Ограничения в использовании теста
Инструкция по применению изделия медицинского назначения
Арт. M47 «Реагенты диагностические in vitro для микробиологических исследований 24. Тест для дифференциации стрептококков»
РУ №ФСЗ 2011/10205
Производитель MICROGEN BIOPRODUCTS Limited, Великобритания
Продавец АО «ДИАКОН», Россия
Назначение набора
Набор предназначен для идентификации и дифференциации стрептококков методом латекс-агглютинации. Основная часть выделяемых стрептококков обладают специфическими групповыми антигенами. Идентификация с помощью теста латексной агглютинации включает экстракцию и характеристику этих антигенов. Набор содержит специальный ферментный реагент для быстрой экстракции углеводных антигенов и серию латексных реагентов, специфичных для A, B, C, D, F, G групп стрептококков, для быстрой детекции и идентификации экстрагированных антигенов.
Принцип действия
Латексные частицы реагентов набора индивидуально сенсибилизированы кроличьими антителами, специфичными для одного из углеводных стрептококковых антигенов групп A, B, C, D, F, G.
Колонии стрептококков с питательных сред инкубируются в ферментном растворе для экстракции антигенов. Затем препарат тестируется на реакционном слайде с шестью суспензиями латексных частиц, покрытых антителами, каждая из которых специфична для одной из групп стрептококков (A, B, C, D, F, G).
В присутствии гомологичного антигена латексные частицы суспензий будут агрегировать, давая видимую невооруженным глазом агглютинацию.
|
|
|
Положительный контроль содержит инактивированные поливалентные антигеновые экстракты для групп A, B, C, D, F, G стрептококков.
Состав набора
Набор рассчитан на проведение 50 тестов
1.Тестовый реагент А М47а, для группы А- 1 фл.
2. Тестовый реагент В М47 b , для группы В -1 фл.
3. Тестовый реагент С М47с, для группы С - фл.
4. Тестовый реагент D М47 d , для группы D - 1 фл.
5. Тестовый реагент F М47 f , для группы F - 1 фл.
6. Тестовый реагент G М47 g , для группы G - 1 фл.
7.Положительный контроль M 47р - 1 фл.
5.Экстракционный фермент М47х - 2 фл.
6.Реакционные слайды
6.Палочки пластмассовые для перемешивания
7.Инструкция по использованию
Условия хранения
Все реагенты должны храниться при температуре 2-8°С. Не допускайте замораживания реагентов.
Экстракционный фермент М47х должен храниться не более 3 месяцев после восстановления. Чтобы продлить срок годности фермента, необходимо распределить его по стеклянным пробиркам в объемах 0,4 мл и хранить замороженным при температуре -20°С и ниже. В этом случае фермент может храниться 6 месяцев. Не допускается замораживание и размораживание реагента более одного раза.
|
|
|
Примечания
1.Все реагенты необходимо довести до комнатной температуры перед использованием.
2.Не разводите какие-либо реагенты.
3.Не смешивайте реагенты набора.
4.Не допускайте замораживания реагентов набора.
5.Убедитесь перед использованием, что реакционный слайд чистый и сухой.
6.Считайте положительным результатом только агглютинацию- образование комочков. Образование творожистой массы или волокон нельзя считать положительным результатом.
7.Не касайтесь капельницей реагентов положительного контроля и бактериальных образцов (во избежание контаминации).
Признаки порчи реагентов
-во флаконах с латексными реагентами образовались комочки, которые не удаляются после встряхивания,
-положительный контроль или экстракционный фермент становятся мутными или образуется осадок
-положительный контроль не дает агглютинацию с одним или несколькими тестовыми реагентами
-неинокулированный фермент дает агглютинацию с одним из тестовых реагентов
Контроль качества
Положительный контроль необходимо использовать регулярно, чтобы убедиться, что реагенты функционируют правильно.
|
|
|
Положительный контроль готов к использованию и должен давать агглютинацию со всеми латексными реагентами. Отсутствие агглютинации может означать порчу латексного реагента. Если требуется отрицательный контроль, можно использовать неинокулированный экстракционный фермент.
Процедура теста
1.Дайте латексным реагентам и положительному контролю достичь комнатной температуры перед использованием.
2.Непосредственно перед использованием восстановите Экстракционный фермент путем добавления к нему 10 мл дистиллированной воды. Осторожно перемешайте, чтобы убедиться, что восстановление завершено. Распределите 0,4 мл Экстракционного фермента в тестовую пробирку.
3.Используя бактериологическую петлю, отберите несколько колонии тестируемой культуры с поверхности агара и растворите их в Экстракционном ферменте. Для получения наилучшего результата отберите 4 или 5 колоний среднего размера. Излишняя инокуляция экстракционного фермента может привести к неспецифической агглютинации. Для очень мелких колоний необходимо сделать соскоб.
4.Инкубируйте пробирку в течение 10-15 минут при 37° в водяной бане. Встряхните пробирку после первых 5 минут инкубации и встряхните резко непосредственно перед использованием, чтобы получить однородную суспензию антигена.
|
|
|
5.Хорошо потрясите несколько секунд флаконы с латексными реагентами для получения однородной консистенции. Распределите по 1 капле каждого латексного реагента (М47а, М47b, M47c, M47d, M47f, M47g) на 6 разных полей реакционного слайда.
6.Распределите по 1 капле хорошо перемешанного экстракта в каждое поле с латексными реагентами.
7. Перемешайте содержимое каждого поля разными палочками (в комплекте). Распределите полученную суспензию по всей поверхности поля.
8.Осторожно покачайте слайд в течение 1 мин.
9.Наблюдайте наличие или отсутствие процесса агглютинации в течение не более, чем 1 мин.
Интерпретация результата:
Видимая агглютинация частиц латекса, образование комочков- результат положительный.
Отсутствие процесса агглютинации, суспензия без комочков- результат отрицательный.
Ожидаемые результаты
1.Агглютинация с одним из латексных реагентов дает возможность определить групповую принадлежность штамма.
Дополнительные тесты должны быть рассмотрены для подтверждения результата, в особенности:
-для штаммов группы D биохимические тесты для дифференциации Enterococcus spp. от стрептококков группы D (первые имеют относительно высокую устойчивость к антибиотикам)
- для штаммов группы А, С, G, имеющих морфологию в виде мелких колоний, биохимические тесты для подтверждения идентификации S.milleri/S.anginosus.
2.Агглютинация с более чем одним латексным реагентом указывает на возможность смешанного роста микроорганизмов из разных групп или на присутствие штамма с более чем одним групповым антигеном (например, некоторые стрептококки группы D, которые также обладают антигеном группы G).
Должны быть предусмотрены следующие процедуры:
-произведите пересев культуры, чтобы получить чистый изолят для повторного тестирования
-для штаммов с антигеном группы D и группы G биохимические тесты для дифференциации Enterococcus spp. от стрептококков группы D (штаммы энтерококков с двумя антигенами могут иметь более высокую устойчивость к антибиотикам, чем штаммы только с антигеном группы D).
3.Агглютинация со всеми латексными реагентами может указывать на излишнюю инокуляцию культурой Экстракционного фермента или контаминацию тестовой культуры организмами, которые стали причиной неспецифической агглютинации частиц латекса (это легко определить по характеру роста).
Должны быть предусмотрены следующие процедуры:
-кипятите оставшийся экстракт в течение 2 или 3 минут, охладите
-повторите тест с меньшим количеством инокулята
- произведите пересев культуры, чтобы получить чистый изолят для повторного тестирования
4.Отсутствие агглютинации со всеми латексными реагентами может указывать либо на отсутствие какой-либо из групп стрептококков в тестируемом образце, либо на то, что антигены присутствовали в количестве, меньшем, чем порог чувствительности теста.
Должны быть предусмотрены следующие процедуры:
-повторите тест, используя большее количество инокулята, особенно если подозревается группа D или группа F стрептококков.
-β-гемолитические стрептококки, которые не образуют группу, могут быть идентифицированы с помощью биохимических тестов.
Не β-гемолитические колонии
Агглютинация с одним латексным реагентом, показывающая результат группа В или группа D, дает надежную идентификацию штамма.
Если результатом является группа А, С, F или G – для идентификации необходимы другие методы.
Должны быть предусмотрены следующие процедуры:
-если результатом является группа D, необходимы биохимические тесты для дифференциации Enterococcus spp. от стрептококков группы D.
Все другие комбинации должны быть интерпретированы, используя информацию, данную выше.
Ограничения в использовании теста
1.Точность результата зависит от тестирования достаточного количества культуры.
Это не частая проблема, однако, некоторые штаммы стрептококков, принадлежащим к группе D, обладают более низкими или незначительными количествами групповых антигенов и некоторые штаммы группы F могут с трудом отбираться с поверхности агара. Продукция антигенов штаммами группы D может быть улучшена культивированием на агаре с добавлением 0,5-1,0% глюкозы. Эта добавка не затрудняет наблюдение гемолиза.
2.Рост штаммов с мелкими колониями может быть улучшен культивированием в атмосфере углекислого газа.
3.Стрептококки групп Q, R и S так же могут обладать достаточным для детекции количеством антигенов группы D.
4.Некоторые антигены имеют сходство с групповыми антигенами стрептококков. Например, причиной ложноположительного результата может стать присутствие Escherichia, Klebsiella или Pseudomonas. Однако, эти организмы легко дифференцируются по культуральным характеристикам и не должны затруднять идентификацию стрептококков.
УТИЛИЗАЦИЯ
После использования, все материалы, которые вступили в контакт с исследуемым образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими нормативными правилами в зависимости от класса медицинских отходов.
ВОПРОСЫ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ
По всем вопросам, предложениям, замечаниям, связанным с использованием продукта, вы можете обращаться в АО «ДИАКОН», 142290, Московская область, г. Пущино, ул. Грузовая, д. 1а, e-mail: sale@diakonlab.ru, +7 (495) 980-63-39.
Дата добавления: 2020-12-22; просмотров: 58; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!