТОДИКА ОКРАСКИ ПО ГРАММУ.
МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ:
-емкость для окрашивания мазков
-стекла предметные
-бумага фильтровальная
-спирт этиловый ректификованный
-микроскоп
-спиртовка или горелка
-часы песочные на 1 или 2 мин, или секундомер
-пипетки
-вода дистиллированная
-масло иммерсионное
-петля бактериологическая
-пинцет
НАЗНАЧЕНИЕ:-
Используется для окраски препаратов-мазков при проведении бактериологических исследований и для идентификации флоры при микроскопиию
ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ:
окраска по Граму позволяет дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки на грамположительные и грамотрицательные.
СОСТАВ НАБОРА:
- бумага окрашена генцианвиолетом - бумага лабораторная фильтровальная, белого цвета, пропитанная 1% генцианового фиолетового (генцианвиолета), или кристаллического фиолетового (кристалл-виолета), или метилвиолета в спирте этиловом ректификованном с добавлением глицерина дистиллированного, нарезанная на полоски, размером 7,5х2,5 см.
|
|
|
- раствор Люголя-0,33 % раствор йода кристаллического в 0,66 % водном растворе калия йодистого; прозрачная жидкость красного-коричневого цвета.
- раствор фуксина Циля -10% спиртовой раствор фуксина(1 часть),в 5 %водном растворе фенола (9 частей) - прозрачная жидкость красного цвета.
ПРОВЕДЕНИЕ ОКРАШИВАНИЯ.
1.Предметное стекло перед исследованием обезжирить и сделать на нем мазки исследуемых культур. Мазки следует сделать тонкими, чтобы клетки равномерно распределялись на поверхности стекла и не образовывали скоплений. Препарат высушить при температуре 20-22 C , зафиксировать над пламенем горелки (спиртовки).
2.На фиксированный мазок поместить фильтровальную бумагу, окрашенную генцианвиолетовым и смочить ее дистиллированной водой на 1.2 мин.
3.Снять бумагу и, не промывая водой, налить на препарат раствор Люголя и выдержать 1 мин. до полного почернения мазка.
4.Раствор Люголя слить и обесцветить мазок спиртом этиловым ректифитированным, несколько раз наливая его на предметное стекло и покачивая стекло. Процесс обесцвечивания считается завершенный, когда от мазка перестают отделяться окрашенные в фиолетовый цвет струйки жидкости.
|
|
|
5.Препарат промыть дистиллированной водой.
6.На препарат нанести раствор Фуксина Циля, разбавленный дистиллированной водой в соотношении 1:9,на 30-60 сек.
7.Краску слить, препарат промыть дистиллированной водой, осушить фильтровальной бумагой , высушить на воздухе и микроскопировать с иммерсионной системой (объектив х90,окуляр х7 или х10).
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТА:
Грам-положительные микроорганизмы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, грам-отрицательные -в красный.
ПРИМЕЧАНИЕ.
Высокое качество окраски обеспечивается своевременным прекращением обесцвечивания мазков. При «недообесцвечивании» мазков грамотрицательные микроорганизмы могут сохранять фиолетовую окраску, а в «переобесцвеченных» мазках грамположительные микробы могут быть окрашены в оранжево-красный цвет.
Образцы правильной окраски представлены на фотографиях.
Грам (-) диплококки в нейтрофильных лейкоцитах, на клетках плоского эпителия
Скопление нейтрофилов и диплококков (менингококки) в окрашенном по Грамму мазке ликвора при гнойном менингите.
 |
Приложение 7
Дата добавления: 2021-07-19; просмотров: 257; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!