ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПАРАФИНОВЫХ СРЕЗОВ ДЛЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Для приготовления гистологических срезов материал необходимо залить в определенную среду. Чаще всего с этой целью применяют парафин, целлоидин или желатин.
Парафин – хорошо растворяется в органических растворителях, плавится при температуре 54-56 градусов, легко режется, по структуре гомогенное вещество удобное для заливки. Преимущество парафина заключается в его дешевизне, пластичности материала, быстроте и в возможности приготовления тонких срезов, что может сохраняться неограниченное время в приготовленном виде. При заливке в парафин необходимо соблюдать два условия: материал должен быть полностью обезвожен и не должен содержать спирт. Исследуемый материал нужной плотности, обезвоженный в абсолютном спирте, для удаления спирта материал переносят в любой растворитель парафина. Для этой цели в качестве интермедиарного вещества чаще всего применяют хлороформ, бензол, сероуглерод, ксилол, толуол, цедрусовое масло. Среди перечисленных веществ лучше использовать хлороформ или бензол. Хлороформ наливают в темную (коричневую) бутылку, на дно которой кладут безводный хлористый кальций слоем толщиной 102 пальца и держат в темноте. Действие интермедиарного вещества длится 6-12 часов, в течении этого времени желательно сменить его 2-3 раза. При применении бензола вещество становится прозрачным, в случае неполного обезвоживания материала в середине его появляется белое помутнение.
|
|
|
Промежуточные вещества для депарафинизации. Рекомендуется применение второго промежуточного средства, растворяющего парафин, в котором материал выдерживают в течение 3-12 часов. Хлороформ или бензол-парфин лучше хранить в печке, чтобы они не охладились.
Для приготовления второго промежуточного вещества необходимо растворить парафин при температуре 45-48 градусов в применяемой жидкости до насыщения в качестве, которого могут быть хлороформ, бензол, сероуглерод, ксилол, толуол.
После промежуточных жидкостей, материал помешают на 2-3 (или 6) часов в парафин, сперва в более легкоплавкий - при температуре – 50-52 градуса, затем более тугоплавкий – при 54-56 градусов. Необходимая твер-дость достигается путем расплавления и смешения мягкого и твердого парафина.
Второй парафин также служит для заливки материала и приготовления блоков. Однако рекомендуется иметь чистый второй парафин такого же состава для заливки, так называемый «заливочный парафин». От качества «заливочного парафина» зависит способность материала к резке и качество срезов. Самый гомогенный парафин, дающий тонкие срезы получается путем нагревания до появления дыма и затем быстрого охлаждения слияния смешанного из мягкого и твердого парафина. При необходимости эту процедуру повторяют несколько раз, затем к охлажденному парафину прибавляют белый пчелиный воск в количестве 2-5 %. Далее из обрезков парафина с блоков прибавляя небольшое количество воска, расплавляя можно получить хороший гомогенный парафин.
|
|
|
Парафин необходимо держать в термостате в расплавленном виде, но при температуре не выше 54-55 градусов, так как при более высокой темпе-ратуре увеличивается способность парафина к сморщиванию. После приго-товления парафина следует заливка материала в специальные формы. Могут быть использованы L-образные металлические формы или бумажные, или заливка в чашках Петри с распределением материала по секторам.
Исследуемый материал, уложенный в «заливочную форму» заливают парафином, нагретым до 58-60 градусов, после чего форму погружают до краев в холодную воду (10-18 градусов) и подувают ртом до появления корки достаточной толщины.
Применение холодной воды для охлаждения блока очень важно, иначе парафин становится зернистым.
Во всех случаях необходимо проводить маркировку материала и её регистрацию в журналах.
После заливки материала в парафин приготавливают гистологические блоки, путем вырезки лишнего парафина вокруг материала и насаживанием его на деревянные колодки, которые удобны для фиксации в микротоме для резки материала. Срезы изготавливают толщиной 2-4 микрон, далее опускают парафиновые срезы (ленты) в теплую воду, чтоб они там достаточно хорошо расправились, после чего припоровальной иглой аккуратно наклеивают на тщательно обезжиренные предметные стекла для последующей окраски материала. Необходимо следить, чтобы не расплавился парафин на срезах в сильно горячей воде.
|
|
|
Предметные стекла, со срезами подготовленные для окраски должны иметь соответствующие обозначения или маркировку. Предметные стекла после очищения хранят в чистом спирте, откуда их по мере необходимости вынимают чистым пинцетом. Для наклейки срезов обычно применяют яичный белок с глицерином, хотя существуют и другие способы.
Замороженные срезы в большинстве случаев окрашивают без наклеивания или их наклеивают на предметное стекло, намазанное белком с глицерином. Срезы хранят в 30% спирте, отсюда их извлекают на предметное стекло и расправляют их при помощи смоченной 30% спиртом фильтровальной бумаги. Потом эти срезы переносят на 1 минуту в смесь, состоящую из 50,0 мл 50% спирта и 7,5 мл формалина, затем тщательно промывают дистиллированной водой, далее окрашивают по общеизвестной методике. Парафиновые срезы, подготовленные для окраски, нуждаются в специальной обработке.
Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 2743; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!