Контроль готовой культуры плесневых грибов
Отбирают среднюю пробу поверхностной культуры и в ней определяют влажность, содержание сбраживаемых углеводов и активность ферментов — амилолитических и протеолитических.
Определение сбраживаемых углеводов в поверхностной культуре плесневых грибов
В культуре содержится около 15% сбраживаемых углеводов от введенных с отрубями. Поверхностная культура, полученная при выращивании различных штаммов плесневых грибов, содержит от 1,80 до 3,50% углеводов от массы культуры.
Для анализа из средней пробы культуры берут навеску 4 г, переводят ее в мерную колбу на 200 мл, добавляют 100 мл 0,4%-кого раствора серной кислоты, проводят гидролиз, как это было описано выше, при анализе отрубей. От разбавленного фильтрата отбирают 10—20 мл в мерную колбу на 100 мл, осветляют, доводят объем раствора до метки и определяют углеводы колориметрическим антроновым методом. Расчет ведут по уравнению
Ссбу.=
где: 18,9 — постоянный коэффициент, полученный экспериментальным путем;
D 1 — оптическая плотность, полученная с оранжевым светофильтром;
D 2 — оптическая плотность, полученная с синим светофильтром;
n – коэффициент разведения.
.
Пример. На анализ взята навеска 4 г поверхностной культуры гриба Asp. oryzae влажностью 12%. Из разбавленного раствора отобрано 15 мл и после колориметрической реакции с антроном получены значения оптической плотности D1 = 0,870 и D2=0,490.
|
|
Ссбу.= =2,394%
В готовой глубинной культуре также определяют сбраживаемые углеводы колориметрическим антроновым методом.
Пример.Фильтрат глубинной культуры разбавлен в 50 раз. После реакции с антроном получены оптические плотности D1 = 0,720, D2=0,370.
Ссбу.= ,= 0,331 г/100 мл.
Определение ферментативной, активности
Ферментативную активность плесневых грибов характеризуют амилолитическая, декстринолитическая, глюкоамилазная и протеолитическая активность.
Амилолитическую активность культур плесневых грибов определяют колориметрическим, йодометрическим методом, как и в солоде.
Для анализа поверхностной культуры из средней пробы отбирают две навески; для определения влажности и амилолитической активности.
Для определения АС берут 5 г воздушно-сухой или 10 г сырой культуры, тщательно растирают с кварцевым песком или толченым стеклом в фарфоровой ступке и количественно переводят в стакан или коническую колбу, добавив 10 мл ацетатного буферного раствора с рН 4,7 и 90 мл дистиллированной воды. Смесь выдерживают в течение часа в термостате при 30° С, периодически перемешивая. Затем раствор отфильтровывают и фильтрат используют в качестве основного раствора для приготовления рабочего раствора фермента, как описано при определении ферментативной активности солода. Ориентировочный расход основного раствора на приготовление рабочего раствора фермента нужной концентрации определяют по табл. 4.
|
|
Таблица 4 Приготовление рабочих растворов
(основной раствор содержит воздушно-сухой культуры 5 г/100 мл)
Предполагаемая активность культуры, ед./г | Масса культуры в рабочем растворе п, мг/5 мл | Расход основного раствора на приготовление рабочего раствора, мл | Общий объем разбавленного раствора, мл |
5—15 16—50 51—100 101—200 | 37,5 10 2,5 1,25 | 15 4 1 1 | 100 100 100 200 |
При анализе глубинной культуры отделяют мицелий фильтрацией и фильтрат используют для приготовления рабочего раствора фермента.
Для этого берут от 1 до 5 мл фильтрата (в зависимости от предполагаемой активности культуры) и разводят дистиллированной водой в мерной колбе на 100 мл. С рабочим раствором проводят ферментативную реакцию гидролиза крахмала в указанных выше условиях и проводят определение, как это описано для солода.
Активность определяют по числу единиц, содержащихся в 1 г поверхностной или в 100 мл глубинной культуры. Расчет ведут по уравнениям:
|
|
для поверхностной культуры
АС=
для глубинной культуры
АС=
где n 2— число миллилитров глубинной культуры, взятое на анализ.
Пример.Для анализа взято 10 г поверхностной культуры Asp. oryzae. Предполагаемая активность (штамм гриба высокоэффективен по амилазе) лежит в пределах 160—200 ед./г. По табл. 15 находим количество раствора, которое необходимо взять. Для вторичного разбавления— 1 мл/200 мл. В таком случае n=2,5 мг.
При колориметрйровашш получаем значения оптической плотности
D1=0,750 и D2=0,423.
Количество прогидролизованного крахмала
C= =0,04361 г
Амилолитическая активность культуры составит
АС= =111,6 ед/г.
Осахаривающую активность (метод ВНИИПрБ) культур грибов определяют с применением колориметрического антронового метода по прописи, приведенной для анализа солодов. Определение можно вести в той же реакционной среде, которую приготовили для определения АС.
Осахаривающую активность ОС культур грибов по полученной оптической плотности определяют по уравнению
ОС=
где D — оптическая плотность раствора;
п — масса культуры, взятой на ферментативную реакцию, мг.
Пример. На анализ взята поверхностная культура гриба Asp.oryzae n=2,5мг. После реакции получен раствор с оптической плотностью D =0,450.
|
|
Осахаривающай активность составит
ОС= = 25,85 ед./г.
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 76; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!