Культивирование облигатных анаэробов
Пит среды, состав:
Пит.основа +дых.субстрат (глюкоза) + редуцирующий фактор (вещество, связывающее токсичные для анаэробов перекисные соединения)
Примеры: Среда Цейсслера (пит.агар+ глю+кровь).
Редуцирубщие факторы в важнейших пит.средах для анаэробов: среда Китт-Тароцци – кусочки паренхиматозных органов
Молоко по Тукаеву – казеин
Среда для контроля стерильности – тиогликолят натрия
Среда Вильсона-Блер – сульфит натрия
Чистая культура – популяция бактерий одного вида, выращенная на питательной среде
Для выделения ЧК необходимо получить изолированные колонии на плотной среде
Колонии имеют характерные культуральные свойства
Методы выделения
Посев по Коху
Высеивание на плотную среду
(Пастеровский метод нуждался в подтверждении методом Коха)
Исследуемый материал выносится мерно в расплавленный или остуженный пит.агар, тщательно перемешивается с пит.средой и выливается в пустую стерильную чашку Петри. После затвердевания агара чашка перемещается в термостат. Изолированные колонии вырастают на поверхности в среде и в ее толще («застывают, фиксируются внутри агара»)
ПО СОСУНОВУ: 1. Берется какой-то материал
2. Его титруем
Разводим. Готовим 10-ти кратное разведение
Физ р-р
Др. Пипеткой переносим 1 мл этого разведения в следующую пробирку, с каждой пробирки (концентрация будет снижаться), выносится мерно в чашки и добавл в расплавленный агар. Агар застывает, клетки разобщаются. В Термостате они начинают размножаться и вырастать в виде колоний.
|
|
|
Достоинства:
- Метод может использоваться для количественного определения м/о в исслед.материале (исп. В САНИТАРНОЙ МБ)
Недостатки:
- м/о растут как на поверхности среды, так и в ее толще, что затрудняет «откол» колони для последующего исследования
ПОСЕВ ИСТОНЧАЮЩИМ ШТРИХОМ
Исследуемый материал наносится на чашку Петри с питательной средой и распределяется бактериологической петлей на 3-4 сектора в виде штрихов
Количество м/о закономерно уменьшается от первого сектора к последнему.
после инкубации на одном из секторов получаем изолированные колонии
Достоинства:
- Техническая простота
- Эффективное разделение бактерий
- Есть много модификаций, кот.можно выбрать в завис.от исслед.материала
- Есть модификации, позволяющие провдить полуколичественные исследования (напр.метод Gold)
Недостатки:
- при большом кол-ве сопутствующей микрофлоры колонии искомых м/о могут располагаться в зоне сплошного роста сопутствующих м/о
ПОСЕВ ШПАТЕЛЕМ ПО ДРИГАЛЬСКОМУ
Исслед.материал наносится на пит.среду в чашке Петри и равномерно распределяется по поверхности при помощи бактериол. Шпателя
|
|
|
МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧК, основанный на различных бактериологических св-вах
1. Исп.селективных (селективно-дифференциальных) пит.сред
Внесение в пит.среду селективной добавки позволяет подавить рост сопутствующей микрофлоры, что облегчает получение изолированных колоний целевого м/о
Достоинства:
- возможность выделять м\о из смеси, в кот.сопутствующая микрофлора доминирует, превосходя целевой на неск.порядков
Недостатки:
- нет абсолютных селективных сред
- селектив.среда не явл. Оптимальной средой для целевого м/о
Это приводит к удлинению времени инкубации, изменению некоторх св-в, частичному подавлению
ОБРАБОТКА ИССЛЕДУЕМОГО МАТЕРИАЛА КИСЛОТОЙ (ИЛИ ЩЕЛОЧЬЮ) ПЕРЕД ПОСЕВОМ
Метод применяется при выделении кислото и щелочноустойчивых бактерий
Уничтожение сопутствующих м/о позволяет произвести высев на неселективную среду
Достоинства:
- высок.эффективн.при уничтожении контаминантов
- возможность не использ.селектив.среды
ПРОГРЕВАНИЕ ИССЛЕД.МАТЕРИАЛА ПРИ 80ГР.
Для выделения спорообразующих бактерий можно прогреть исследуемый материал 20мин при 80гр. Все вегетативные клетки бактерий (в т.ч.спорообразующих) погибнут, а споры сохранят жизнеспособность
Дальнейший высев можно осуществлять на неселективные среды
Достоинства:
- высок.эфф.удаления сопутствующей МФ
|
|
|
- возм. Исп. Неселективных пит.сред
ФИЛЬТРАЦИЯ ЧЕРЕЗ БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ФИЛЬТРЫ
Метод может быть исп.для выявл.м/о, размер кот.меньше чем сопутствующей МФ
в этом случае фильтр задерживает контаминанты,а целевой м\о проходит через поры фильтра к пит.среде
Достоинства:
- отстутствие подавления целевого м/о селективной средой
- снижение стоимости исследования (неселективная среда дешевле селективной)
Недостатки:
-ограниченное применение
- трудоемкость выше, чем при посеве на селективную среду
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АКТИВНОЙ ПОДВИЖНОСТИ НА АГАРОВЫХ СРЕДАХ
Метод Шукевича предназначен для выделения рода Proteus
Посев проводят в конденсатную воду свежескошенного пит.агара
За счет «роения» протей образует макроколонию на всей свободной поверхности агаровой среді
Достоинства:
- простота и высок.эфф
- низкая стоимость
Недостатки:
-огранич. Применение
Дата добавления: 2019-02-26; просмотров: 423; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!