МИКРОСКОП, ЕГО УСТРОЙСТВО И РАБОТА С НИМ
Готовые окрашенные препараты рассматривают при помощи сложного оптического прибора — микроскопа. Микроскоп служит для изучения малых объектов, невидимых простым глазом. В микробиологии микроскопом пользуются для изучения как живых, так и убитых микробов в окрашенном или неокрашенном виде.
В микроскопе различают механическую и оптическую части.
Механическая часть микроскопа состоит из штатива, тубуса, предметного столика и системы винтов для настройки изображения: макрометрический винт и микрометрический, один поворот которого поднимает или опускает тубус на 0,1 мм. Микрометрический винт является одной из наиболее хрупких частей микроскопа, и обращение с ним требует особой осторожности.
Оптическая часть микроскопа состоит из окуляра, нескольких сменных объективов, закрепленных в револьвере, зеркала и конденсора с диафрагмой. Зеркало служит для отражения световых лучей по направлению к объективу и через него внутрь микроскопа. Одна из сторон зеркала плоская, другая вогнутая. Плоским зеркалом пользуются при дневном рассеянном свете, а вогнутым — при искусственном освещении.
Конденсор служит для конденсации пучка световых лучей, что обеспечивает наибольшее освещение исследуемого предмета. При микроскопировании с дневным светом конденсор необходимо поднять до уровня предметного столика; при искусственном освещении конденсор опускают до тех пор, пока при малом увеличении изображение источника света не появится в плоскости препарата. При микроскопировании неокрашенных препаратов конденсор следует также опустить.
|
|
|
Между зеркалом и конденсором помещается диафрагма, которая регулирует объем лучей, попадающих в объектив. Состоит диафрагма из стальных лепестков и при помощи рычага может суживаться или расширяться. Окрашенные препараты следует рассматривать при совершенно открытой диафрагме; при рассматривании же неокрашенных препаратов следует сузить отверстие диафрагмы. Объективы составляют наиболее ценную часть микроскопа. Они представляют собой систему двояковыпуклых линз, заключенных в металлическую оправу. Передняя (фронтальная) самая маленькая линза является главнейшей, производящей увеличение. Лежащие за ней линзы называются коррекционными, так как они предназначены для устранения недостатков оптического изображения.
Степень увеличения исследуемого объекта зависит от кривизны линзы объектива, которым мы пользуемся. Чем меньше кривизна линзы, тем меньше увеличение и, наоборот, — чем больше кривизна линзы, тем больше увеличение. Обычно объективы микроскопа имеют цифровое обозначение. В микроскопах старых систем объективы обозначались цифрами: 3, 7, 10,12. Это обозначение длины фокусного расстояния, которое зависит от кривизны линзы. В микроскопах новейших систем на оправе объективов обозначается даваемое ими увеличение: 8, 10, 20, 40, 60, 90. В микроскопах различают два типа объективов: сухие и иммерсионные, или погружные(immergo—погружаю). При исследовании микробов применяется исключительно иммерсионная или погружная система объективов. Эти объективыдают наибольшее увеличение по сравнению с другими объективами. Погружными их называют потому, что при работе с ним прибегают к погружению их в иммерсионную жидкость (кедровое масло). Обычно это делается так: каплю кедрового масла наносят на исследуемый объект, а затем при помощи макрометрического винта объектив погружают в эту капельку. Делается это для того, чтобы пространство между исследуемым объектом и объективом было заполнено кедровым маслом, которое конденсирует лучи, поступающие от препарата в объектив. Кедровое масло имеет примерно такой же коэффициент преломления световых лучей, как и стекло, и этим достигается наименьшее рассеивание световых лучей.
|
|
|
В отличие от иммерсионного объектива все другие объективы называются сухими, так как при работе они не погружаются в масло.
|
|
|
Окуляры (от слова oculus — глаз) имеют две линзы: верхняя линза называется глазной, нижняя — собирательной. Расстояние между линзами равно полусумме их фокусных расстояний. Следовательно, по длине окуляра можно приблизительно определить общее фокусное расстояние. А так как с уменьшением фокусного расстояния повышается увеличение окуляра, то более сильными будут короткие окуляры, более слабыми — длинные. В современных микроскопах на окулярах имеются цифры, указывающие на увеличение, которое они дают, например: Х7, Х10 Х15. Общее увеличение микроскопа равняется произведению увеличения объектива на увеличение окуляра. Так, например, комбинация иммерсионного объектива с показателем увеличения 90 и окуляром Х10 дает увеличение объекта в 900 раз.
Микроскопы, которыми мы обычно пользуемся, дают увеличение в 900—1000 раз. При пользовании такими микроскопами пределом видимости являются объекты размером не меньше 0,2 m.
Лаборант в своей практической работе должен помнить, что иммерсионный объектив требует особо бережного обращения с ним. Опускать этот объектив нужно осторожно, чтобы не раздавить стекла препарата, что влечет за собой порчу фронтальной линзы. Погружать иммерсионный объектив в каплю масла на предметном стекле надо под контролем глаза, наблюдая за этим сбоку, причем глаз должен находиться на уровне предметного столика. После погружения объектива в каплю масла, глядя в окуляр и пользуясь макрометрическим винтом, осторожно опускают тубус микроскопа еще ниже — до тех пор, пока не находят в поле зрения контуры препарата. Тогда оставляют в покое макрометрический винт и с помощью микрометрического винта устанавливают точное изображение объекта.
|
|
|
По окончании микрокопирования сначала поднимают тубус микроскопа, а затем снимают со столика препарат; фронтальную линзу осторожно вытирают мягкой тряпочкой, иногда смачивая ее бензином. Необходимо помнить что иммерсионная жидкость на воздухе образует трудно растворимую пленку, которая может вывести из строя дорогой оптический прибор – иммерсионный объектив.
ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОБОВ В ЖИВОМ СОСТОЯНИИ
Так как методы обнаружения жгутиков трудны, а определение подвижности у микробов служит целям их идентификации, то в повседневной лабораторной практике для определения подвижности пользуются наблюдением бактерий в живом состояния — в раздавленной или висячей капле.
Раздавленная капля. На середину предметного стекла наносят петлей или пипеткой каплю исследуемого материала; эту каплю накрывают покровным стеклом, осторожно закладывая его пинцетом, что бы в жидкости не образовалось пузырьков воздуха. Удачно сделанная капля заполняет все пространство между покровным и предметным стеклом, но при этом жидкость не выступает за края покровного стекла. Если требуется рассматривать препарат продолжительное время, то края покровного стекла предварительно смазывают вазелином.
Висячая капля. Каплю исследуемого материала наносят на середину обезжиренного покровного стекла. Затем покровное стекло быстро поворачивают каплей вниз и накладывают на предметное стекло с углублением («лункой») в середине. Капля должна свободно свисать в углубление, не соприкасаясь с его дном и краями (рис.17). Края выемки на предметном стекле следует предварительно смазать вазелином, таким образом, капля оказывается герметически закрытой во влажной камере и защищенной от высыхания.
Если исследованию подвергается плотный материал, то его предварительно эмульгируют с физиологическим раствором в стерильной пробирке или на стерильном часовом стекле, откуда затем и берут часть материала для приготовления висячей капли.
Различают движение поступательное, качательное, вращательное и т. д. При исследовании живых микробов следует отличать активную подвижность бактерий, свидетельствующую о наличии у них невидимых жгутиков, от пассивного молекулярного (броуновского) движения, свойственного всем взвешенным в жидкости мелким частицам (форменным элементам, зернышкам, неорганизованным пылинкам).
Нативные препараты микроорганизмов очень удобно изучать используя фазово-контрастное микроскопирование. Методика работы с такими микроскопами (или приспособлениями) приведена в некоторых практических руководствах (см. список литературы), а также в инструктивных материалах, прилагаемых к каждому микроскопу.
Размеры микрооранизмов можно измерить с помощью объкт- и окуляр-микрометров, технологию работы с которыми можно найти в инструкции по пользованию этими приборами.
Дата добавления: 2020-04-25; просмотров: 108; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!