Изучение гепатозащитного действия СЭ из V. abbreviate ( truncatula) при хронической экспериментальной патологии печени
Поскольку в клинической практике препараты чаще используются с лечебной целью на фоне уже сформировавшейся патологии, необходимо продемонстрировать терапевтическую эффективность нового средства, а также важно оценить его влияние на пролиферацию соединительной ткани, наблюдающуюся при хронических заболеваниях печени.
Лечебное действие СЭ при хронической алкоголизации в дозе 300 мг/кг в сравнении с карсилом в дозе 100 мг/кг изучали через 7, 14 и 21 день их применения после 60-дневного введения 40% этанола и затем совместно с ним.
Было установлено, что в результате 60-дневного введения алкоголя наблюдалось падение эффективности системы АОЗ и нарушение про-/антиоксидантного равновесия с преобладанием прооксидантной составляющей, т.е. развитие окислительного стресса. При этом отмечался рост содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови на 135%, в печени на 175% и повышение количества ДК в печени на 332%. Одновременно регистрировалось снижение в печени активности основных антиоксидантных ферментов: СОД - на 55%, каталазы - на 45%, ГП - на 47%, ГР - на 41% и Г-S-ТР - на 48%, а также Г-6-ФДГ - на 88%, участвующей в обеспечении глутатионредуктазной реакции восстановительными эквивалентами. Кроме этого, отмечалось усиление анаэробиоза (повышалось соотношение лактат/пируват на 100%) и падение содержания АТФ (-52%), т.е. развивался энергодефицит, что, как известно, способствует дополнительной стимуляции свободно-радикального окисления и может вызвать необратимые изменения и гибель клетки.
У крыс после 60-дневной алкоголизации регистрировалось достоверное повышение в сыворотке крови активности АлАт (+134%) и ЩФ (+72%), содержания общего билирубина (+53%), показателя ТП - на 104%, увеличивалось содержание ТРГ в сыворотке крови (+132%) и в печени (+70%), снижалась активность ХЭ в сыворотке крови на 48%. Эти изменения свидетельствовали о развитии цитолиза и холестаза гепатоцитов, жировой дистрофии, снижении белково-синтетической функции печени, развитии воспаления в этом органе и активации мезенхимы. Такие показатели, как содержание ГАГ в сыворотке крови и ОП в печени, увеличивались на 15% и 35% соответственно, но достоверных отличий от нормы выявлено не было.
При дальнейшем приеме алкоголя выявлена активация адаптационно-приспособительных механизмов, направленных на защиту против повреждающего фактора (рис.5). Это проявилось, прежде всего, в том, что повышались активности ГП и Г-S-ТР, снижалось содержание GSH в печени и увеличивались активности Г-6-ФД и ГР.
При лечебном применении СЭ наблюдалась более выраженная активация ГП и Г-S-ТР. В то же время у животных, леченных карсилом, отсутствовала активация Г-S-ТР и наблюдалась менее выраженная активация ГП. В результате уже через 14 дней лечения сухим экстрактом наблюдалась полная нормализация содержания продуктов ПОЛ, в то время, как при лечении карсилом нормализация их содержания происходила только к окончанию срока лечения.
У крыс, получавших только этанол, хотя и регистрировались изменения, направленные на восстановление ПОЛ, но все же содержание перекисных продуктов оставалось выше нормы, т.е. несмотря на развитие защитной реакции у этих животных, ее оказалось недостаточно для полного преодоления окислительного стресса.
У крыс, леченных СЭ, наблюдалось более выраженное снижение коэффициента окислительного стресса (1,73), чем у животных, леченных карсилом (7,27), что свидетельствовало о более полном восстановлении про-антиоксидантного равновесия у этих животных.
Рисунок 5-Влияние лечебного применения СЭ на НАДФН-GSH-зависимую систему печени крыс при хронической алкоголизации
На гистоморфологической картине печени контрольных животных выявлялись определенные патологические изменения, наиболее выраженные на 7-ой и 14-ый день дополнительного поения, но на 21 день эти изменения оказывались минимальными. Наличие восстановительных процессов нашло отражение и в изменении биохимических показателей состояния печени (снижение активности АлАт, некоторое снижение содержания ТРГ), но большинство показателей все же оставалось достоверно более высоким, чем в норме и, кроме того, нарастали явления фиброгенеза - увеличивалось содержание в печени ОП (+48%) и в сыворотке крови - ГАГ (+61%.
В отношении восстановления биохимических показателей лечебное действие СЭ оказалось более эффективным, чем карсила. При применении СЭ тормозилось образование элементов соединительной ткани: содержание ОП во все сроки лечения достоверно не отличалось от нормы, а содержание ГАГ в крови достоверно снижалось на 26% по сравнению с соответствующим контролем. Уменьшались и патогистологические изменения в печени: отмечалось уменьшение клеточной инфильтрации, отсутствовало фиброзирование портальных трактов, которое выявлялось в контроле на 14-ые сутки дополнительного введения этанола, а также признаки дистрофических изменений и сохранялось лишь умеренное расширение портальных вен и синусоидов.
Влияние СЭ на процесс фиброгенеза изучено также при хроническом СС14-гепатите, при котором было установлено четкое повышение количества ОП в печени по сравнению с нормальными значениями на 82% и ГАГ в крови - на 63%. На гистоморфологической картине также обнаруживалось замещение поврежденных гепатоцитов соединительнотканными тяжами.
В течение трех недель после воспроизведения модели хронического гепатита у нелеченных животных в печени достоверно повышался уровень ОП по сравнению с исходным контролем на 14 и 21 день на 48% и 63% соответственно, а содержание в сыворотке крови ГАГ на 39% и 44% соответственно, хотя темпы нарастания этих компонентов соединительной ткани несколько снижались.
Лечение хронического гепатита карсилом и СЭ препятствовало накоплению компонентов соединительной ткани на протяжении всего срока наблюдения. Но у животных, получавших карсил, к концу лечения на 21 сутки сохранялось повышенное количество ОП в гомогенате печени (+25%).
Через два месяца после лечения сухим экстрактом сохранялся стойкий лечебный эффект, полученный после окончания терапии - все основные биохимические показатели, характеризующие процессы цитолиза, холестаза, жирового перерождения, находились на уровне нормы, и отсутствовал процесс фиброгенеза. В группе животных, получавших карсил, сохранялись повышенными концентрация конъюгированного билирубина и активность ЩФ в сыворотке крови.
Довольно часто гепатопротекторная активность флавоноидов сочетается с желчегонным эффектом, что вносит определенный вклад в защиту печени. Нами установлено активирующее влияние СЭ на желчеобразовательную функции печени у здоровых животных и животных с поражением печени. В условиях острого СС14-гепатоза СЭ оказал нормализующие, более выраженное, чем у карсила, влияние на процессы образования и выделения желчи: увеличился объем желчи, увеличились содержание в желчи ЖК и холато-холестериновый коэффициент. У животных, леченных карсилом, концентрация ЖК не достигала уровня здоровых животных.
Общие выводы
1. Исследуемые флавоноиды и СЭ из V. abbreviate (truncatula) оказывают выраженное гепатопротекторное действие при поражении печени СС14 и длительной алкоголизации, уменьшая синдромы цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления, жировой дистрофии и печеночной недостаточности, вызванные развитием окислительного стресса.
2. На модели острого поражения печени СС14 у крыс установлено, что эффективной дозой гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина и карсила является доза 100 мг/кг, а СЭ- 300 мг/кг при испытании их в качестве гепатопротекторов.
3. Исследуемые вещества при лечебно-профилактическом введении в эффективных дозах в разной степени воздействуют на развитие основных патологических синдромов при СС14-гепатитогепатозе. В отношении устранения синдрома цитолиза флавицин, кверцетин и карсил проявляют более эффективное действие, чем гесперидин и диосмин. Но гесперидин, диосмин и флавицин превосходят кверцетин и карсил по влиянию на холестаз. Активацию мезенхимы кверцетин и карсил предупреждают более эффективно, чем флавицин, диосмин и гесперидин. Но флавицин и диосмин превышают действие кверцетина, карсила и гесперидина по влиянию на развитие синдрома печеночно-клеточной недостаточности. СЭ практически полностью нормализует все изученные показатели.
4. На фоне алкогольной интоксикации наибольшая эффективность лечебно-профилактического действия отмечается у флавицина и СЭ, которые практически полностью устраняют признаки поражения печени, а введение гесперидина в наименьшей мере нормализует показатели всех патологических синдромов, наблюдающихся при остром поражении этанолом. Как и при СС14-гепатитогепатозе, кверцетин и карсил превышают действие диосмина на цитолиз и мезенхимальное воспаление и дополнительно на белково-синтетическую функцию печени, но диосмин является более эффективным по воздействию на холестаз и метаболическую функцию печени (углеводный и липидный обмены), чем кверцетин и карсил.
5. При острых СС14 - и алкогольном поражениях печени самые высокие и близкие коэффициенты гепатопротекции имеют СЭ (95% и 97%) и флавицин (92% и 96%), а наименьший - гесперидин (65% и 38%). При СС14-гепатитогепатозе флавицин и СЭ достоверно превышают в 1,5 - 1,6 раза эффективность действия карсила (61%) и в 1, 2 раза - кверцетина (77%). При поражении печени этанолом флавицин и СЭ достоверно превышают эффективность действия и карсила (69%) и кверцетина (70%) в 1,4 раза. Действие флавицина и СЭ сходно как в качественном, так и количественном отношении.
6. Гистоморфологические исследования подтверждают наличие более выраженной гепатозащитной активности флавицина и СЭ по сравнению с карсилом при СС14-гепатитогепатозе и при алкогольном поражении печени, при введении которых признаки воспаления, нарушения микроциркуляции и жировой дистрофии, некрозы и нарушение цитоархитектоники печеночных балок, выражены в меньшей степени, чем у животных, получавших карсил.
7. Гесперидин, диосмин и флавицин обладают антиоксидантным действием in vitro, подавляя интенсивность Fe2+-индуцированного ПОЛ липосом в модельной системе, и по эффективности действия значительно уступают кверцетину: IС50 равно соответственно 7,0×10-2М, 4,9×10-2М, 4,9×10-3М и 6,3×10-5М.
8. При лечебно-профилактическом введении in vivo при острых токсических поражениях печени СС14 и этанолом индивидуальные флавоноиды, а также СЭ и карсил отличаются по влиянию на ферментативное звено АОЗ. Флавицин и СЭ способствуют нормализации практически всех показателей АОС, стимулируя активности ферментов, участвующих в регенерации НАДФН2 (ИЦДГ, Г-6-ФДГ, ГР). Диосмин в меньшей степени влияет на восстановление НАДФ+-редуктазной активности при обеих патологиях. Гесперидин, кверцетин и карсил не оказывают влияния не только на определенные звенья регенерации восстановительных эквивалентов (ИЦДГ, или МДГ, или Г-6-ФДГ, или ГР), но и ферменты, обеспечивающие детоксикацию перекисных продуктов (СОД, каталаза, ГП и Г-S-ТР).
9. По восстановлению равновесия в системе ПОЛ-АОС наибольшей эффективностью обладают флавицин и СЭ при обеих патологиях (коэффициент окислительного стресса близок к 1), которые хотя и в меньшей степени, чем кверцетин подавляют ПОЛ, но в большей степени способствуют сохранению активности антиоксидантных ферментов печени.
10. Установлена тесная обратная корреляция между коэффициентом окислительного стресса и процентом гепатопротекции, что указывает на первостепенное значение восстановления равновесия в системе про-антиоксиданты для защиты печени против действия токсических факторов. В его восстановлении важное значение имеет поддержание активности эндогенной ферментативной системы АОЗ.
11. Курсовое введение гесперидина, диосмина, флавицина и карсила здоровым животным в дозе 100 мг/кг приводит к некоторому снижению вторичных продуктов ПОЛ в крови и активности СОД, каталазы, и ГП в печени, но оказывает стимулирующее влияние на глутатионовую систему печени, повышая содержание GSH и активируя ферменты, участвующие в регенерации GSH (ГР и НАДФ+-редуктаза) и выполнении им защитных функций (Г-S-Т).
12. Исследуемые вещества улучшают энергообеспеченность клеток печени, увеличивают содержание АТФ, повышают N-деметилазную и n-гидроксилазную активностей в норме и в условиях острых поражений печени СС14 и этанолом.
13. При помощи метода ЭПР и косвенным путем показано, что гесперидин, диосмин, флавицин и кверцетин увеличивают содержание NO в норме, вероятно, через активирование eNOS и ограничивают гиперпродукцию NO, стимулированную СС14, а также обладают эндотелий протективным действием и повышают образование NO, сниженное в условиях моделирования эндотелиальной дисфункции. Фармакологическая модуляция синтеза NO флавоноидами может иметь существенное значение в проявлении ими гепатозащитных свойств.
14. СЭ из V. abbreviate (truncatula) в дозе 300 мг/кг обладает выраженным лечебным действием при поражении печени СС14 и этанолом, усиливая адаптационно-приспособительную реакцию, восстанавливая про-антиоксидантное равновесие, энергообмен, строение, метаболизм и функции печени, замедляя процесс фиброзирования, усиливая желчеобразовательную функцию печени в норме и в условиях патологии. По своей эффективности СЭ превышает действие карсила.
Дата добавления: 2019-07-15; просмотров: 101; | Поделиться с друзьями:
|
Мы поможем в написании ваших работ!
- контроль
экстракт
карсил
- на оси ординат - уровень интактных животных